高效液相色譜儀(0002)ppt課件

1、高效液相色譜儀的任務(wù)原理樣品溶液中的各組分在兩相(流動(dòng)相、固定相)中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運(yùn)動(dòng)時(shí), 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在挪動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分別成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出, 經(jīng)過檢測器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜方式打印出來。高效液相色譜儀的系統(tǒng)組成 高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。 儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)。柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1-6mm,柱長5-40cm。開展趨勢減小填料粒度和柱徑以提高柱效。高效液

2、相色譜的特點(diǎn) 高壓壓力可達(dá)150300 kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 kg/cm2以上。 高速流速為0.110.0 mL/min。 高效塔板數(shù)可達(dá)5000/米。在一根柱中同時(shí)分別成份可達(dá)100種。 高靈敏度紫外檢測器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)耗費(fèi)樣品少。 主要分別類型 液-固吸附色譜：適用于分別相對分子質(zhì)量中等的油性試樣。 液-液分配色譜：主要根據(jù)流動(dòng)相與固定相的極性差別分別。 離子交換色譜：運(yùn)用于離子及可離解的化合物。 離子對色譜：離子結(jié)合構(gòu)成疏水性離子化合物。 排阻色譜：按分子大小分別。出峰速度？ 親和色譜：利用生物大分子與固定相外表存在的某種特異性親和力，進(jìn)展選擇分別。高效液相色

3、譜儀的運(yùn)用 高效液相色譜法只需求樣品能制成溶液, 不受樣品揮發(fā)性的限制,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因此可以分別熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。 由于HPL C具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用, 流出組分易搜集等優(yōu)點(diǎn),因此被廣泛運(yùn)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研討、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與構(gòu)造儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的開展方向。 液相色譜- 質(zhì)譜連用技術(shù)遭到普遍注重, 如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等; 液相色譜- 紅外光譜連用也開展很快,如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類, 海水中的不揮發(fā)烴類, 使環(huán)境污染分析得到新的開

4、展。硅膠層析后活性樣品的液相分別圖譜硅膠層析后活性樣品的液相分別圖譜色譜圖例如色譜圖例如操作過程中應(yīng)留意的事項(xiàng) 流動(dòng)相 1、 流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后運(yùn)用，過濾時(shí)留意區(qū)分水系膜和油系膜的運(yùn)用范圍； 2、 水相流動(dòng)相需經(jīng)常改換普通不超越2天，防止長菌蛻變； 3、 運(yùn)用雙泵時(shí)，A、B、C、D四相中，假設(shè)所用流動(dòng)相中有含鹽流動(dòng)相，那么A、D進(jìn)液口位于混合器下方放置含鹽流動(dòng)相，B、C進(jìn)液口位于混合器上方放置不含鹽流動(dòng)相；A、B、C、D四個(gè)儲(chǔ)液器中其中一個(gè)為棕色瓶，用于存放水相流動(dòng)相。 樣品 1、 采用過濾或離心方法處置樣品，確保樣品中不含固體顆粒； 2、 用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱假設(shè)為反相柱，那么極性比流動(dòng)相大；假設(shè)為正相柱，那么極性比流動(dòng)相小的溶劑制備樣品溶液，盡量用流動(dòng)相制備樣品液； 3、手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量盡量小，運(yùn)用定量管定量時(shí)，進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的35倍； 色譜柱： 1、 運(yùn)用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的闡明書，留意適用范圍，如pH值范圍、流動(dòng)相類型等； 2、 運(yùn)用符合要求的流動(dòng)相； 3、 運(yùn)用維護(hù)柱； 4、 如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱運(yùn)用后，先用水或低濃度甲醇水如5甲醇水溶液，再用