尿液蛋白測定

1、標(biāo)題：尿液蛋白測定版本號：A修訂號：0文件編號：HRYY-SOP-LJ-04發(fā)布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日發(fā)布部門：管理層編制人：張麗君審核人：張麗君批準(zhǔn)人：錢曉偉頁碼：第1 頁 ， 共 5 頁尿液蛋白定性試驗(yàn)1 檢驗(yàn)?zāi)康恼Ｇ闆r下，腎小球?yàn)V過膜的孔徑屏障及電荷屏障使只有相對分子質(zhì)量低于70000、主要帶正電荷的蛋白質(zhì)可濾入原尿中，而近端腎小管通過胞飲作用可重吸收原尿中的蛋白質(zhì)。由于蛋白質(zhì)的腎小管最大重吸收率極低，一旦腎小球?yàn)V過增高或腎小管分泌增多，就使腎小管蛋白質(zhì)重吸收達(dá)到飽和，從而形成蛋白尿。因此檢查尿液蛋白含量變化對腎臟疾病的診斷，觀察疾病的變化及治療效

2、果具有重要參考價(jià)值。2 檢測原理尿液蛋白定性測定方法主要有干化學(xué)法、加熱醋酸法和磺基水楊酸法。干化學(xué)法測定尿液蛋白的原理是在一定的條件下(pH為3.2時(shí))，溴酚藍(lán)產(chǎn)生出陰離子，與帶陽離子的蛋白質(zhì)(主要是白蛋白)結(jié)合發(fā)生顏色變化。加熱醋酸法測定尿液蛋白的原理是加熱煮沸可使蛋白質(zhì)凝固變性，加酸使尿pH接近蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(pH5左右)時(shí)，有利于變性蛋白質(zhì)的沉淀。磺基水楊酸法測定尿液蛋白的原理是磺基水楊酸是一種生物堿試劑，在略低于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的酸性環(huán)境下，其磺柳酸根陰離子可與蛋白質(zhì)的氨基酸殘端陽離子相結(jié)合，成為不溶性的蛋白鹽而沉淀。3 標(biāo)本3.1 收集患者清晨新鮮尿液10ml。3.2 標(biāo)本采集后應(yīng)立即送

3、到臨床檢驗(yàn)科體液檢驗(yàn)室。3.3 不能及時(shí)測定的標(biāo)本應(yīng)于28冰箱保存。4 設(shè)備和試劑4.1 干化學(xué)法：羅氏公司的Miditron Junior尿液分析儀(主機(jī)號：8102061)及專用試帶。4.2 加熱醋酸法：5%醋酸溶液；50%醋酸溶液；飽和氯化鈉溶液。4.3 磺基水楊酸法：100g/L磺基水楊酸乙醇溶液：取磺基水楊酸20g，加水至100ml，取此溶液與等量95%乙醇或甲醇液混合。標(biāo)題：尿液蛋白測定版本號：A修訂號：0文件編號：HRYY-SOP-LJ-04發(fā)布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日發(fā)布部門：管理層編制人：張麗君審核人：張麗君批準(zhǔn)人：錢曉偉頁碼：第2 頁 ，

4、 共 5 頁5 干化學(xué)法的校準(zhǔn)步驟5.1 Miditron Junior尿液分析儀每1月對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)一次。5.2 儀器校準(zhǔn)的操作步驟，詳見Miditron Junior尿液分析儀儀器登記文件。6 操作步驟6.1 干化學(xué)法操作步驟樣本的準(zhǔn)備：將編好號的樣品放在儀器相應(yīng)的標(biāo)本位置； 試劑的檢查：儀器開機(jī)后，檢查各種試劑的位置、體積、批號等，確認(rèn)無誤后方可進(jìn)行測定；操作方法：測定樣本項(xiàng)目必須在儀器校準(zhǔn)通過的情況下進(jìn)行，其操作過程操作步驟詳見Miditron Junior尿液分析儀儀器登記文件。6.2 加熱醋酸法操作步驟取15×150mm試管一支，加尿液約8毫升到試管2/3處，用手指(或試

5、管夾)捏住試管底部，將試管口向上斜置在火焰上，使火焰直接在尿液斜面下約12公分處加熱，煮沸；輕輕直立試管，在黑色背景下觀察煮沸部分有無白色混濁；滴加5醋酸溶液34滴，再煮沸后，立即觀察結(jié)果。若尿液有蛋白則加酸后仍顯混濁，若為鹽類，加酸后即變清亮；結(jié)果判斷：陰性(-，無蛋白)：清亮無混濁；微量(±，10mg/dl以下)：僅于黑色背景時(shí)可見白色混濁；弱陽性(+，1050mg/dl)：白色輕度混濁無顆粒及絮狀沉淀；陽性(2+，50200mg/dl)：明顯白色混濁有顆粒但無絮狀沉淀；強(qiáng)陽性(3+，200500mg/dl)：大量絮片狀混濁一般不見凝固塊出現(xiàn)；極強(qiáng)陽性(4+，500mg/dl以上

6、)：煮沸后凝固成塊狀有大量絮片狀沉淀。6.3 磺基水楊酸法操作步驟1 試管法：取小試管2支，各加清晰弱酸性尿液35毫升，于一試管內(nèi)加100g/L磺柳酸溶液34滴，輕輕混勻，1分鐘后觀察結(jié)果。另一試管不加試劑作對照。2 凹玻片法：在凹玻片的兩個(gè)凹孔內(nèi)，各加清晰尿液35滴(約0.2毫升)，于一凹孔內(nèi)滴加100g/L磺柳酸溶液1滴，于另一凹孔內(nèi)不加試劑作對照，在黑色背景下，1分鐘后觀察結(jié)果。3 結(jié)果判斷：陰性(-)：不顯混濁，尿液外觀仍清晰透明；微量(±)：可見輕微混濁，隱約可見；弱陽性(+)：明顯白色混濁，但無顆粒出現(xiàn)；陽性(2+)：稀簿乳樣混濁出現(xiàn)顆粒；強(qiáng)陽性(3+)：乳濁，標(biāo)題：尿液

7、蛋白測定版本號：A修訂號：0文件編號：HRYY-SOP-LJ-04發(fā)布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日發(fā)布部門：管理層編制人：張麗君審核人：張麗君批準(zhǔn)人：錢曉偉頁碼：第3 頁 ， 共 5 頁有絮片狀沉淀；極強(qiáng)陽性(4+)：絮狀混濁，有大凝塊下沉。7 質(zhì)量控制干化學(xué)法每天操作過程中應(yīng)使用自配的尿液質(zhì)控液至少做一次質(zhì)量控制。請參見Miditron Junior尿液分析儀儀器登記文件。加熱醋酸法和磺基水楊酸法試驗(yàn)過程中應(yīng)分別做一次陰性、陽性對照。8 干擾因素尿液標(biāo)本必須新鮮，變質(zhì)的尿液會使尿pH發(fā)生變化，或者尿液本身過酸、過堿都會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)病人服用奎寧、奎寧丁和嘧啶

8、等藥物時(shí)，引起尿液呈強(qiáng)堿尿(pH9.0)，超過了試劑帶本身的緩沖能力，會使干化學(xué)法出現(xiàn)假陽性結(jié)果；而用磺柳酸法和加熱醋酸法做尿蛋白定性時(shí)，因尿液過堿遠(yuǎn)離蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。不同的尿蛋白測定方法對病人尿液內(nèi)不同類型蛋白質(zhì)檢測的敏感性不同，測定結(jié)果也不相同。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)尿中球蛋白濃度為4000mg/L以下時(shí)，干化學(xué)法蛋白定性為陰性，只當(dāng)其濃度達(dá)5500mg/L時(shí)，才出現(xiàn)可疑反應(yīng)；白蛋白、球蛋白比值為1:2的蛋白尿，蛋白濃度高達(dá)2000mg/L時(shí)才會出現(xiàn)陽性(+)反應(yīng)，干化學(xué)法測量球蛋白的敏感性僅是白蛋白的1/1001/50。磺柳酸定性法對球蛋白反應(yīng)的靈敏度亦較白蛋白低，濃度同時(shí)為2000m

9、g/L時(shí)，白蛋白出現(xiàn)陽性(+)反應(yīng)，球蛋白僅為陽性(+)反應(yīng)；在白蛋白、球蛋白尿中，球蛋白比例增大，則陽性程度減弱。加熱醋酸定性法和雙縮脲定量法可以對白蛋白、球蛋白顯示同樣的敏感性多種物質(zhì)(多為藥物)可使尿蛋白不同檢查方法呈現(xiàn)出假陽性和假陰性結(jié)果。尿液中青霉素濃度達(dá)到一定濃度時(shí)，可對磺柳酸法產(chǎn)生假陽性；對干化學(xué)法產(chǎn)生假陰性。除此之外，尿中含有高濃度有機(jī)碘造影劑(如膽影葡胺、泛影葡胺、碘番酸)及尿酸鹽時(shí)，磺柳酸法可呈假陽性，而對干化學(xué)和加熱醋酸法影響較小。為避免因鹽類析出所致假性混濁，因此操作時(shí)必須遵照“加熱加酸再加熱”的程序，以保證檢出微量蛋白質(zhì)。加入的醋酸量也要適當(dāng)，過多或過少均可使陽性反應(yīng)

10、程度減弱。加酸過量以至遠(yuǎn)離蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，可使陽性反應(yīng)程度減弱或出現(xiàn)假陰性；加酸太少(或尿液太堿)達(dá)不到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)，也可呈假陰性。尿中含高濃度尿酸或尿酸鹽時(shí)，可呈假陽性。但出現(xiàn)反應(yīng)與尿蛋標(biāo)題：尿液蛋白測定版本號：A修訂號：0文件編號：HRYY-SOP-LJ-04發(fā)布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日發(fā)布部門：管理層編制人：張麗君審核人：張麗君批準(zhǔn)人：錢曉偉頁碼：第4 頁 ， 共 5 頁白不同，加試劑12分鐘后出現(xiàn)白色點(diǎn)狀物，向周圍呈刺狀突起，并慢慢形成霧狀，加熱或加堿可迅速消失。9 計(jì)算Miditron Junior尿液分析系統(tǒng)會自動地計(jì)算出結(jié)果。10 生物參考值區(qū)

11、間健康人尿液蛋白定性試驗(yàn)呈陰性。11 實(shí)驗(yàn)室解釋11.1 生理性蛋白尿或無癥狀性蛋白尿生理性蛋白尿指泌尿系統(tǒng)并無器質(zhì)性病變，而是由于各種體內(nèi)環(huán)境因素對正常機(jī)體的影響所導(dǎo)致的尿蛋白含量增多，分為功能性蛋白尿和體位性(直立性)蛋白尿。功能性蛋白尿：功能性蛋白尿是指機(jī)體劇烈運(yùn)動、發(fā)熱、低溫刺激、精神緊張、交感神經(jīng)興奮等所致的暫時(shí)性輕度的蛋白尿。其形成機(jī)理可能是由于上述諸因素使腎血管痙攣或充血，導(dǎo)致腎小球毛細(xì)血管壁的通透性增加。一旦誘發(fā)因素消失，尿蛋白也迅速消失，此類尿蛋白定量試驗(yàn)0.5g/24小時(shí)尿，多見于青少年。體位性蛋白尿：又稱直立性蛋白尿，是指由于直立位或腰部前突時(shí)引起的輕度或中度蛋白尿。其特

12、點(diǎn)為夜間尿蛋白定性為陰性，起床活動若干時(shí)間后出現(xiàn)蛋白尿，再平臥后又轉(zhuǎn)為陰性，常發(fā)生于青少年，一般隨年齡增長而消失。此種蛋白尿的發(fā)生機(jī)理尚不完全明了，可能與直立時(shí)前突的脊柱壓迫腎靜脈；直立時(shí)由于腎向下移動，腎靜脈被動扭曲，而使腎臟處于暫時(shí)瘀血狀態(tài)，淋巴血流受阻有關(guān)。此類蛋白尿定性試驗(yàn)陽性可達(dá)(+)，甚至(+)，但臥床休息后又消失。11.2 病理性蛋白尿病理性蛋白尿指泌尿系統(tǒng)因器質(zhì)性病變，尿內(nèi)持續(xù)出現(xiàn)蛋白而言。導(dǎo)致蛋白尿的原因很多，通?？蓺w納為以下5種。11.2.1 腎小球性蛋白尿：腎小球性蛋白尿是由于腎小球?yàn)V過膜受損而使通透性增加，濾出較多的血漿蛋白，超過了腎小管重吸收能力。此型蛋白尿最為常見，

13、蛋白尿以白蛋白為主，尿蛋白定量常大于2g/24小時(shí)，主要見于腎小球疾病如急性腎小球腎炎，某些繼發(fā)性腎病如糖尿病腎病，免疫復(fù)合物病如SLE等。 腎小管性蛋白尿：腎小管性蛋白尿是由于炎癥或中毒引標(biāo)題：尿液蛋白測定版本號：A修訂號：0文件編號：HRYY-SOP-LJ-04發(fā)布日期：2010年06月06日生效日期：2010年07月01日發(fā)布部門：管理層編制人：張麗君審核人：張麗君批準(zhǔn)人：錢曉偉頁碼：第5 頁 ， 共 5 頁起近曲小管對低分子量蛋白質(zhì)的重吸收障礙而導(dǎo)致的以低分子量蛋白質(zhì)為主的蛋白尿。此類的特點(diǎn)是以2微球蛋白、溶菌酶等增多為主，白蛋白正?；蜉p度增多，主要見于腎盂腎炎，間質(zhì)性腎炎，腎小管性酸

14、中毒、重金屬(汞、鎘、鉍)中毒等。11.2.3 混合性蛋白尿：混合性蛋白尿是由于腎病同時(shí)累及腎小球和腎小管而產(chǎn)生的蛋白尿。此類特點(diǎn)是白蛋白、低分子量蛋白質(zhì)和高分子量蛋白質(zhì)同時(shí)增多，主要見于腎小球疾病后期如慢性腎炎、慢性腎功能不全，全身性疾病同時(shí)侵犯腎小球和腎小管如狼瘡腎炎、多發(fā)性骨髓瘤等。11.2.4 溢出性蛋白尿：溢出性蛋白尿主要是血循環(huán)中出現(xiàn)低分子量蛋白質(zhì)(如游離血紅蛋白、肌紅蛋白及溶菌酶)或本-周氏蛋白過多，腎小球?yàn)V過及腎小管重吸收功能均正常而溢出尿液中。此類主要見于多發(fā)性骨髓瘤，肌肉嚴(yán)重?fù)p傷或急性血管內(nèi)溶血，髓性單核細(xì)胞白血病等。11.2.5 組織性蛋白尿：組織性蛋白尿是指在尿液形成過程中，腎小管代謝產(chǎn)生的和腎組織破壞分解的蛋白質(zhì)，以及炎癥或藥物刺激泌尿系統(tǒng)分泌的蛋白(如Tamm-Horsfall糖蛋白等)。12 異常結(jié)果處理尿液蛋白定性試驗(yàn)異常結(jié)果需與臨床診斷相符合，不符合的