2015-2016年人教版高中生物選修1習(xí)題-專(zhuān)題5-課題3血紅蛋白的提取和分離

1、課題3血紅蛋白的提取和分離知識(shí)就理防一、凝膠色譜法血紅蛋白的分離方法1.概念凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，也稱(chēng)作分配色譜法。2.原理形態(tài)：微小的多孔球體(1)凝膠組成：大多數(shù)由多糖類(lèi)化合物構(gòu)成結(jié)構(gòu)：內(nèi)部有許多貫穿的通道(2)分離原理：相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)：容易講入凝膠內(nèi)部的通道,路程較長(zhǎng),移動(dòng)速度較慢，通過(guò)凝膠柱的時(shí)間較長(zhǎng)。相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)：無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快，通過(guò)凝膠柱的時(shí)間較短。、緩沖溶液1 .作用在一定范圍內(nèi)，緩沖溶液能夠抵制外界的酸和堿對(duì)溶液pH的影響，維持pH基本不變。2 .配制通常由12種緩沖劑溶

2、解于水中配制而成，調(diào)節(jié)緩沖劑的便用比例就可以制得在不同pH范圍內(nèi)使用的緩沖液。三、電泳血紅蛋白的分離或鑒定方法1 .概念帶電粒子在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。2 .原理(1)許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團(tuán),在一定的pH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電。(2)在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。(3)電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、形狀的不同、使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。四、蛋白質(zhì)的提取和分離過(guò)程蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。士*刮提,號(hào)經(jīng)知能提升&a

3、mp;一、選擇題1 .使用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)中，相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的行進(jìn)過(guò)程，可表示為下圖中(B)解析：凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)能進(jìn)入凝膠內(nèi)部通道，路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢；相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)，路程較短，移動(dòng)速度較快，首先洗脫出來(lái)。2 .使用SDS一聚丙烯酰胺電泳的過(guò)程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于(B)A.電荷的多少B.分子的大小C.肽鏈的多少D.分子形狀的差異解析：SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物，SDS所帶的負(fù)電荷量大大超過(guò)蛋白質(zhì)分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同蛋白質(zhì)間的電荷差別，使電泳遷移率完

4、全取決于分子的大小。3 .在血紅蛋白的整個(gè)提取過(guò)程中，不斷用磷酸緩沖液處理的目的是(D)A.防止血紅蛋白被氧氣氧化B.血紅蛋白是一種堿性物質(zhì)，需磷酸中和C.磷酸緩沖液會(huì)加速血紅蛋白的提取過(guò)程D.讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)解析：磷酸緩沖液的作用是穩(wěn)定pH，從而維持血紅蛋白的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。4蛋白質(zhì)的分離與純化是蛋白質(zhì)研究的重要技術(shù)。下列有關(guān)敘述不正確的是(A)A根據(jù)蛋白質(zhì)分子不能透過(guò)半透膜的特性，可將樣品中各種不同的蛋白質(zhì)分離B根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷性質(zhì)的差異及分子大小等，可通過(guò)電泳分離蛋白質(zhì)C根據(jù)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小，可通過(guò)凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)D根據(jù)蛋白質(zhì)的分子大小、密度不同

5、，可通過(guò)離心沉降法分離蛋白質(zhì)5在提取血紅蛋白的樣品處理階段，洗滌紅細(xì)胞十分重要，其目的是(B)A讓紅細(xì)胞破裂，釋放血紅蛋白B洗去血漿蛋白C防止血液凝固D保證紅細(xì)胞的正常形態(tài)解析：血液中含有多種蛋白質(zhì)，除紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白，血漿中還含有多種蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)在血紅蛋白釋放出后會(huì)與其混合，需要在紅細(xì)胞破裂前將其除去。6 蛋白質(zhì)提取和分離分為哪幾步(C)A樣品處理、凝膠色譜操作、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳B樣品處理、凝膠色譜操作、純化C.樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定D樣品處理、純化、粗分離、純度鑒定解析：蛋白質(zhì)的提取和分離分為樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定四步。A中凝膠色譜操作及SDS聚丙烯酰胺

6、凝膠電泳為實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的技術(shù)。7 下列對(duì)凝膠電泳的相關(guān)認(rèn)識(shí)，錯(cuò)誤的是(A)A蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷移率只取決于分子的大小8 蛋白質(zhì)在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷移率完全取決于分子的大小C.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳不僅用于蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定，還可用于蛋白質(zhì)混合組分的分離D.凝膠中加入SDS可以消除凈電荷對(duì)遷移率的影響解析：SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)分子所帶的負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)天然蛋白質(zhì)分子的負(fù)電荷，消除了不同蛋白質(zhì)分子的電荷效應(yīng)，使蛋白質(zhì)分子相對(duì)遷移率的大小完全取決于相對(duì)分子質(zhì)量的高低。8 在血紅蛋白的提取和分離實(shí)驗(yàn)中，下列操作正確的是(A)A分離紅細(xì)胞時(shí)需去除上層透明

7、的黃色血漿B紅細(xì)胞釋放出血紅蛋白時(shí)只需加入蒸餾水C分離血紅蛋白溶液是低速短時(shí)間離心D洗脫時(shí)，待紅色蛋白質(zhì)下移即開(kāi)始收集流出液解析：分離紅細(xì)胞時(shí)要及時(shí)除去血漿蛋白。釋放紅細(xì)胞時(shí)需要加入蒸餾水和甲苯。分離血細(xì)胞時(shí)，要短時(shí)低速離心，即一般為500r/min,離心2min,否則白細(xì)胞會(huì)一同沉淀，達(dá)不到分離效果。分離血紅蛋白時(shí)要高速長(zhǎng)時(shí)間離心，以2000r/min的速度離心10min。洗脫時(shí)待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端用試管收集流出液。9 以下關(guān)于豬血紅蛋白提純的描述，不正確的是(D)A洗滌血紅細(xì)胞時(shí)，使用生理鹽水可以防止紅細(xì)胞破裂B豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和細(xì)胞核，提純時(shí)雜蛋白較少C血紅蛋白的顏色可用

8、于凝膠色譜法分離過(guò)程的監(jiān)測(cè)D在凝膠色譜法分離過(guò)程中，血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動(dòng)慢解析：在凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過(guò)程中，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢；而相對(duì)分子質(zhì)量較大的分子無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快。所以血紅蛋白分子比相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜分子移動(dòng)速度要快。10 下列有關(guān)提取和分離血紅蛋白的敘述，錯(cuò)誤的是(B)A樣品的處理就是通過(guò)一系列操作收集到血紅蛋白溶液B通過(guò)透析可以去除樣品中分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)，此為樣品的粗提取C可通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化D可通過(guò)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳

9、鑒定血紅蛋白的純度解析：粗分離即透析，其目的是除去樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)，B錯(cuò)誤。二、非選擇題11 如今人類(lèi)已跨入了蛋白質(zhì)時(shí)代，對(duì)蛋白質(zhì)的研究和應(yīng)用，首先需要獲得高純度的蛋白質(zhì)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1) 蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：、和純度鑒定。(2)如果要從紅細(xì)胞中分離出血紅蛋白，實(shí)驗(yàn)前取新鮮血液要在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，這樣做的目的是(3) 血紅蛋白的提取又可以細(xì)分為：紅細(xì)胞的洗滌、分離血紅蛋白溶液和。其中分離血紅蛋白溶液時(shí)需要用到(儀器)分離出下層紅色透明液體。(4)裝填凝膠色譜柱時(shí)，要注意色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)有氣泡必須重新裝。這是因?yàn)?5)欲探究色譜柱的高度是

10、否影響蛋白質(zhì)分離的因素，應(yīng)把作為自變量，把作為無(wú)關(guān)變量，把作為_(kāi)因變量。答案：(1)樣品處理粗分離純化(2)防止血液凝固(3)血紅蛋白的釋放透析分液漏斗(4)氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果(5)色譜柱的高度變化緩沖液的用量和pH、樣品的用量、溫度等因素大小不同的蛋白質(zhì)分子的間距12 紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成的。我們可以選用豬、牛、羊等動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來(lái)提取和分離血紅蛋白，請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：(1)實(shí)驗(yàn)前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來(lái)，馬上進(jìn)行離心，收集血紅蛋白溶液。其中加入檸檬酸鈉的目的是此過(guò)程即是樣品處理，它應(yīng)

11、包括紅細(xì)胞洗滌、分離血紅蛋白溶液。洗滌紅細(xì)胞的目的是(2)收集的血紅蛋白溶液在透析袋中透析，這就是樣品的粗分離。透析的目的是透析的原理是(3)然后通過(guò)凝膠色譜法將樣品進(jìn)一步純化，最后經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。其中通過(guò)凝膠色譜法將樣品純化的目的是解析：(1)檸檬酸鈉是一種抗凝劑，加入檸檬酸鈉可以防止血液凝固；樣品處理包括紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液；洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白，以利于后續(xù)步驟的分離純化。(2)透析袋一般是用硝酸纖維素制成的，透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而將大分子保留在袋內(nèi)，透析可以去除樣品中分子量較小的雜質(zhì)或用于更換樣品的緩沖液。(3)凝膠色譜法是

12、根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的方法，因此，通過(guò)用凝膠色譜法去除相對(duì)分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)。答案：(1)防止血液凝固血紅蛋白的釋放去除雜蛋白(2)去除相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而大分子則保留在袋內(nèi)(3)通過(guò)凝膠色譜法去除相對(duì)分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)13.血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分，負(fù)責(zé)血液中O2或CO2的運(yùn)輸。請(qǐng)根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問(wèn)題。(1)將實(shí)驗(yàn)流程補(bǔ)充完整。(2)凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)分離蛋白質(zhì)。(3)洗滌紅細(xì)胞的目的是去除,洗滌干凈的標(biāo)志是（4）分離血紅蛋白時(shí)，由上到下第層是血紅蛋白水溶液（5）下面是凝膠色譜法分離血紅蛋白時(shí)樣品的加入示意圖，正確的加樣順序是。11（6）如果紅色區(qū)帶,說(shuō)明色譜柱制作成功。解析：（1）樣品處理包括：紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液。凝膠色譜操作包括：凝膠色譜柱的制作、凝膠色譜柱的裝填、樣品的加入和洗脫。（2）凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)。（3）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白，洗滌干凈的標(biāo)志是上清液中沒(méi)有黃色。（4）分離血紅蛋白時(shí)，可明顯看到試管中的溶液分為4層：第一層為無(wú)色透明的甲苯層；