毛細管電泳的使用

1、高效毛細管電泳儀的使用與維護基本原理 毛細管電泳毛細管電泳(CE)又稱高效毛細管電泳高效毛細管電泳(HPCE),是指離子或帶電粒子以毛細管為分離室,以高壓直流電場為驅動力,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的液相分離分析技術。 高效毛細管電泳的柱效遠高于高效液相色譜，理論塔板數(shù)高達幾十萬塊/米，特殊柱子可以達到數(shù)百萬。特特 點點 1.儀器簡單、易自動化儀器簡單、易自動化 電源、毛細管、檢測器、檢測池 2.分析速度快、分離效率高分析速度快、分離效率高 在3.1min內分離36種無機及有機陰離子，4.1min內分離了24種陽離子；分離柱效：105107萬/m理論塔板數(shù)； 3.操作

2、方便、消耗少操作方便、消耗少 進樣量極少，水介質中進行； 4.應用范圍極廣應用范圍極廣 有機物、無機物、生物、中性分子；生物大分子等； 分子生物學、醫(yī)學、藥學、化學、環(huán)境保護、材料等；分離原理分離原理電泳儀電泳儀進樣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)CL1020 高效毛細管電泳儀北京華陽利民儀器有限公司北京華陽利民儀器有限公司www.huayanglimin .com儀器組成 CL101A 高壓電源 CL1020 紫外檢測器 CT 數(shù)據(jù)采集及處理工作站 毛細管電泳檢測池1. 電泳箱開關 5.毛細管 9 .液晶顯示屏 13. 檢測池 17.清洗器2. 電泳分離支

3、架 6. 進樣支架 10. 數(shù)字按鍵 14.高壓電源負極3. 緩沖溶液瓶 7.檢測器開關 11. 氘燈 15.高壓負極插座4. 高壓電源正極 8.面板輕觸鍵盤 12.前置放大器盒 16.高壓連鎖門控開關 主要技術參數(shù) 1. 進樣進樣 液體壓力差進樣 50-100mm 2. 沖洗方式?jīng)_洗方式 彈簧助推正壓沖洗 3. 毛細管毛細管 石英毛細管，長度50-100cm，內徑為25-75um 4. 檢測器波長范圍檢測器波長范圍 190-700nm 5.輸出電壓輸出電壓 0-30kv，連續(xù)可調儀器運行環(huán)境要求儀器運行環(huán)境要求 1. 工作環(huán)境干燥，溫度變化小，30，8 小時內溫差波動不超過3（推薦在裝有空調

4、的環(huán)境中）。 2. 環(huán)境濕度不大于80% 3. 測量過程中儀器不要搖動 4. 接通電源，儀器預熱30分鐘 5. 工作電流不要長時間超過150 微安，因為過高的電流會是毛細管內的徑向溫度梯度增加，使樣品分離度降低。毛細管的清洗與維護毛細管的清洗與維護 新毛細管使用：新毛細管使用：使用前分別用1mol/L、1mol/LNaOH、水、及緩沖液沖洗毛細管30分鐘。 如果儀器長時間不用（多于一個星期），清洗后用空氣吹毛細管20 分鐘，并放于干燥環(huán)境下保存。方法如下：清洗試劑吸入5ml 注射器中，將注射器插入清洗器的固定孔中，用針頭將毛細管引過清洗器接口的橡皮墊，連接于注射器出口上，移動清洗器手柄使清洗器

5、頂塊壓在注射器推桿上即可進行毛細管沖洗。若是毛細管直接通過清洗器接口的橡皮墊必須將毛細管口截去1mm，以避免發(fā)生堵塞現(xiàn)象。 檢測窗口：檢測窗口：選擇毛細管電泳流通池，使用開窗器夾在距離毛細管出口910 cm 處，用打火機將此處毛細管表面的聚酰亞胺燒去，并用擦鏡紙沾丙酮除去余炭，同時將毛細管外部灰塵擦凈，自下而上穿入毛細管流通池，將毛細管窗口部位固定在流通池窗口，注意應將流通池上部螺釘擰緊至毛細管不能上下移動，而下部螺釘不能擰緊！將檢測流通池裝在檢測器上，用專用螺釘固定。 檢測池放入主機箱正面檢測池座中，在緩沖溶液瓶中加入新配制好的緩沖溶 液,將電極和毛細管的兩端浸在緩沖溶液中,保持毛細管兩端出

6、口在同一水平面 上，且毛細管內必須充滿緩沖溶液,關好儀器正門,確認儀器各部分連接正確后,按 動高壓啟動按鈕,如果發(fā)生異常應立即按動高壓關斷鈕,檢查并排除故障后,再重 新加壓。 根據(jù)實驗需要設定儀器工作參數(shù)，見下述高壓電源及各檢測器操作說明。 流體壓差進樣：將樣品瓶放在高度進樣架上，根據(jù)需要調整進樣高度 實驗結束后關閉電源，用蒸餾水沖洗毛細管30 分鐘，或將緩沖溶液保持在毛 細管中即將毛細管至于壓力清洗裝置中。儀器各組件操作說明儀器各組件操作說明 高壓電源 CL 101A 高壓電源是為高效毛細管電泳儀提供高壓直流電場驅動力的直流電源設備。電壓輸出連續(xù)可調組次窗：組次窗：兩位數(shù)碼管，用于顯示當前操

7、作的組次值，共支持100 級操作（0-99）節(jié)次窗：節(jié)次窗：一位數(shù)碼管，用于顯示當前操作的節(jié)次值，共支持10 節(jié)（0-9）電壓窗：電壓窗：設置狀態(tài)顯示設定的電壓值，運行狀態(tài)顯示電壓輸出值。電流窗：電流窗：設置時顯示輸出電流報警值，運行時顯示監(jiān)測電流值。時間窗：時間窗：用于顯示當前操作組次、節(jié)次的時間設置值，正常工作時可倒計時。 紫外檢測器RESET：系統(tǒng)復位鍵，即使系統(tǒng)回到初始默認狀態(tài)；A/Z：調零鍵，基線回零點；WL：波長調節(jié)鍵，調節(jié)波長至分析所需值（系統(tǒng)默認為254nm）；TC：時間常數(shù)調節(jié)鍵，調節(jié)時間常數(shù)至分析所需值（系統(tǒng)默認為0.5s）；RNG：量程調節(jié)鍵（共分為0.002、0.005

8、、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2AU/MV10 檔），調節(jié)信號輸出量程（僅在使用記錄儀時有效），若信號線所接的是數(shù)據(jù)處理輸出端子，此量程調節(jié)鍵不起作用；1、29、：數(shù)字及小數(shù)點鍵，用于輸入所需數(shù)值；ENTER：確認鍵，在輸入波長等后須按該鍵后系統(tǒng)方可確認當前的輸入操作。常見故障及說明常見故障及說明半胱氨酸半胱氨酸高效毛細管電泳實驗 樣樣 品：品： 半胱氨酸 緩沖溶液緩沖溶液(buffer)： 10 mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4 1:1緩沖溶液(NaH2PO4和Na2HPO4各5mMol/L)，pH10.6. 0.1mol/L NaOH溶液，二次去離

9、子水。 步步 驟驟 儀器的預熱和毛細管的沖洗：打開儀器和配套的工作站。工作溫度設置為30，不加電壓，沖洗新毛細管，順序依次是：1 mol/L HCl溶液30 min二次水5 min ，1 mol/L NaOH溶液30 min，二次水5 min，10 mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4 1:1緩沖溶液5 min，兩次運行之間依次用0.1 mol/L NaOH 2min, 二次水2 min, 緩沖液5min。 樣品測定樣品測定 液體壓力差進樣，進樣壓力50 mbar，進樣時間20s。然后開始分析，電壓30 kV。 注意事項注意事項 1. 沖洗毛細管時禁止在毛細管上加電壓；不允許更改講義上給定的工作電壓，也不建議改變進樣時間。 2. NaOH、HCl、二次水、樣品和緩沖溶液等之