食品檢測(cè)--第三章-農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)教學(xué)內(nèi)容

1、食品檢測(cè)-第三章-農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)一、農(nóng)藥和農(nóng)藥殘留一、農(nóng)藥和農(nóng)藥殘留1、農(nóng)藥、農(nóng)藥廣義：廣義：農(nóng)業(yè)上使用的化學(xué)品狹義：狹義：主要是指用于預(yù)防、消滅或控制危害農(nóng)、林、主要是指用于預(yù)防、消滅或控制危害農(nóng)、林、牧、漁業(yè)生產(chǎn)的有害生物（害蟲(chóng)、害螨、線蟲(chóng)、病原菌、牧、漁業(yè)生產(chǎn)的有害生物（害蟲(chóng)、害螨、線蟲(chóng)、病原菌、雜草及鼠害等）和有目的地調(diào)節(jié)植物、昆蟲(chóng)生長(zhǎng)的化學(xué)雜草及鼠害等）和有目的地調(diào)節(jié)植物、昆蟲(chóng)生長(zhǎng)的化學(xué)藥品及生物藥品。藥品及生物藥品。 第一節(jié)概第一節(jié)概 論論2、農(nóng)藥殘留、農(nóng)藥殘留l指農(nóng)藥使用后殘存在生物體、食品（農(nóng)副指農(nóng)藥使用后殘存在生物體、食品（農(nóng)副產(chǎn)品）和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代產(chǎn)品）和環(huán)

2、境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。3、農(nóng)藥殘留限量、農(nóng)藥殘留限量l世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（WHO/FAO）定）定義為：按照良好的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)規(guī)范，直接或間接使用義為：按照良好的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)規(guī)范，直接或間接使用農(nóng)藥后，在食品和飼料中形成的農(nóng)藥殘留物的最大農(nóng)藥后，在食品和飼料中形成的農(nóng)藥殘留物的最大濃度。濃度。 （表示為（表示為mg/kg或或g/kg） l在世界貿(mào)易一體化的今天，農(nóng)藥最高殘留限量也成在世界貿(mào)易一體化的今天，農(nóng)藥最高殘留限量也成為各貿(mào)易國(guó)之間重要的技術(shù)壁壘。為各貿(mào)易國(guó)之間重要的技術(shù)壁壘。l最大殘留限量最大殘留限量

3、是按各地居民膳食習(xí)慣，每日食用是按各地居民膳食習(xí)慣，每日食用食品的種類(lèi)和數(shù)量計(jì)算的，其量不超過(guò)該農(nóng)藥的日食品的種類(lèi)和數(shù)量計(jì)算的，其量不超過(guò)該農(nóng)藥的日許量。許量。計(jì)算公式：計(jì)算公式：MRL=ADI平均體重平均體重(kg)(人的每人的每日食物總量日食物總量(kg) 食物系數(shù)食物系數(shù)(%) l每日允許攝入量每日允許攝入量(acceptable daily intake,ADI)是指人或動(dòng)物每日攝入某種化學(xué)物質(zhì)（食品添加劑、指人或動(dòng)物每日攝入某種化學(xué)物質(zhì)（食品添加劑、農(nóng)藥等），對(duì)健康無(wú)任何已知不良效應(yīng)的劑量。農(nóng)藥等），對(duì)健康無(wú)任何已知不良效應(yīng)的劑量。以相當(dāng)人或動(dòng)物公斤體重的毫克數(shù)表示以相當(dāng)人或動(dòng)物公斤

4、體重的毫克數(shù)表示,單位一般是單位一般是mg/Kg,或個(gè)或個(gè)g/Kg。例如某化學(xué)物質(zhì)對(duì)人體的例如某化學(xué)物質(zhì)對(duì)人體的ADI值為值為5mg/Kg，按體重，按體重50Kg計(jì)算，則每日攝入該化學(xué)物質(zhì)在計(jì)算，則每日攝入該化學(xué)物質(zhì)在250mg以內(nèi)是安以內(nèi)是安全的。全的。ADI值越高，說(shuō)明該化學(xué)物質(zhì)的毒性越低。值越高，說(shuō)明該化學(xué)物質(zhì)的毒性越低。 ：為不得檢出：為不得檢出 ：為不得檢出：為不得檢出 二、農(nóng)藥的分類(lèi)二、農(nóng)藥的分類(lèi)1、按農(nóng)藥的來(lái)源分類(lèi)：、按農(nóng)藥的來(lái)源分類(lèi)： 可分為礦物源農(nóng)藥、生物源農(nóng)藥與有機(jī)合成農(nóng)藥 l礦物源農(nóng)藥：有的是無(wú)機(jī)礦物原料經(jīng)加工，有的是用礦物油加工成乳劑。ex：砷制劑、氟制劑、銅制劑與硫制

5、劑 l生物源農(nóng)藥：主要有植物源農(nóng)藥和微生物源農(nóng)藥。除蟲(chóng)菊素、阿維菌素、蘇云金桿菌 l有機(jī)合成農(nóng)藥：占農(nóng)藥品種的絕大部分，它們是通過(guò)化學(xué)工業(yè)，用有機(jī)合成工藝生產(chǎn)出來(lái)的。 2、按防治對(duì)象分類(lèi) 殺蟲(chóng)劑、殺螨劑、殺菌劑、殺線蟲(chóng)劑、除草劑、殺鼠劑、殺軟體動(dòng)物劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等。 3、按化學(xué)成分分類(lèi) 可分為有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯類(lèi)、 擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)等。l常見(jiàn)有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥：666、DDT、狄氏劑、艾氏劑、毒殺芬、氯丹、七氯、五氯酚鈉等具有高度的物理、化學(xué)、生物學(xué)穩(wěn)定性，在具有高度的物理、化學(xué)、生物學(xué)穩(wěn)定性，在自然界不易分解，高殘留。脂溶性強(qiáng)。自然界不易分解，高殘留。脂溶性強(qiáng)。l常見(jiàn)有機(jī)磷農(nóng)藥：對(duì)硫磷（1

6、605.）、內(nèi)吸磷（1509）、甲拌磷（3911）、馬拉硫磷（4049）、樂(lè)果、敵百蟲(chóng)、敵敵畏（DDVP）、殺螟松屬于磷酸酯或硫代磷酸酯類(lèi)化合物。大多為屬于磷酸酯或硫代磷酸酯類(lèi)化合物。大多為無(wú)色或黃色的油狀液體，部分為低熔點(diǎn)的固無(wú)色或黃色的油狀液體，部分為低熔點(diǎn)的固體如敵百蟲(chóng)、樂(lè)果等?？扇苡谟袡C(jī)溶劑，性體如敵百蟲(chóng)、樂(lè)果等。可溶于有機(jī)溶劑，性質(zhì)不穩(wěn)定，易光解、堿解和水解。質(zhì)不穩(wěn)定，易光解、堿解和水解。氨基甲酸酯類(lèi)：分為五大類(lèi)：分為五大類(lèi)：萘基氨基甲酸酯類(lèi)，如萘基氨基甲酸酯類(lèi)，如西維因；西維因；苯基氨基甲酸酯類(lèi)，如葉蟬散；苯基氨基甲酸酯類(lèi)，如葉蟬散；氨基甲酸肟氨基甲酸肟酯類(lèi)，如涕滅威；酯類(lèi)，如涕滅

7、威；雜環(huán)甲基氨基甲酸酯類(lèi)，如呋喃丹；雜環(huán)甲基氨基甲酸酯類(lèi)，如呋喃丹；雜環(huán)二甲基氨基甲酸酯類(lèi)，如異索威。雜環(huán)二甲基氨基甲酸酯類(lèi)，如異索威。 除少數(shù)品種如呋喃丹等毒性較高外，大多數(shù)屬中、低毒除少數(shù)品種如呋喃丹等毒性較高外，大多數(shù)屬中、低毒性。性。 l擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)：一類(lèi)仿生合成的殺蟲(chóng)劑，是改變天然除蟲(chóng)菊酯的化學(xué)結(jié)一類(lèi)仿生合成的殺蟲(chóng)劑，是改變天然除蟲(chóng)菊酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)衍生的合成酯類(lèi)。構(gòu)衍生的合成酯類(lèi)。 多達(dá)多達(dá)19種，氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯等。種，氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯等。擬除蟲(chóng)菊酯是一類(lèi)能防治多種害蟲(chóng)的廣譜殺蟲(chóng)劑，其殺擬除蟲(chóng)菊酯是一類(lèi)能防治多種害蟲(chóng)的廣譜殺蟲(chóng)劑，其殺蟲(chóng)毒力比老一代殺蟲(chóng)劑如有機(jī)

8、氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯蟲(chóng)毒力比老一代殺蟲(chóng)劑如有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯類(lèi)提高類(lèi)提高10100倍。倍。 4、按作用方式分類(lèi) l1 1、殺蟲(chóng)劑、殺蟲(chóng)劑 胃毒劑胃毒劑 觸殺劑觸殺劑 熏蒸劑熏蒸劑 內(nèi)吸劑內(nèi)吸劑 l2、殺菌劑、殺菌劑 保護(hù)作用保護(hù)作用 治療劑治療劑 鏟除劑鏟除劑 l3、除草劑、除草劑 觸殺性除草劑觸殺性除草劑 內(nèi)吸性除草劑內(nèi)吸性除草劑 三、農(nóng)藥殘留的來(lái)源三、農(nóng)藥殘留的來(lái)源 直接污染直接污染間接污染間接污染 由食物鏈和生物富集作用造成污染由食物鏈和生物富集作用造成污染 意外事故造成的食品污染意外事故造成的食品污染2008年年2月月9日，第二屆名古屋中國(guó)春節(jié)祭在當(dāng)?shù)氐木萌眨诙妹盼葜袊?guó)

9、春節(jié)祭在當(dāng)?shù)氐木梦荽笸ü珗@隆重開(kāi)幕，專程從東京趕來(lái)的的中國(guó)駐日屋大通公園隆重開(kāi)幕，專程從東京趕來(lái)的的中國(guó)駐日大使崔天凱在春節(jié)祭上品嘗了展臺(tái)上大使崔天凱在春節(jié)祭上品嘗了展臺(tái)上“老三餃子老三餃子”。四、農(nóng)藥殘留的危害四、農(nóng)藥殘留的危害農(nóng)藥殘留對(duì)健康的影響 l對(duì)神經(jīng)的影響；l致癌作用；l對(duì)肝臟的影響；l誘發(fā)突變；l慢性中毒。 藥害影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn) 農(nóng)藥殘留影響進(jìn)出口貿(mào)易 農(nóng)藥殘留污染環(huán)境、破壞生態(tài) 五、農(nóng)藥殘留樣品的采集五、農(nóng)藥殘留樣品的采集1、樣品的種類(lèi)、樣品的種類(lèi)l主觀樣品主觀樣品 為研究研究農(nóng)藥殘留量與各種因素的關(guān)系，從設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)采集的樣品。l客觀樣品客觀樣品 監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)樣品和執(zhí)法樣品，測(cè)定的

10、農(nóng)藥殘留種類(lèi)是未知的或施藥背景不清楚的樣品。1 1、實(shí)驗(yàn)室樣品、實(shí)驗(yàn)室樣品 從群體采集的送到殘留分析實(shí)驗(yàn)室的樣品。2 2、檢測(cè)樣品、檢測(cè)樣品 實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)縮分減量或經(jīng)過(guò)精制后的樣品。3 3、檢測(cè)樣份、檢測(cè)樣份 從檢測(cè)樣品中稱取的用于分析的樣品。4 4、檢測(cè)溶液、檢測(cè)溶液 經(jīng)過(guò)提取、凈化后進(jìn)入待測(cè)狀態(tài)。2、取樣方法、取樣方法l監(jiān)測(cè)調(diào)查取樣：隨機(jī)、概率、分布水平l執(zhí)法取樣：強(qiáng)制性、超標(biāo)與否3、商品取樣量要求、商品取樣量要求 小的或輕的產(chǎn)品 1.01.5Kg 中等大小產(chǎn)品 2.02.5Kg 大的產(chǎn)品 4.05.0Kg 肉、禽、魚(yú) 1.01.5Kg 谷物和制品 0.51.0Kg4、不同樣品的采集要求、不

11、同樣品的采集要求 根莖類(lèi)蔬菜根莖類(lèi)蔬菜 采集整個(gè)果實(shí)采集整個(gè)果實(shí) 葉類(lèi)蔬菜葉類(lèi)蔬菜 除去腐爛和枯萎部分除去腐爛和枯萎部分 豆類(lèi)豆類(lèi) 整個(gè)果實(shí)整個(gè)果實(shí) 果類(lèi)蔬菜果類(lèi)蔬菜 去除莖部去除莖部 谷物谷物 整個(gè)籽粒整個(gè)籽粒 肉類(lèi)肉類(lèi) 整體整體 5、樣品的包裝、記錄和貯存、樣品的包裝、記錄和貯存標(biāo)簽（2個(gè)）編號(hào)：樣品名稱：采樣時(shí)間：地點(diǎn)：要求：要求： 溫度 濕度 光照 單獨(dú)存放6、樣品的預(yù)處理、樣品的預(yù)處理 粉狀物粉狀物 谷物谷物 小體積水果和蔬菜小體積水果和蔬菜 大體積水果和蔬菜大體積水果和蔬菜 液體樣品液體樣品 土壤土壤 對(duì)含水量較高的樣品預(yù)處理方法對(duì)含水量較高的樣品預(yù)處理方法 肉：放入鉸肉機(jī)中鉸勻

12、水果蔬菜等，放入高速組織搗碎器攪勻 蛋類(lèi)食品，去殼后用打蛋器打勻。 對(duì)于包裝食品，取出各種調(diào)味品后，再制備均勻。第二節(jié)第二節(jié) 樣品前處理技術(shù)樣品前處理技術(shù) 樣品前處理：采樣技術(shù)和樣品制備技術(shù)樣品制備技術(shù)。樣品處理的原則：樣品處理的原則：制備過(guò)程中避免組分發(fā)生化學(xué)變化；要防止和避免欲測(cè)定組分的沾污；盡可能減少無(wú)關(guān)化合物引入制備過(guò)程； 盡可能簡(jiǎn)單易行。 利用殘留農(nóng)藥與樣品基質(zhì)的物理化學(xué)差物理化學(xué)差異異，使其從檢測(cè)系統(tǒng)有干擾作用的樣品基質(zhì)中提取分離出來(lái)（相似相溶）。 極性極性-溶解度、分配系數(shù)；揮發(fā)性揮發(fā)性-蒸汽壓。1 1、極性、極性 提取、凈化條件的依據(jù)。相似相溶原理相似相溶原理：使用與農(nóng)藥極性相

13、近的溶劑為提取劑，使殘留農(nóng)藥在溶劑中達(dá)到最大溶解度使殘留農(nóng)藥在溶劑中達(dá)到最大溶解度。極性判斷：電負(fù)性、雙鍵、對(duì)稱性表示：氧化鋁吸附劑上洗脫供試溶質(zhì)的能力2 2、水溶性、水溶性 農(nóng)藥的極性決定其在溶劑中的溶解性。影響溶解性的其他因素影響溶解性的其他因素 溫度：高溶解性高 含鹽量：鹽會(huì)降低有機(jī)物的溶解度。 pH：影響可解離的農(nóng)藥的溶解度分配定律：分配定律：在一對(duì)互不相溶的兩相溶劑系統(tǒng)中，由于物質(zhì)在非極性相和極性相非極性相和極性相中的溶解度不同，當(dāng)達(dá)到平衡時(shí)，物質(zhì)在該兩相中的濃度比在一定條件下為常數(shù)的定律。K KD D （分配系數(shù)） = A= A非極性相非極性相 / B/ B極性相極性相 揮發(fā)性：揮

14、發(fā)性：液態(tài)或固態(tài)物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài)的物理性能。揮發(fā)性決定：物質(zhì)在氣-液或氣-固兩相中的分布。分為沸點(diǎn)和蒸汽壓。蒸汽壓：固態(tài)、液態(tài)氣態(tài)提取提取: :是指通過(guò)溶解、吸附（吸著）或揮發(fā)等方式將樣品中的殘留農(nóng)藥分離出來(lái)的操作步驟，也叫萃取萃取。避免：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫、劇烈操作極性-溶解度、分配系數(shù)；揮發(fā)性-蒸汽壓。溶劑萃取溶劑萃取蒸餾技術(shù)蒸餾技術(shù)固相萃取固相萃取微波萃取微波萃取衍生化衍生化超臨界萃取超臨界萃取溶劑萃?。喝軇┹腿。喝芙庑圆町?，選用對(duì)殘留農(nóng)藥溶解度大的溶劑，將分析物從樣品基質(zhì)中提取出來(lái)的方法。關(guān)鍵：關(guān)鍵：選擇合適的提取溶劑。液液- -液萃取液萃取液液- -固萃取固萃取液液- -氣萃取（溶液吸收

15、）氣萃取（溶液吸收）萃取對(duì)象萃取對(duì)象 兩種不相容兩種不相容的液體的液體水溶劑：親水化合物進(jìn)入水溶劑：親水化合物進(jìn)入到水相中。到水相中。有機(jī)溶劑：疏水性化合物將進(jìn)有機(jī)溶劑：疏水性化合物將進(jìn)入有機(jī)相中的程度就越大。入有機(jī)相中的程度就越大。利用樣品中不同組分分配在兩種不混溶的溶劑中溶解度溶解度或分配比分配比的不同來(lái)達(dá)到分離、提取或純化的目的。有機(jī)相有機(jī)相水相水相K KD D = c = co oc caqaq有機(jī)物質(zhì)在有機(jī)溶劑中的溶解度一般比有機(jī)物質(zhì)在有機(jī)溶劑中的溶解度一般比在水相中的溶解度大，分配系數(shù)越大，水在水相中的溶解度大，分配系數(shù)越大，水相中的有機(jī)物可被萃取。相中的有機(jī)物可被萃取。 nB0n

16、)VKVKV(mm式中：m m0 0是被萃取溶液中溶質(zhì)（X）的總含量， m mn n是經(jīng)過(guò)n次萃取后，X在溶劑中的剩余量， V V是被萃取溶液的體積， V VB B是每次萃取所用溶劑B的體積（均為VB）， n n是等量萃取的次數(shù)。溶劑體積為樣品溶液的溶劑體積為樣品溶液的30303535。振蕩幾次振蕩幾次打開(kāi)活塞打開(kāi)活塞Gas蒸氣逸出（也叫放氣）蒸氣逸出（也叫放氣）絮狀物絮狀物（乳化）（乳化）有機(jī)相有機(jī)相水相水相水相和絮狀物水相和絮狀物靜置分層靜置分層激烈振搖激烈振搖1 12 min2 min有機(jī)相有機(jī)相35次次由于液-液萃取過(guò)程中劇烈振動(dòng)，經(jīng)常發(fā)生乳乳化現(xiàn)象化現(xiàn)象，特別是那些含脂肪脂肪的樣品。

17、原因：原因：體系的性質(zhì)、離子濃度、有機(jī)相粘度、萃取溫度、pH等。溫度越低，溫度越低，有機(jī)相粘度越大，離子濃度越高越易產(chǎn)生乳化。通過(guò)改變KD;改變?nèi)軇┗蚧瘜W(xué)平衡作用的添加劑;緩沖劑調(diào)節(jié)pH;鹽調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度等。 離心法破乳，2000r/min，2min； 無(wú)水硫酸鈉研磨法破乳； 蒸干法，蒸干后，再用有機(jī)溶劑萃取。不適用揮發(fā)性物質(zhì)的萃取。 電解質(zhì)破乳。加入無(wú)機(jī)鹽，通過(guò)提高體系中水相的比重使兩相分層； 破乳率與加入電解質(zhì)的量成正比。 l mol/L的鹽酸； 無(wú)水乙醇溶解兩相液滴； 無(wú)水硫酸鈉漏斗過(guò)濾。 玻璃棒攪動(dòng)，削弱吸附作用； 靜置一定的時(shí)間后，可自然分層。因?yàn)槿闈嵋菏且后w雜質(zhì)以微小珠滴散布在液體溶

18、劑中的一種分散體系，是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系。固體萃取溶劑振蕩（加熱）離心/過(guò)濾分離欲萃取組分進(jìn)入溶劑。 溶解和擴(kuò)散的過(guò)程溶解和擴(kuò)散的過(guò)程 分子擴(kuò)散：分子擴(kuò)散：固體樣品表面/溶劑接解處影響因素：溫度、分子大小和液體介質(zhì)的黏度。對(duì)流擴(kuò)散：對(duì)流擴(kuò)散：遠(yuǎn)離固體樣品表面處的擴(kuò)散影響因素：流動(dòng)液體的速度和狀態(tài)，液體的黏度、樣品表面的性質(zhì)等。1、萃取劑的選擇性（極性） 2、穩(wěn)定性、毒性3、沸點(diǎn)：4080者為宜 4、萃取劑回收的難易與經(jīng)濟(jì)性5、色譜檢測(cè)器的響應(yīng) SPE SPE ：Solid Phase ExtractionSolid Phase Extraction是一種液相色譜分離，利用固體吸附劑將液體樣品中的

19、目標(biāo)化合物與干擾化合物分離，達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。慢慢中等中等快快淋洗液淋洗液反相固相萃取正相固相萃取離子交換固相萃取 陰離子交換 陽(yáng)離子交換流動(dòng)相：極性（水溶液）或中等極性固定相：非極性。分離對(duì)象：中等到非極性物質(zhì)。 分析物中的CH鍵 + 硅膠表面官能團(tuán)吸附極性溶液中的有機(jī)分析物保留在SPE。用非極性溶劑解吸吸附在固定相中的目標(biāo)物質(zhì)。 反相固相萃取原理反相固相萃取原理常用反相固相萃取柱常用反相固相萃取柱LC-18LC-18、LC-8 LC-8 ：標(biāo)準(zhǔn)的單鍵合硅膠ENVI-18ENVI-18、ENVI-8 ENVI-8 ：聚合鍵合類(lèi)填料ENVI-Chrom PENVI-Chrom P

20、：苯乙烯：疏水 ENVI-CarbENVI-Carb：含碳 流動(dòng)相：非極性、中等極性固定相：極性。分析物質(zhì)：極性、中等極性、非極性正相固相萃取原理正相固相萃取原理 保留取決于分析物的極性官能團(tuán)與吸附劑表面的極性官能團(tuán)之間的相互作用。 用比樣品本身更極性的溶劑洗脫吸附的分析物質(zhì)。 極性官能團(tuán)鍵合硅膠 LC-CN， LC-NH2， LC-Diol 極性吸附物質(zhì) LC-Si， LC-Florisil， ENVI-Florisil， LC-Alumina常用正相固相萃取柱常用正相固相萃取柱流流動(dòng)動(dòng)相相C. 離子交換固相萃取離子交換固相萃取適用于帶有電荷的化合物（水溶液、有機(jī)溶液）。原理：靜電吸引，化合

21、物上的帶電荷基團(tuán)與鍵合硅膠上的帶電荷基團(tuán)之間的吸引。分為：陰離子交換和陽(yáng)離子交換。LC-SAXLC-SAX、LC-NHLC-NH2 2：脂肪族季銨類(lèi)鹽 + 硅膠LC-SCXLC-SCX：磺酸基；LC-WCXLC-WCX：羧酸基團(tuán) 目標(biāo)化合物在極性/非極性溶劑中的溶解度溶解度，這主要涉及淋洗液的選擇。 目標(biāo)化合物有無(wú)可能離子化離子化（可用調(diào)節(jié)pH值實(shí)現(xiàn)離子化）。 目標(biāo)化合物有無(wú)可能與吸附劑形成共價(jià)鍵共價(jià)鍵。 在吸附劑上吸附點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)程度競(jìng)爭(zhēng)程度，關(guān)系到能否很好分離。篩板篩板篩板篩板篩板篩板（1）活化吸附劑 萃取之前要用適當(dāng)?shù)娜軇┝芟葱≈?，以使吸附劑保持濕?rùn)，可以吸附目標(biāo)化合物或干擾化合物。（2）上

22、樣（吸附） 樣品倒入活化后的固相萃取小柱，然后利用抽真空，加壓或離心的方法使樣品進(jìn)入吸附劑。 （3）洗滌（去除雜質(zhì)）在樣品進(jìn)入吸附劑，目標(biāo)化合物被吸附后，可先用較弱的溶劑將弱保留干擾化合物洗掉。（4）洗脫和收集 再用較強(qiáng)的溶劑將目標(biāo)化合物洗脫下來(lái)，加以收集?；罨絼┗罨絼┻M(jìn)進(jìn) 樣樣洗洗 滌滌洗洗 脫脫 不是將待測(cè)物質(zhì)全部分離出來(lái)，通過(guò)在樣品與固相涂層間的平衡來(lái)達(dá)到分離。方法：玻璃纖維浸入樣品中殘留農(nóng)藥擴(kuò)散吸附平衡取出玻璃纖維洗脫分析。關(guān)鍵：關(guān)鍵：石英纖維上涂吸附劑石英纖維上涂吸附劑原則：原則：目標(biāo)化合物是非極性目標(biāo)化合物是非極性時(shí)選擇非極性涂層；目標(biāo)化時(shí)選擇非極性涂層；目標(biāo)化合物是極性時(shí)

23、選擇極性涂層。合物是極性時(shí)選擇極性涂層。三、超臨界流體萃取技術(shù)三、超臨界流體萃取技術(shù)l超臨界流體萃取技術(shù)是以超臨界狀態(tài)下的流超臨界流體萃取技術(shù)是以超臨界狀態(tài)下的流體作為溶劑，利用該狀態(tài)下流體所具有的高體作為溶劑，利用該狀態(tài)下流體所具有的高滲透能力和高溶解能力萃取分離混合物的過(guò)滲透能力和高溶解能力萃取分離混合物的過(guò)程。程。 超臨界流體物體處于其臨界溫度和臨界壓力以上時(shí)的狀態(tài)。氣體：粘稠度、表面張力低，溶解能力強(qiáng)，萃取功能高。壓力，溶解能力。液體：體積小。流體名稱流體名稱分子式分子式臨界壓力臨界壓力(bar)(bar)臨界溫度臨界溫度()()臨界密度臨界密度(g/cm(g/cm3 3) )二氧化碳

24、二氧化碳COCO2 272.972.931.231.20.4330.433水水H H2 2O O217.6217.6374.2374.20.3320.332氨氨NHNH3 3112.5112.5132.4132.40.2350.235乙烷乙烷C C2 2H H6 648.148.132.232.20.2030.203氧化二氮氧化二氮N N2 2O O71.771.736.536.50.4500.450 在3540下提取 干凈的提取方法 CO2是一種不活潑的氣體。 循環(huán)使用，降低成本。 參數(shù)可以調(diào)節(jié)特特 點(diǎn)點(diǎn)流動(dòng)相流動(dòng)相四、微波萃取技術(shù)四、微波萃取技術(shù)微微 波波金屬金屬水分水分吸收微波、反射微波

25、、透過(guò)微波吸收微波、反射微波、透過(guò)微波 頻率：300300 000MHz的電磁波。穿透：玻璃、塑料、陶瓷等絕緣體。當(dāng)微波作用于水和酸性物質(zhì)時(shí)，將被極性分子所吸收，因而物質(zhì)很快被加熱。吸收微波細(xì)胞內(nèi)部溫度，細(xì)胞內(nèi)部壓力超過(guò)細(xì)胞壁膨脹承受能力細(xì)胞破裂有效成分自由流出。微波所產(chǎn)生的電磁場(chǎng)加速被萃取部分成分向萃取溶劑界面擴(kuò)散速率影響因素影響因素 萃取溫度的影響 萃取溶劑的影響 樣品杯：聚四氟乙烯微波萃取被譽(yù)為微波萃取被譽(yù)為“綠色分析化學(xué)綠色分析化學(xué)”。是因?yàn)?。是因?yàn)槲⒉ㄝ腿≡噭┯昧可?，?jié)能、省時(shí)，污染小。微波萃取試劑用量少，節(jié)能、省時(shí)，污染小。使用更少的溶劑，更快的時(shí)間，更好的回收使用更少的溶劑，更快

26、的時(shí)間，更好的回收率，處理批量大，萃取效率高。率，處理批量大，萃取效率高。 能量外部向內(nèi)部傳遞。超聲波使溶液形成氣泡（空化效應(yīng)）爆裂溫度和壓力，增強(qiáng)化學(xué)反應(yīng)能力。優(yōu)點(diǎn)：價(jià)廉快速，簡(jiǎn)便安全，批量處理樣品?；瘜W(xué)反應(yīng)定量生成適于分析。 靈敏度與選擇性 改善色譜分離： 理化穩(wěn)定性柱柱前前衍生化：為了分離衍生化：為了分離柱柱后后衍生化：為了檢測(cè)衍生化：為了檢測(cè)（1 1）硅烷化衍生化方法）硅烷化衍生化方法（2 2）酯化衍生化方法）酯化衍生化方法（3 3）鹵化衍生化方法）鹵化衍生化方法（4 4）酚化衍生化方法）酚化衍生化方法方法方法利用醇、酚、酸、胺等與硅烷化試劑反利用醇、酚、酸、胺等與硅烷化試劑反應(yīng)，形成

27、揮發(fā)性的硅烷衍生物應(yīng)，形成揮發(fā)性的硅烷衍生物R R3 3SiX + SiX + HRHRR R3 3SiRSiR + HX + HX大多數(shù)有機(jī)酸有機(jī)酸揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差。在GC分析之前衍生為相應(yīng)的酯。 甲醇法 重氮甲烷法 三氟乙酸配法 甲醇法 有機(jī)酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發(fā)生酯化反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯RCOOH + RCOOH + CHCH3 3OHOH催化劑催化劑RCOO CHRCOO CH3 3 + H + H2 2 O O與有機(jī)酸反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯，重氮甲烷不穩(wěn)定，有爆炸性，有毒。 RCOOH + RCOOH + CHCH2 2N N2 2RCOO CHRCOO CH3 3

28、 + N + N2 2引入鹵原子ECD檢測(cè)器也改善揮發(fā)性和穩(wěn)定性。 鹵素的作用是加成加成或取代取代 1. 1. 紫外衍生化反應(yīng)紫外衍生化反應(yīng)2 2熒光衍生化反應(yīng)熒光衍生化反應(yīng)3 3電化學(xué)衍生化反應(yīng)電化學(xué)衍生化反應(yīng)苯甲酰氯 + 胺、醇、酚苯甲酸酯類(lèi)衍生物（200-360 ）在目標(biāo)化合物上接上能發(fā)出熒光的生色基團(tuán)，如熒光素。農(nóng)藥殘留檢測(cè)是微量或超微量分析，一般農(nóng)藥殘留檢測(cè)是微量或超微量分析，一般可分為化學(xué)檢測(cè)、生化檢測(cè)和生物檢測(cè)?？煞譃榛瘜W(xué)檢測(cè)、生化檢測(cè)和生物檢測(cè)。當(dāng)前使用較多的有儀器分析法、免疫分析當(dāng)前使用較多的有儀器分析法、免疫分析法、生物傳感器法、活體檢測(cè)法、酶抑制法、生物傳感器法、活體檢測(cè)

29、法、酶抑制法等。法等。 第三節(jié)第三節(jié) 農(nóng)藥殘留檢測(cè)的常用技術(shù)農(nóng)藥殘留檢測(cè)的常用技術(shù) 1、儀器分析l凡是沸點(diǎn)大約在 500，分子量在 400以下的農(nóng)藥，原則上都可以用氣相色譜法分離和分析，目前 80以上的農(nóng)藥可以用它檢測(cè)。l我國(guó)農(nóng)藥檢測(cè)現(xiàn)行的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)多采用氣相色譜法。高效液相色譜法（HPLC） 適合于非揮發(fā)性、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥的分離分析。高效液相色譜儀基本裝置高效液相色譜儀基本裝置流動(dòng)相流動(dòng)相進(jìn)樣閥進(jìn)樣閥注入樣品液注入樣品液色譜柱色譜柱檢測(cè)器檢測(cè)器色譜處理機(jī)色譜處理機(jī)高壓泵高壓泵流出液流出液薄層色譜薄層色譜l又叫薄板層析薄板層析是以涂布于支持板上的支持物作為固定相，以合

30、適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量、定性的一種層析分離技術(shù)。 氣相色譜質(zhì)譜連用二級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS-MS）的聯(lián)用 液相色譜質(zhì)譜的連用 超臨界色譜技術(shù) 高效毛細(xì)管電泳 毛細(xì)管區(qū)帶電泳法 毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜2、免疫分析法放射免疫法放射免疫法：是利用同位素標(biāo)記的方法檢測(cè)。酶免疫法：酶免疫法： 是將抗原、抗體的特異性免疫反應(yīng)和酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合起來(lái)的一種免疫分析方法。熒光免疫法：熒光免疫法： 是利用熒光素標(biāo)記待測(cè)農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)。3、酶抑制法、酶抑制法是將酶加入待測(cè)溶液中，根據(jù)酶的不同活性，用分光光度計(jì)測(cè)量吸光值大小，計(jì)算農(nóng)藥殘留的高低。 4、免疫親和色譜、免疫親和色譜其利用抗原抗

31、體反應(yīng)的專一性，使分離、凈化和濃縮同時(shí)進(jìn)行，一步柱色譜就可使復(fù)雜樣品提取液中的目標(biāo)組分得到高純度與富集。5、生物傳感器法、生物傳感器法 生物傳感器通常是指由一種分子識(shí)別分子識(shí)別元件（生物敏感部件）元件（生物敏感部件）與信號(hào)轉(zhuǎn)換器信號(hào)轉(zhuǎn)換器緊密配合，對(duì)特定種類(lèi)化合物或生物活性物質(zhì)具有選擇和可逆響應(yīng)的分析工具。分子識(shí)別元件：分子識(shí)別元件：酶、抗體、受體、細(xì)胞及酶、抗體、受體、細(xì)胞及組織器官等組織器官等信號(hào)轉(zhuǎn)換器：信號(hào)轉(zhuǎn)換器：電極、半導(dǎo)體、光導(dǎo)纖維、電極、半導(dǎo)體、光導(dǎo)纖維、壓電晶體、表面聲波、熱敏電阻等壓電晶體、表面聲波、熱敏電阻等生物生物傳感傳感器器（1 1）酶生物傳感器：）酶生物傳感器：（2 2

32、）免疫生物傳感器：）免疫生物傳感器：利用抗體和抗原抗體和抗原之間的免疫化學(xué)反應(yīng)來(lái)制作的生物傳感器。（3 3）微生物傳感器）微生物傳感器 ：利用活微生物的代謝功代謝功能能檢測(cè)污染物換能器（Transducer）感受器（Receptor）測(cè)量信號(hào)（Measurable Signal）=分析物（Analyte）溶液（Solution）選擇性膜（Thin selective membrane）識(shí)別元件（RECOGNITION）生物傳感器工作機(jī)理6、流動(dòng)注射免疫分析法、流動(dòng)注射免疫分析法 7、活體檢測(cè)法，、活體檢測(cè)法，8、細(xì)菌發(fā)光、細(xì)菌發(fā)光l細(xì)菌生物發(fā)光反應(yīng)是由分子氧作用，胞內(nèi)熒細(xì)菌生物發(fā)光反應(yīng)是由分子

33、氧作用，胞內(nèi)熒光酶催化，將還原態(tài)的黃素單核苷酸光酶催化，將還原態(tài)的黃素單核苷酸(FMNH2)及長(zhǎng)鏈脂肪醛氧化為及長(zhǎng)鏈脂肪醛氧化為FMN 及長(zhǎng)及長(zhǎng)鏈脂肪酸，同時(shí)釋放出最大發(fā)光強(qiáng)度在波長(zhǎng)鏈脂肪酸，同時(shí)釋放出最大發(fā)光強(qiáng)度在波長(zhǎng)為為450-490nm處的藍(lán)綠光。處的藍(lán)綠光。 l缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：細(xì)胞發(fā)光強(qiáng)度本質(zhì)差異較大細(xì)胞發(fā)光強(qiáng)度本質(zhì)差異較大檢測(cè)期間發(fā)光自然變化幅度較寬，檢測(cè)期間發(fā)光自然變化幅度較寬，重現(xiàn)性不佳，誤差較大等。重現(xiàn)性不佳，誤差較大等。由于農(nóng)藥品種多、化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)各異、由于農(nóng)藥品種多、化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)各異、待測(cè)組分復(fù)雜，尤其是近年來(lái)，高效、低待測(cè)組分復(fù)雜，尤其是近年來(lái)，高效、低毒、低殘留農(nóng)藥品種

34、不斷涌現(xiàn)，在農(nóng)產(chǎn)品毒、低殘留農(nóng)藥品種不斷涌現(xiàn)，在農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境中殘留量很低，給農(nóng)藥殘留檢測(cè)技和環(huán)境中殘留量很低，給農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)提出了更高的要求。術(shù)提出了更高的要求。 農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)朝著快速、方便、靈敏農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)朝著快速、方便、靈敏可靠的方向發(fā)展?？煽康姆较虬l(fā)展。 生物技術(shù)與現(xiàn)代理化分析手段相結(jié)合。生物技術(shù)與現(xiàn)代理化分析手段相結(jié)合。 第四節(jié)第四節(jié) 各種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法各種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法由于農(nóng)藥分析目的各不相同，所以必須采用適合由于農(nóng)藥分析目的各不相同，所以必須采用適合于所要解決問(wèn)題的具體分析方法。如：特定活性于所要解決問(wèn)題的具體分析方法。如：特定活性成分殘留檢測(cè)或同一批次產(chǎn)品中任

35、一農(nóng)藥的殘留成分殘留檢測(cè)或同一批次產(chǎn)品中任一農(nóng)藥的殘留水平。水平。l多殘留分析方法多殘留分析方法用來(lái)檢測(cè)和測(cè)定系列食品中的多種農(nóng)用來(lái)檢測(cè)和測(cè)定系列食品中的多種農(nóng)藥殘留，可對(duì)多種農(nóng)藥殘留量進(jìn)行評(píng)估以確定其是否藥殘留，可對(duì)多種農(nóng)藥殘留量進(jìn)行評(píng)估以確定其是否處于或低于規(guī)定的允許殘留水平；處于或低于規(guī)定的允許殘留水平；l單一殘留分析方法單一殘留分析方法是用于測(cè)定單一殘留物，而且測(cè)定是用于測(cè)定單一殘留物，而且測(cè)定的殘留物的主要代謝物和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的殘留物的主要代謝物和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物l半定量和定性方法半定量和定性方法（篩選法）能夠估算樣品中某種農(nóng)（篩選法）能夠估算樣品中某種農(nóng)藥的殘留水平。藥的殘留水平。一、食品中有

36、機(jī)磷類(lèi)農(nóng)殘的檢測(cè)方法一、食品中有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)殘的檢測(cè)方法有機(jī)磷農(nóng)藥是指在組成上含有磷的有機(jī)殺蟲(chóng)劑、殺有機(jī)磷農(nóng)藥是指在組成上含有磷的有機(jī)殺蟲(chóng)劑、殺菌劑等。主要類(lèi)型有：菌劑等。主要類(lèi)型有：l磷酸酯型，如久效磷、磷胺等l二硫代磷酸酯型，如馬拉硫磷、樂(lè)果、甲拌磷、亞胺硫磷l硫酮磷酸酯型，如對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、內(nèi)吸磷、殺螟松l硫醇磷酸酯型，如氧化樂(lè)果、伏地松l磷酰胺型，如甲胺磷、乙酰甲胺磷l膦酸酯型，如敵百蟲(chóng)、苯脯磷有機(jī)磷農(nóng)藥種類(lèi)很多，按毒性分為高毒有機(jī)磷農(nóng)藥種類(lèi)很多，按毒性分為高毒（劇毒）、中毒、低毒三類(lèi)；（劇毒）、中毒、低毒三類(lèi)；溶解性：溶解性：多數(shù)難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑多數(shù)難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑水

37、解性水解性：在堿性介質(zhì)中易水解：在堿性介質(zhì)中易水解氧化性：氧化性：硫代磷酸酯類(lèi)在溴、紫外線等作硫代磷酸酯類(lèi)在溴、紫外線等作用下其中的用下其中的S S可被可被O O取代。取代。酶抑制活性：酶抑制活性：可抑制羧酸酯酶、膽堿酯酶可抑制羧酸酯酶、膽堿酯酶的活性的活性有機(jī)磷農(nóng)藥限量有機(jī)磷農(nóng)藥限量標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)農(nóng)藥名稱農(nóng)藥名稱糧食糧食蔬菜、水果蔬菜、水果食用植物油食用植物油GB5127樂(lè)果樂(lè)果1.00.1敵敵畏敵敵畏0.2對(duì)硫磷對(duì)硫磷0.1不得檢出不得檢出馬拉硫磷馬拉硫磷3GB4788甲拌磷甲拌磷0.02不得檢出不得檢出不得檢出不得檢出殺螟硫磷殺螟硫磷50.5不得檢出不得檢出倍硫磷倍硫磷0.050.050.

38、01GB14868辛硫磷辛硫磷0.050.05GB14872乙酰甲胺磷乙酰甲胺磷0.2蔬菜蔬菜0.2水果水果0.5續(xù)上表續(xù)上表標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)農(nóng)藥名稱農(nóng)藥名稱糧食糧食蔬菜、水果蔬菜、水果食用植物油食用植物油GB14873甲胺硫甲胺硫0.1GB14874甲基對(duì)硫磷甲基對(duì)硫磷0.10.1GB14928.1地亞農(nóng)地亞農(nóng)0.10.5GB14928.3甲基嘧啶硫磷甲基嘧啶硫磷5GB14928.8水胺硫磷水胺硫磷0.10柑橘柑橘0.02GB14928.10喹硫磷喹硫磷大米大米0.2蔬菜蔬菜0.2水果水果0.5GB14969克線磷克線磷甘蔗甘蔗0.005柑橘柑橘0.005（一）國(guó)標(biāo)測(cè)定方法（一）國(guó)標(biāo)測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)

39、步驟實(shí)驗(yàn)步驟1、樣品處理 選取有代表性的蔬菜樣品，去掉不可食部分后稱取蔬菜試樣，沖洗掉表面泥土，剪成1 cm左右碎片。取樣品1 g，放入燒杯或提取瓶中，加入5 mL緩沖液，振蕩12 min，倒出提取液，靜置35 min，待用。2、對(duì)照溶液測(cè)試 先于試管中加入2.5 mL緩沖液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL顯色劑。搖勻后于37 放置15 min以上（每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入0.1 mL低物搖勻，此時(shí)檢液開(kāi)始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入比色皿中，記錄反應(yīng)3 min的吸光度的變化值A(chǔ)0。 3、 樣品溶液測(cè)定先于試管中加入2.5 mL樣品提取液，其他操作與對(duì)照測(cè)定相同，記錄反應(yīng)3 min的吸光

40、度的變化值A(chǔ)t。 結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算 抑制率（%）= 式中 A0對(duì)照液反應(yīng)3 min吸光度的變化值； At樣品溶液反應(yīng)3 min吸光度的變化值。10000AAAt酶抑制率法對(duì)部分農(nóng)藥的檢出限酶抑制率法對(duì)部分農(nóng)藥的檢出限 注注 意意蔥、蒜、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，蔥、蒜、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類(lèi)含有對(duì)酶有影響的次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類(lèi)樣品時(shí)，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面測(cè)定法。對(duì)一些樣品時(shí)，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面測(cè)定法。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，減含葉綠素較高的蔬菜，也

41、可采取整株蔬菜萃取的方法，減少色素的干擾。少色素的干擾。當(dāng)溫度條件低于當(dāng)溫度條件低于3737度，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液度，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相應(yīng)延長(zhǎng)，延長(zhǎng)時(shí)間的確定，和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相應(yīng)延長(zhǎng)，延長(zhǎng)時(shí)間的確定，應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試3min3min吸光度變化差值在吸光度變化差值在0.30.3以以上，即可往下操作。注意樣品放置時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照溶液上，即可往下操作。注意樣品放置時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照溶液放置時(shí)間一致才有可比性。放置時(shí)間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試3min3min吸光度變化差值在吸光

42、度變化差值在0.30.3以下的以下的原因：原因：一是酶的活性不夠，二是溫度太低。一是酶的活性不夠，二是溫度太低。 （二）免疫分析技術(shù)（二）免疫分析技術(shù)酶聯(lián)免疫分析技術(shù)酶聯(lián)免疫分析技術(shù)l使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。保留酶的活性。l在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟

43、與固相載體表面的抗原酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，最后結(jié)合在固相載體原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。l加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。 ELISA

44、可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：種必要的試劑：固相的抗原或抗固相的抗原或抗體，體，酶標(biāo)記的抗原或抗體，酶標(biāo)記的抗原或抗體，酶作用的底物。酶作用的底物。 根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法?？稍O(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法。l雙抗體夾心法雙抗體夾心法 l雙抗原夾心法測(cè)抗體雙抗原夾心法測(cè)抗體 l雙位點(diǎn)一步法雙位點(diǎn)一步法 l間接法測(cè)抗體間接法測(cè)抗體 l競(jìng)爭(zhēng)法競(jìng)爭(zhēng)法l捕獲法測(cè)捕獲法測(cè)IgM抗體抗體 l應(yīng)用親和素和生物素的應(yīng)用親和素

45、和生物素的ELISA 對(duì)硫磷的酶聯(lián)免疫分析有機(jī)磷農(nóng)藥屬于小分子物質(zhì)，必須與大分子聯(lián)結(jié)，才有機(jī)磷農(nóng)藥屬于小分子物質(zhì)，必須與大分子聯(lián)結(jié)，才能作為免疫原。能作為免疫原。免疫抗原的合成免疫抗原的合成濃鹽酸濃鹽酸金屬還原劑金屬還原劑（Zn/Fe）H3-N重氮化重氮化氨基對(duì)硫磷對(duì)硫磷 亞硝酸鈉亞硝酸鈉 低溫低溫1605與牛血清蛋白酪氨酸上羥基的鄰位結(jié)合 BSA免疫抗原免疫抗原（載體蛋白）（載體蛋白）目前，國(guó)外已研制出幾十種農(nóng)藥的酶免疫目前，國(guó)外已研制出幾十種農(nóng)藥的酶免疫檢測(cè)試劑盒，包括有機(jī)磷類(lèi)、氨基甲酸酯檢測(cè)試劑盒，包括有機(jī)磷類(lèi)、氨基甲酸酯類(lèi)、有機(jī)氯類(lèi)、擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)以及酰胺類(lèi)類(lèi)、有機(jī)氯類(lèi)、擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)以及

46、酰胺類(lèi)等。等。l有機(jī)磷有機(jī)磷20ug/kgl氨基甲酸酯類(lèi)氨基甲酸酯類(lèi)300ug/kg它具有專一性強(qiáng)、靈敏度高、快速、操作它具有專一性強(qiáng)、靈敏度高、快速、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，試劑盒可廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)樣品簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，試劑盒可廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)樣品和大量樣品的快速檢測(cè)，可準(zhǔn)確定性、定和大量樣品的快速檢測(cè)，可準(zhǔn)確定性、定量。量。 但由于受到農(nóng)藥種類(lèi)多，抗體制備難度大但由于受到農(nóng)藥種類(lèi)多，抗體制備難度大 （二）生物化學(xué)測(cè)定法（二）生物化學(xué)測(cè)定法酶抑制活性：酶抑制活性：可抑制羧酸酯酶、膽堿可抑制羧酸酯酶、膽堿酯酶的活性。酯酶的活性。速測(cè)卡速測(cè)卡速測(cè)卡速測(cè)卡（1）原理）原理l膽堿酯酶可催化膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）

47、靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙水解為乙酸和酸和靛酚（藍(lán)色）。靛酚（藍(lán)色）。l有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過(guò)程發(fā)生改變，作用，使催化、水解、變色的過(guò)程發(fā)生改變，由此可判斷樣品中是否由有機(jī)磷或氨基甲酸酯由此可判斷樣品中是否由有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的存在。類(lèi)農(nóng)藥的存在。 （2）試劑）試劑l固化有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片（速固化有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片（速測(cè)卡）。測(cè)卡）。 lpH7.5緩沖溶液：分別取緩沖溶液：分別取15.0g磷酸氫二鈉磷酸氫二鈉 Na2HPO412H2O與與1.59g無(wú)水磷酸二氫鉀無(wú)水磷酸二氫鉀

48、 KH2 PO4 ，用，用500mL蒸餾水溶解。蒸餾水溶解。 （4）分析步驟）分析步驟l整體測(cè)定法：整體測(cè)定法：選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，泥土， 1cm左右碎片左右碎片 5g放入帶蓋瓶中放入帶蓋瓶中 10mL緩沖溶液緩沖溶液震搖震搖50次次靜置靜置2min以上以上用用白色藥片白色藥片沾取提取液沾取提取液放置放置10min 預(yù)反應(yīng)（預(yù)反應(yīng)（37，10min，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤(rùn)）預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤(rùn)） 將速測(cè)卡對(duì)將速測(cè)卡對(duì)折折 3min 使紅色藥片與白色藥片疊合使紅色藥片與白色藥片疊合反應(yīng)。反應(yīng)。 l表面測(cè)定法（粗篩法）：表面測(cè)定法

49、（粗篩法）：擦去蔬菜表面泥土擦去蔬菜表面泥土滴滴23滴緩沖溶液滴緩沖溶液表面表面用另一片蔬菜在滴液處摩用另一片蔬菜在滴液處摩擦擦取速測(cè)卡取速測(cè)卡將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上放置放置10min 將速測(cè)卡對(duì)折將速測(cè)卡對(duì)折3min 使紅色藥片與使紅色藥片與白色藥片疊合反應(yīng)。白色藥片疊合反應(yīng)。 （5 5）結(jié)果判斷）結(jié)果判斷 以酶被有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥抑制（為陽(yáng)以酶被有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥抑制（為陽(yáng)性）、未抑制（為陰性）表示。性）、未抑制（為陰性）表示。 l與空白對(duì)照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均與空白對(duì)照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均為陽(yáng)性結(jié)果。白色藥片變

50、為天藍(lán)色或與空白對(duì)照卡相為陽(yáng)性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對(duì)照卡相同，為陰性結(jié)果。同，為陰性結(jié)果。 l對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進(jìn)一步確定具對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。體農(nóng)藥品種和含量。（6 6）注意事項(xiàng)）注意事項(xiàng)l韭菜、韭菜、蔥、蒜、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蔥、蒜、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的次蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類(lèi)樣品生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。處理這類(lèi)樣品時(shí)，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面測(cè)定時(shí)，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面測(cè)定法。法。l對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取

51、整對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，減少干擾因素。株蔬菜萃取的方法，減少干擾因素。 部分農(nóng)藥的檢出限（速測(cè)卡）部分農(nóng)藥的檢出限（速測(cè)卡）符合率：在檢出的符合率：在檢出的50份以上陽(yáng)性樣品中，經(jīng)氣份以上陽(yáng)性樣品中，經(jīng)氣相色譜法驗(yàn)證，陽(yáng)性結(jié)果的符合率應(yīng)該在相色譜法驗(yàn)證，陽(yáng)性結(jié)果的符合率應(yīng)該在80以上。以上。 生物化學(xué)測(cè)定法檢測(cè)時(shí)，蔬菜中的水份、生物化學(xué)測(cè)定法檢測(cè)時(shí)，蔬菜中的水份、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂等物質(zhì)不會(huì)對(duì)農(nóng)碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂等物質(zhì)不會(huì)對(duì)農(nóng)藥殘留物的檢測(cè)造成干擾，不必進(jìn)行分離藥殘留物的檢測(cè)造成干擾，不必進(jìn)行分離去雜，節(jié)省了大量預(yù)處理時(shí)間，從而能達(dá)去雜，節(jié)省了大量預(yù)處理

52、時(shí)間，從而能達(dá)到快速檢測(cè)的目的。到快速檢測(cè)的目的。因此該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)單、因此該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)單、無(wú)需儀器或儀器相對(duì)簡(jiǎn)單，適用于現(xiàn)場(chǎng)的無(wú)需儀器或儀器相對(duì)簡(jiǎn)單，適用于現(xiàn)場(chǎng)的定性和半定量測(cè)定。定性和半定量測(cè)定。 （三）化學(xué)方法（三）化學(xué)方法1、氣相色譜、氣相色譜2、有機(jī)磷農(nóng)藥速測(cè)靈法（金屬離子催化、有機(jī)磷農(nóng)藥速測(cè)靈法（金屬離子催化顯色表面皿法）顯色表面皿法）1、氣譜方法、氣譜方法是目前比較權(quán)威的方法，可以精確定量，是目前比較權(quán)威的方法，可以精確定量，可測(cè)出多種不同種類(lèi)農(nóng)藥。但檢測(cè)成本高，可測(cè)出多種不同種類(lèi)農(nóng)藥。但檢測(cè)成本高，儀器操作須專業(yè)人員，前處理要求較高，儀器操作須專業(yè)

53、人員，前處理要求較高，時(shí)間長(zhǎng)。時(shí)間長(zhǎng)。 按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB5009.20-20032、有機(jī)磷農(nóng)藥速測(cè)靈法、有機(jī)磷農(nóng)藥速測(cè)靈法原理原理 l具有強(qiáng)催化作用的金屬離子催化劑，使各類(lèi)有機(jī)磷具有強(qiáng)催化作用的金屬離子催化劑，使各類(lèi)有機(jī)磷農(nóng)藥（磷酸酯、二硫代酸酯、磷酸胺）在催化作用農(nóng)藥（磷酸酯、二硫代酸酯、磷酸胺）在催化作用下水解為磷酸與醇，水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，使顯下水解為磷酸與醇，水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，使顯色劑的變色。色劑的變色。 檢測(cè)方法：檢測(cè)方法： 顯色液顯色液2滴滴l取農(nóng)藥溶液取農(nóng)藥溶液34mL測(cè)試皿測(cè)試皿混勻混勻靜置靜置 催化液催化液 510min 觀察變化。觀察變化。l主要針

54、對(duì)的是有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留檢測(cè)，特別主要針對(duì)的是有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留檢測(cè)，特別是甲胺磷、對(duì)硫磷農(nóng)藥。是甲胺磷、對(duì)硫磷農(nóng)藥。l這種方法采用化學(xué)反應(yīng)原理，避免了通常所這種方法采用化學(xué)反應(yīng)原理，避免了通常所使用生化方法（酶法）的缺點(diǎn)（酶的制備、使用生化方法（酶法）的缺點(diǎn)（酶的制備、保存以及反應(yīng)需比較嚴(yán)格的條件），靈敏度保存以及反應(yīng)需比較嚴(yán)格的條件），靈敏度也達(dá)到一定的要求也達(dá)到一定的要求 二、氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)二、氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥也是一種抑制膽堿酯氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥也是一種抑制膽堿酯酶的神經(jīng)毒物，酶的神經(jīng)毒物，但氨基甲酸酯類(lèi)和膽堿但氨基甲酸酯類(lèi)和膽堿酯酶作用不形成氨基甲酰酯。酯酶作用不形成氨基甲酰酯。它是一種可逆性抑制劑，水解后可復(fù)原它是一種可逆性抑制劑，水解后可復(fù)原成酯酶和氨基甲酸酯，因此它的中毒癥成酯酶和氨基甲酸酯，因此它的中毒癥狀消失快，并且沒(méi)有遲發(fā)性神經(jīng)毒性。狀消失快，并且沒(méi)有遲發(fā)性神經(jīng)毒性。氨基甲酸酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑進(jìn)入人體內(nèi)，氨基甲酸酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑進(jìn)入人體內(nèi)，在胃中酸性條件下可在胃中酸性條件下可與食物中的亞硝基化合物的前體物質(zhì)亞硝酸鹽和硝酸鹽與食物中的亞硝基化合物的前體物質(zhì)亞硝酸鹽和硝酸鹽反應(yīng)生成強(qiáng)致癌性的亞硝基化合物反應(yīng)生成強(qiáng)致癌性的亞硝基化合物(NOC) ，因此認(rèn)為氨，