篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選

1、1 1、概念概念 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜也稱細(xì)胞雜交交，是指，是指兩個(gè)或多個(gè)兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)動(dòng)物細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞的過程胞形成一個(gè)細(xì)胞的過程2 2、原理：、原理： 膜的流動(dòng)性膜的流動(dòng)性4 4、誘導(dǎo)方法：、誘導(dǎo)方法： 聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）、）、 滅活的病毒、電激等。滅活的病毒、電激等。5 5、過程：、過程：3 3、過程：、過程：細(xì)胞相互凝集細(xì)胞相互凝集膜上蛋白質(zhì)分子和膜上蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布脂質(zhì)分子重新排布細(xì)胞膜打開細(xì)胞膜打開細(xì)胞發(fā)生融合細(xì)胞發(fā)生融合病毒表面含有的糖蛋白和一些病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜的糖蛋白發(fā)生酶能夠與細(xì)胞膜的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞

2、相互凝集。作用，使細(xì)胞相互凝集。6 6、優(yōu)點(diǎn)：、優(yōu)點(diǎn)： 突破了有性雜交的局限，突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能使遠(yuǎn)緣雜交成為可能動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么影響？雜交或融合過程有什么影響？問題討論問題討論動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞融合過程中動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞融合過程中不須去除細(xì)胞壁和再生出細(xì)胞壁。不須去除細(xì)胞壁和再生出細(xì)胞壁。問題討論問題討論、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？原理是否相同？相同，都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性相同，都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性問題討論問題討論主要用于

3、制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電激）蕩、電激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性用途用途誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法步驟步驟融合的原理融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目？（一）獲得抗體的傳統(tǒng)方法（一）獲得抗體的傳統(tǒng)方法1、方法：、方法： 向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)

4、注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，從動(dòng)物血清中分離所需抗體。物產(chǎn)生抗體，從動(dòng)物血清中分離所需抗體。2、缺點(diǎn)：、缺點(diǎn)： .3、解決問題的設(shè)想、解決問題的設(shè)想: 免疫反應(yīng)過程中，免疫反應(yīng)過程中，每一個(gè)每一個(gè)B淋巴淋巴細(xì)胞細(xì)胞只分泌一種只分泌一種特異性抗體。特異性抗體。 克隆單一的克隆單一的B淋巴細(xì)胞，形成細(xì)淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群，獲得大量的單一抗體。胞群，獲得大量的單一抗體。4、面臨的新問題：、面臨的新問題： 一個(gè)一個(gè)B淋巴細(xì)胞不可能在體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞不可能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖的。條件下無限增殖的。 .1 1、如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？、如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？問題討論問題

5、討論提示：提示：2 2、瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞有何區(qū)別？、瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞有何區(qū)別？2 2、單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、細(xì)胞融合、篩選篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選篩選，繼續(xù)培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體（選擇性培養(yǎng)基）（選擇性培養(yǎng)基）誘導(dǎo)其融合的誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？方法有哪些？單克隆抗體的制備 單克隆抗體的制備B BB B BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤、細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？、細(xì)胞

6、融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？篩選雜種細(xì)胞篩選雜種細(xì)胞思考：思考：雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞、制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？、制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？3、單克隆抗體的概念：?jiǎn)慰寺】贵w的概念： 化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體4、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：?jiǎn)慰寺】贵w的優(yōu)點(diǎn)： 特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可大量制備。特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可大量制備。（三）（三）單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈= =單克隆抗體單克隆抗體+ +藥物，藥物，用于用于治療腫瘤）治療腫瘤）兩個(gè)過程兩個(gè)過

7、程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì) 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案體實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承承_的遺傳特性，既能的遺傳特性

8、，既能_,又能又能_。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_3、A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段，其培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B細(xì)胞細(xì)胞抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代50B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 世界上第一只克隆羊世

9、界上第一只克隆羊“多莉多莉”的培育過程如的培育過程如圖所示，請(qǐng)據(jù)圖回答：圖所示，請(qǐng)據(jù)圖回答：乙乙甲甲abcdef(1)圖中的甲為蘇格蘭綿羊，圖中的甲為蘇格蘭綿羊，乙為多莉羊。那么，乙為多莉羊。那么，a和和b是通過是通過_分裂形成的，分裂形成的，其其DNA含量是體細(xì)胞的含量是體細(xì)胞的 _ ；c肯定是肯定是_ 細(xì)細(xì)胞，乙的遺傳性狀與提供胞，乙的遺傳性狀與提供 _的綿羊的綿羊 一致一致.減數(shù)減數(shù)一半一半體體細(xì)胞核細(xì)胞核乙乙甲甲abcdef(2)產(chǎn)生產(chǎn)生 甲和乙的過程分別甲和乙的過程分別是是和和（3）在形成乙是的過程中，）在形成乙是的過程中，需要將需要將d的細(xì)胞核取出，將的細(xì)胞核取出，將c細(xì)胞核移入細(xì)

10、胞核移入d細(xì)胞內(nèi)，此技術(shù)細(xì)胞內(nèi)，此技術(shù)叫叫。所需的受體細(xì)胞。所需的受體細(xì)胞大多采用動(dòng)物卵細(xì)胞的原因大多采用動(dòng)物卵細(xì)胞的原因是是（4）綿羊的白色對(duì)黑色為）綿羊的白色對(duì)黑色為顯色。若甲是白色綿羊，要顯色。若甲是白色綿羊，要判斷它是否純合體，選用與判斷它是否純合體，選用與它交配的綿羊最好是它交配的綿羊最好是-有性生殖有性生殖克隆克隆核移植核移植卵細(xì)胞大，易于操作；卵細(xì)卵細(xì)胞大，易于操作；卵細(xì)胞具有繼續(xù)分化的潛能胞具有繼續(xù)分化的潛能。黑毛黑毛乙乙甲甲abcdef（5）在產(chǎn)生多莉羊時(shí)，需將）在產(chǎn)生多莉羊時(shí)，需將e細(xì)胞形成的早期胚胎移入另一細(xì)胞形成的早期胚胎移入另一頭母羊（頭母羊（f）子宮里，這種技術(shù)）子宮里，這種技術(shù)在細(xì)胞工程中叫在細(xì)胞工程中叫（6）繼植物組織培養(yǎng)后，克?。├^植物組織培養(yǎng)后，克隆綿羊的培育成功，證明動(dòng)物細(xì)綿羊的培育成功，證明動(dòng)物細(xì)胞也有胞也有（7）在繁殖多莉羊的過