動物實驗學(xué)-名詞解釋

1、名詞解釋緒論1實驗動物：經(jīng)人工飼育，對其攜帶的微生物實行控制，遺傳背景明確或來源清楚的，用于科研、教學(xué)、生產(chǎn)、檢定以及其他科學(xué)實驗的動物。2實驗用動物：以研究、實驗、教育、藥品生產(chǎn)等為目的而使用的動物。包括實驗動物，野生動物，經(jīng)濟(jì)動物。實驗動物：馴化，育種，生理，解剖，生化，獸醫(yī)，營養(yǎng)及環(huán)境生態(tài)等。動物實驗：研究動物對實驗的反響，動物模型設(shè)計，實驗方法改進(jìn)提高等。3動物實驗的3R原那么w 1、減少Reduction)，在科學(xué)研究中，使用較少量的動物獲得同樣多的試驗數(shù)據(jù)或使用一定數(shù)量的動物能獲得更多實驗數(shù)據(jù)。在減少動物使用量的問題上，對不同的實驗應(yīng)采用不同的處理方式。例如藥品異常毒性實驗。“亮甲

2、素事件w 2、替代Replacement)，使用其他方法而不用動物所進(jìn)行的試驗或其他研究課題，以到達(dá)某一試驗?zāi)康?。或者是使用沒有知覺的試驗材料代替以往使用神志清醒的活的脊椎動物進(jìn)行實驗。w 相對性替代，用人道方法處死動物或使用細(xì)胞、組織及器官進(jìn)行體外實驗研究，或用低等動物替代高等動物的實驗方法；w 絕對性替代，在實驗中完全不用動物。w 3、優(yōu)化Refinement)，在符合科學(xué)原那么的根底上，通過改進(jìn)條件，善待動物，提高動物福利；或完善實驗程序和改進(jìn)實驗技術(shù)，防止或減輕給動物造成的與實驗?zāi)康臒o關(guān)的疼痛和緊張不安。w 優(yōu)化包括實驗動物和動物實驗兩個方面，涉及試驗設(shè)計、實驗技術(shù)、人員培訓(xùn)、飼養(yǎng)環(huán)境

3、、動物運輸?shù)?。w4 標(biāo)準(zhǔn)化實驗動物質(zhì)量控制，包括環(huán)境、微生物、遺傳、營養(yǎng)四個方面內(nèi)容。微生物控制：根底/普通動物：不攜帶所規(guī)定的人畜共患病病原和動物烈性傳染病病原的動物。例如流行性出血熱、弓形體、沙門氏菌、狂犬病毒等。清潔動物：指普通動物應(yīng)排除的病原外，還應(yīng)不攜帶對動物健康危害和對科學(xué)研究干擾比擬大的病原的動物SPF動物 ：無特定病原體動物，除清潔動物應(yīng)排除的病原外，還應(yīng)不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學(xué)實驗干擾大的病原的動物。無菌動物：在動物體內(nèi)無可檢出一切生命體的動物。w 悉生動物：菌動物。環(huán)境分類適用動物等級普通環(huán)境根底動物屏障環(huán)境清潔級動物、SPF級動物隔離環(huán)境SPF級動物、悉生動物

4、、無菌動物遺傳學(xué)控制：A. 近交系動物的定義：經(jīng)至少20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系內(nèi)所有個體都可以追溯到起源于第 20代或以后代數(shù)的一對共同祖先，該品系稱近交系。經(jīng)連續(xù)20代以上親代與子代交配與全同胞兄妹交配有同等效果。B.亞系的形成：近交系的亞系分化是指一個近交系內(nèi)各個分支的動物之間，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)或十分可能存在遺傳差異。a. F20-40 b.分開繁殖100代以上 c.遺傳差異C.支系的形成:一個近交系或亞系內(nèi)部由于存在各種差異而出現(xiàn)的支系。包括環(huán)境、母方、細(xì)胞質(zhì)、可能極小遺傳上差異等。 D.近交系動物的特性：1、同和性：在一個近交系內(nèi)所有動物的所有基因位點都是純合子、個體之間、祖代個體與

5、后代個體之間都是純合子。2、同基因性：一個近交系中所有個體在遺傳上是同源的，所有個體都可追溯到一對共同祖先。個體之間可進(jìn)行器官移植、皮膚移植、腫瘤移植。3、一致性：近交系動物任何可遺傳的體征都是一致的，如血型、組織型、形態(tài)上的特征、行為的類型。如個體間出現(xiàn)差異，是環(huán)境不均一造成的。4、長期的遺傳穩(wěn)定性：近交系動物在遺傳上是穩(wěn)定的。遺傳變異或基因突變的機(jī)率極低，并及時去除遺傳變異的動物。5、可分辨性：近交系動物在遺傳上已有分型，可根據(jù)這些位點的分型很快地將兩個外貌相似的近交系分辨出來。6、個體性：從整個近交系動物來看，每個品系在遺傳上都是獨立的，在某些情況下，品系間的差異顯示在量上，而不在質(zhì)上。

6、便于篩選。7、分布的廣泛性：大局部近交系動物分布在世界各地，不同地區(qū)、不同國家的科學(xué)家有可能去重復(fù)或驗證已取得的理論和數(shù)據(jù)。8、背景資料和數(shù)據(jù)較為完善：近交系動物在培養(yǎng)和保存過程中都有詳細(xì)E近交同類系/同源導(dǎo)入近交系：通過雜交互交或回交等方式將一個基因?qū)氲浇幌抵?，由此形成的一個新的近交系，與原來的近交系只是在一個很小的染色體片段上的基因不同。突變同類系/同源突變近交系：兩個近交系，除了在一個指明位點等位基因不同外，其他遺傳基因全部相同重組近交系：將兩個無關(guān)的近交系動物進(jìn)行交配產(chǎn)生F2代后，經(jīng)過連續(xù)20代以上的全同胞兄妹交配而育成的近交系，稱為重組近交系。雜交F1代動物：由兩個無關(guān)的近交系雜

7、交而繁殖的第一代動物。主要特性： 1、基因型相同2、表現(xiàn)型一致，變異低3、有雜種優(yōu)勢，生活力和抗病力強(qiáng)。4、試驗反響均一5、具有雙系雙親的特性,要通過不同雜交組合的比照觀察，從中篩選出最理想的雜交組合。封閉群動物：以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的一個實驗動物群，在不從其外部引入新的個體的條件下，至少連續(xù)繁殖4代以上，稱為封閉群動物，又稱遠(yuǎn)交系動物。“安死術(shù)的概念：即安樂死術(shù)，是指以人道的方法處死動物的技術(shù)。在處死動物的過程中盡量減少動物的驚慌、焦慮，使其安靜地、無痛苦地死亡。動物實驗室的污水主要來自：動物的尿糞液、籠器具洗刷、廢棄的消毒液、實驗中廢棄的試劑液。實驗動物各論小鼠1.產(chǎn)后發(fā)情: 雌鼠

8、產(chǎn)后2448小時，甚至在產(chǎn)后612小時，可出現(xiàn)動情期，在這段時間里，雌鼠排卵可以接受雄鼠交配并受孕，稱為“血配，出現(xiàn)邊哺乳邊妊娠的情況。2.假性妊娠：雌鼠與不孕雄鼠如結(jié)扎后交配，或用不同方式刺激宮頸后可以造成假性妊娠，可持續(xù)孕期1516天。3. 小鼠在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用 1、各種篩選性實驗2、生物效應(yīng)測定和藥物的效價比擬試驗：主要用封閉群小鼠作血清、疫苗等生物鑒定工作。3、藥物毒性試驗，如LD504、腫瘤學(xué)研究5、微生物、寄生蟲病學(xué) 大鼠一、營養(yǎng)、代謝性疾病研究二、藥物學(xué)研究 大鼠血壓和血管阻力對藥物反響敏感三、炎癥研究 大鼠的踝關(guān)節(jié)對炎癥反響很敏感四、行為學(xué)研究 大鼠具有行為情緒的變化特征

9、，行為表現(xiàn)多樣，情緒敏感，廣泛應(yīng)用于高級神經(jīng)活動的研究。如走迷宮。 兔一、發(fā)熱及熱原實驗二、免疫學(xué)研究 免疫血清，各種血清的研制三、動物血管疾病研究 容易復(fù)制典型的高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化動物模型，兔主動脈粥樣硬化斑塊，冠狀動脈粥養(yǎng)病變與人的病變在組織學(xué)上有一定的差異。最突出的差異是家兔呈現(xiàn)顯著的高膽固醇血癥約為正常時的1040倍，并且?guī)缀踉谒衅鞴俸徒M織內(nèi)均有脂沉積。AS最正確模型是小型豬狗n 醫(yī)學(xué)教學(xué)和外科技術(shù)的研究n 臨床前藥物平安性評價豬一腫瘤研究 皮膚黑色素發(fā)病率與人的相應(yīng)腫瘤有許多共同點。自發(fā)性，良性變惡性二、心血管疾病三、皮膚燒傷四、免疫學(xué)研究獼猴1、 作為人類傳染性疾病的模型

10、 病毒性肝炎，AIDS病、結(jié)核桿菌、弓形體等2、 粥樣硬化癥3、 老年病動物模型豚鼠1.細(xì)菌學(xué)研究 豚鼠對結(jié)核桿菌具有高度的易感性2、研究Vit C 生理功能的重要動物模型3、豚鼠的耳窩管對聲波極為敏感，常用豚鼠進(jìn)行內(nèi)耳疾病研究4、豚鼠皮膚對刺激反響靈敏，并近似于人。 常作為毒物對皮膚作用的研究，如化裝品。轉(zhuǎn)基因動物：用DNA重組技術(shù)將人們所需要的目的基因?qū)雱游锏氖芫鸦蛟缙谂咛?nèi)，使外源目的基因隨細(xì)胞的分裂而增殖并在體內(nèi)表達(dá)，且能穩(wěn)定地遺傳給后代的動物。實驗動物法規(guī)一我國主要的實驗動物管理法規(guī)1、?實驗動物管理條例?19882、?實驗動物質(zhì)量管理方法?1997 2001年修訂：取消大小鼠的

11、普通級3、?實驗動物許可證管理方法試行?2001由八部委聯(lián)合公布4、?實驗動物種子中心管理方法?5、?省級實驗動物質(zhì)量檢測機(jī)構(gòu)技術(shù)審查準(zhǔn)那么?二?實驗動物許可證管理方法試行?本方法于2001年12月5日由科技部、衛(wèi)生部、教育部、農(nóng)業(yè)部、檢疫總局、中醫(yī)藥管理局、解放軍總后勤部衛(wèi)生部聯(lián)合印發(fā)執(zhí)行。三廣東省主要實驗動物管理法規(guī)1、?廣東省實驗動物管理方法?1988年2、?廣東省實驗動物許可證管理細(xì)那么試行?2002年3、?關(guān)于在我省全面實施實驗動物國家標(biāo)準(zhǔn)2001修訂版的通知?2003年4、?廣東省實驗動物管理條例?2010年6月2日第十一屆人民代表大會常務(wù)委員會第十九次會議通過，公布2010年10

12、月1日實施。四實驗動物倫理與福利v 實驗動物倫理： 是指在實驗動物生產(chǎn)、使用活動中，人對實驗動物的倫理態(tài)度和倫理行為標(biāo)準(zhǔn)。主要包括尊重實驗動物生命價值、權(quán)利福利，在動物實驗中審慎考慮平衡實驗?zāi)康摹⒐娎婧蛯嶒瀯游锷鼉r值權(quán)利。v 實驗動物福利： 是讓實驗動物在康樂的狀態(tài)下生存，也就是為了使實驗動物能夠健康、快樂、舒適而采取的一系列行為和給動物提供的相應(yīng)外部條件。動物的三個需求v 維持生命的需要v 維持健康的需求v 維持舒適的需求五大自由：v 享受不受饑渴的自由v 享受生活舒適的自由v 享受不受痛苦傷害和疾病威脅的自由v 享受生活無恐懼悲傷感的自由v 享受表達(dá)天性的自由安死術(shù)： 指以人道的方法

13、處死動物的技術(shù)，使動物在沒有驚恐、痛苦的狀態(tài)下安靜地并盡可能短時間死亡。結(jié)合學(xué)習(xí)的實驗動物福利與倫理，談?wù)勗诳蒲醒芯恐腥绾巫袷亍？蒲性O(shè)計和動物使用：3R原那么，方案符合實驗動物福利倫理要求。工作人員：維護(hù)實驗動物福利，關(guān)愛實驗動物，不得虐待實驗動物。抓取方法得當(dāng)、態(tài)度溫和、動作輕柔。動物處死：安死術(shù)。處死現(xiàn)場，不宜有其他動物在場。確認(rèn)動物死亡后，方可妥善處置尸體。實驗動物福利倫理組織：保證動物設(shè)施、環(huán)境符合要求，工作人員培訓(xùn)和學(xué)習(xí)，動物使用方案審查，監(jiān)督動物使用情況。飼養(yǎng)過程中 動物設(shè)施、環(huán)境：符合標(biāo)準(zhǔn)，定期檢測 籠具、墊料、飼料、飲水：符合標(biāo)準(zhǔn) 籠具定期清洗、消毒，孕、產(chǎn)期動物占最小面積11

14、0%以上； 墊料滅菌、除塵，定期更換； 飼料，滿足妊娠期、哺乳期、術(shù)后恢復(fù)期的營養(yǎng)需要。 禁食、禁水理由充分 護(hù)理：實驗犬、豬分娩，不能自理的幼子，異常動物 環(huán)境豐富化：運動場犬、豬、玩具應(yīng)用過程中 驚恐和疼痛減少到最低程度，實驗現(xiàn)場防止無關(guān)人員進(jìn)入 手術(shù)、解剖或器官移植等手術(shù)：有效麻醉，術(shù)中、后的監(jiān)測、鎮(zhèn)痛和護(hù)理。保定：遵循“溫和保定，善良撫慰，減少痛苦和應(yīng)激反響的原那么保定器具結(jié)構(gòu)合理、規(guī)格適宜、鞏固耐用、環(huán)保衛(wèi)生、便于操作。仁慈終點：是指動物實驗過程中，選擇動物表現(xiàn)疼痛和壓抑的較早階段為實驗的終點。靈長類實驗動物：僅限于非用靈長類動物不可的實驗，除非因傷病不能治愈而備受煎熬者，猿類靈長類

15、動物原那么上不予處死，實驗結(jié)束后單獨飼養(yǎng)，直至自然死亡。運輸過程中 運輸原那么： 平安、舒適、衛(wèi)生的原那么盡快完成。 籠具：適宜，防止動物逃逸或其它動物進(jìn)入、外部微生物侵襲和污染 保證自由呼吸，必要時可提供通風(fēng)設(shè)備。 不應(yīng)與感染性微生物、害蟲及可能傷害動物的物品混裝。 監(jiān)護(hù)和照料：傷病或臨產(chǎn)的懷孕動物。 途中提供必要的飲食和飲用水：運輸時間較長。 運輸考前須知： 裝、卸：最后裝，最先卸 地面或水陸：照料；空運實驗動物，發(fā)運方應(yīng)將飛機(jī)航班號、到港時間等相關(guān)信息及時通知接收方，接收方接收后應(yīng)盡快運送到最終目的地。 溫、高熱、雨雪和寒冷等惡劣天氣時，防護(hù)措施。 專用運輸工具，專用運輸車應(yīng)配置維持實驗

16、動物正常呼吸和生活的裝置及防震設(shè)備。 運輸人員培訓(xùn)。人類疾病模型一人類疾病動物模型是指生物醫(yī)學(xué)研究過程中所建立起來的具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動物實驗對象及相關(guān)實驗材料。二、動物模型的設(shè)計原那么1. 可比性 2. 可重復(fù)性3. 可靠性4. 適用性和可控性 5. 易行性和經(jīng)濟(jì)性6.三影響動物模型的因素一、致模因素對動物模型復(fù)制的影響 藥品試劑、刺激方法二、動物因素對動物模型復(fù)制的影響1動物種類的影響 2動物品系的影響3年齡和體重的影響 4性別因素的影響5生理狀態(tài)和健康因素的影響三、實驗技術(shù)因素對動物模型復(fù)制的影響1實驗季節(jié) 2晝夜不同時間的影響 3麻醉深度的影響4手術(shù)技巧的影響 5實驗給藥的影響 6

17、對照組對造模的影響四、環(huán)境因素和營養(yǎng)因素對動物模型復(fù)制的影響光照噪音飲水 溫度 濕度 氨濃度 氣流速度 飼料 營養(yǎng)水平四動物疾病模型舉例自發(fā)性：自發(fā)性高血壓大鼠、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠SCID mice腫瘤動物模型: 自發(fā)性腫瘤動物模型:C3H 乳腺癌97%129小鼠生殖細(xì)胞腫瘤人腫瘤移植動物模型動脈粥樣硬化動物模型：LDL受體先天性缺陷兔、食餌性動脈粥樣硬化家兔、小型豬、損傷動脈內(nèi)膜引起AS病灶形成基因工程高脂蛋白血癥動物模型：轉(zhuǎn)apoE-Leiden 基因小鼠、apoE基因敲除小鼠、LDL-受體基因敲除小鼠實驗動物生物平安一概念：生物平安是指對基因修飾生物、病原微生物、外來有害生物等生物體可

18、能產(chǎn)生的潛在風(fēng)險或現(xiàn)實危害的防范和控制。換句話說，生物平安是指人們對于由動物、植物、微生物等生物體對人類健康、社會穩(wěn)定和賴以生存的自然環(huán)境可能造成危害的防范。 二 實驗動物生物平安是對實驗動物可能產(chǎn)生的潛在風(fēng)險或現(xiàn)實危害的防范和控制。由實驗動物造成的各種風(fēng)險和危害包括：生產(chǎn)和使用實驗動物中的各個環(huán)節(jié)，如實驗動物的引種、保種、繁育、運輸、進(jìn)出口，使用實驗動物(包括感染和非感染實驗動物)進(jìn)行動物實驗、從事科研活動等過程中實驗動物造成的各種危害。 三感染動物實驗室潛在的生物危害：1對人員的潛在危害：人畜共患病的傳染實驗動物的攻擊性：咬傷、抓傷、踢傷等過敏原：動物尿液、唾液、毛發(fā)、皮屑等2對環(huán)境的潛在

19、危害：廢氣：氣溶膠、臭氧廢水：洗刷用水、手術(shù)用水、其它用水廢物：墊料、動物尸體或組織、一次性物品等3意外事故。四廢棄物處理的首要原那么是所有感染性材料必須在實驗室內(nèi)去除污染、高壓滅菌或燃燒。去除污染：1、高壓蒸汽滅菌 2、消毒劑 3、燃燒三 實驗動物的檢疫原那么1、隔離飼養(yǎng)，防止交叉感染。2、引進(jìn)動物要嚴(yán)格檢疫： 從可信賴的單位引進(jìn)動物； 按國家標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格檢測。3、堅持衛(wèi)生消毒制度：定期對動物房舍和飼養(yǎng)用具進(jìn)行消毒。4、飼養(yǎng)管理人員要定期做健康檢查。5、自繁自養(yǎng)多級保種，提高自我更新能力。6、對實驗動物進(jìn)行免疫接種，提高其防病治病能力；定期檢查，發(fā)現(xiàn)患病或可疑動物，立即隔離。7、嚴(yán)格防止野生動物

20、進(jìn)入實驗動物場所，對死亡動物進(jìn)行無害化處理。四 重要的人畜共患病1、人畜共患病毒性疾病：流行性出血熱、埃博拉病毒感染、馬堡病毒疾病、漢坦病毒疾病、淋巴性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染、靈長類痘病毒病、麻疹、雞新城疫、A型肝炎、猴免疫缺陷綜合征、狂犬病、流感、節(jié)肢動物攜帶性病毒感染。2、人畜共患立克次氏體?。篞熱、貓抓熱。3、人畜共患細(xì)菌性疾病：李斯特菌、猴結(jié)核病、鸚鵡熱、鼠咬熱、鼠疫、布氏桿菌病、鉤端螺旋體病、沙門氏菌病、志賀氏菌病、腸炎耶森氏菌病。4、人畜共患病原蟲性疾病：弓形蟲病、黎形蟲病、隱孢子蟲病、阿米巴原蟲病、大腸纖毛蟲病。 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及合成一、體外培養(yǎng)分類1組織培養(yǎng)(Tissue Cult

21、ure)指的是從體內(nèi)取出組織摹擬體內(nèi)生理環(huán)境,在無菌 、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下，使之生存和生長并維持其結(jié)構(gòu)和功能的方法。2細(xì)胞培養(yǎng)(Cell Culture):是指從動物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。其原理是細(xì)胞分裂增殖。3器官培養(yǎng)Organ Culture：培養(yǎng)的是器官的原基、器官的一局部或整個器官,使之在體外生存、生長和保持一定功能的方法.組織培養(yǎng)的細(xì)胞生物學(xué)特點體內(nèi)外細(xì)胞的差異：當(dāng)人工條件和體內(nèi)實際情況不完全相同時,細(xì)胞在體外培養(yǎng)后,一旦失去神經(jīng)體液調(diào)節(jié)和細(xì)胞間相互影響,生活在缺乏動態(tài)平衡的環(huán)境中,發(fā)生變化那么是必然。細(xì)胞最多見

22、的表現(xiàn)是:返祖Atavism現(xiàn)象失去原有組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)、分化減弱或不顯、細(xì)胞趨單一化、不死性、惡性狀。培養(yǎng)細(xì)胞的分化：不適應(yīng)Deadaption細(xì)胞在體內(nèi)時所擁有的分化特性減弱或不顯。例如肝細(xì)胞在體外喪失了產(chǎn)生酪氨酸轉(zhuǎn)移酶的特性。脫分化和去分化Dedifferentiation由于基因變異而使細(xì)胞失去分化能力。如肝細(xì)胞失掉產(chǎn)生精氨酸酶及氨基酸轉(zhuǎn)移酶的特性后,儲存肝糖元的能力喪失,并很難再現(xiàn)。 因此,不適應(yīng)和脫分化是兩個不同概念，不適應(yīng)只是因為生存條件改變而使分化發(fā)生抑制;從分子水平考慮,脫分化很可能是基因變異所導(dǎo)致.。二、在細(xì)胞生命期階段，少數(shù)情況下，在以上三期任何一點多發(fā)生在傳代末或衰退

23、期，由于某種因素的影響，細(xì)胞可能發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化Spontaneous Transformation。轉(zhuǎn)化的標(biāo)志之一是細(xì)胞可能獲得永生性Immortality或惡性性Malignancy。細(xì)胞永生性也稱不死性，即細(xì)胞獲持久性增殖能力，這樣的細(xì)胞群體稱無限細(xì)胞系Infinite Cell Line，也稱連續(xù)細(xì)胞系Continuous Cell Line。無限細(xì)胞系的形成主要發(fā)生在第二期末，或第三期初階段。細(xì)胞獲不死性后，核型大多變成異倍體Heteroploid。細(xì)胞轉(zhuǎn)化亦可用人工方法誘發(fā)，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞也可能具有惡性性質(zhì)。細(xì)胞永生性和惡性性非同一性狀。三細(xì)胞傳代的三個階段 ：1潛伏期Latent ph

24、ase：細(xì)胞從接種到貼壁生長繁殖的一段時間。2倍體細(xì)胞該期時間長24-96h，連續(xù)細(xì)胞系時間短10-30min。2) 指數(shù)生長期Logarthmic growth phase：細(xì)胞增殖最旺盛時期，一般用細(xì)胞分裂指數(shù)Mitotic index MI表示：即細(xì)胞群中每1000個細(xì)胞中的分裂相數(shù)。體外培養(yǎng)細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.1-0.5%，且受細(xì)胞種類培養(yǎng)液成分、pH、溫度等影響。3)停滯期Stagnate phase：四細(xì)胞克隆技術(shù) 一個克隆的細(xì)胞群體是從一個單一母細(xì)胞繁殖而來，別離單一細(xì)胞并使其繁殖為一細(xì)胞群體的方法成為克隆化(cloning)。 五、細(xì)胞污染的種類和判定 細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染物有

25、細(xì)菌、酵母菌、真菌和支原體。在出現(xiàn)以下情況時培養(yǎng)的細(xì)胞可能有污染:1) 培養(yǎng)液的酸堿度發(fā)生異常的改變。2)培養(yǎng)液出現(xiàn)混濁。3)光鏡觀察到菌絲、菌膜和顆粒。4)細(xì)胞出現(xiàn)死亡或增殖緩慢等。四、細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用1、測試藥物的效應(yīng) 2、雜交瘤技術(shù)中 3、基因轉(zhuǎn)導(dǎo)Gene transfer)4、組織工程中 5、胚胎干細(xì)胞的相關(guān)研究與應(yīng)用小鼠實驗胚胎技術(shù)與應(yīng)用一 超數(shù)排卵：給予發(fā)情間期的母鼠一定量的促進(jìn)卵泡成熟和卵子排放的激素，母鼠可以同時段排放比正常排卵數(shù)多一倍以上的成熟卵子。 PMSG孕馬血清促性腺激素：促進(jìn)卵泡成熟。 HCG人絨毛膜促性腺激素：促進(jìn)卵泡成熟和卵子排放。二 假母：性成熟的母鼠在與結(jié)扎公鼠

26、交配后，子宮內(nèi)膜會處于增殖和接受胚胎著床的生理狀態(tài)。一旦有胚胎進(jìn)入子宮腔內(nèi)，胚胎便可以在其子宮內(nèi)著床發(fā)育成個體。 鼠類動物、兔子有此特性，其他動物需借助激素。三轉(zhuǎn)基因動物:轉(zhuǎn)基因動物(transgenic animal)是指以實驗手段導(dǎo)入的外源基因在其基因組內(nèi)穩(wěn)定整合并能遺傳給后代的一類動物。轉(zhuǎn)基因動物模型: 轉(zhuǎn)基因動物模型(transgenic animal model)是指利用轉(zhuǎn)基因動物制作手段導(dǎo)入的人類疾病基因在其基因組穩(wěn)定整合、遺傳并表達(dá)產(chǎn)生類似于人類疾病的一類動物。嵌合體動物：組成一個動物個體的細(xì)胞來源于兩個或兩個以上的動物品系或品種。三 小鼠轉(zhuǎn)基因動物模型的制作方法：精子載體法、雄原核注射法、胚胎感染法、曲細(xì)精管注射法、胚胎干細(xì)胞法、核移植法。醫(yī)學(xué)動物實驗課題的設(shè)計及影響因素一動物實驗設(shè)計的根本原那么v 對照原那么 ：消除和減少隨機(jī)化原那么所不能控制的抽樣誤差及實驗者誤差。 陽性對照、陰性對照 、空白對照 、自身對照 、歷史性對照 v 隨機(jī)原那么 ：使樣本具有極好的代表性 v 重復(fù)原那么 ：顯示隨機(jī)變量的統(tǒng)計規(guī)律性 v 均衡原那么 ：保證各組的非處理因素一致 v 盲法原那么 ：防止用主觀