中藥化學(xué)苷類-2

1、第5節(jié) 苷的提取、分離及檢識l苷的提?。很盏奶崛。?溶劑法溶劑法l苷的分離：苷的分離： 大孔樹脂法大孔樹脂法 色譜法色譜法l苷的檢識：苷的檢識： 化學(xué)檢識化學(xué)檢識 色譜檢識色譜檢識 1.苷的提取v溶劑法：溶劑法：用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有沸水沸水、甲、甲( (乙乙) )醇醇、正丁醇正丁醇、乙酸乙酯等。、乙酸乙酯等。！注意：注意：苷的水解（酸、酶、堿的影響）。苷的水解（酸、酶、堿的影響）。 原生苷的提取原生苷的提?。浩茐幕蛞种泼傅幕钚?。：破壞或抑制酶的活性。 藥材迅速干燥藥材迅速干燥 拌料無機(jī)鹽如碳酸鈣拌料無機(jī)鹽如碳酸鈣 用沸水、高濃度醇提取

2、用沸水、高濃度醇提取 次生苷或苷元的提取次生苷或苷元的提?。豪妹富钚?。：利用酶活性。 發(fā)酵后或水解后，用親脂性有機(jī)溶劑提取發(fā)酵后或水解后，用親脂性有機(jī)溶劑提取。EtOH 提取中藥EtOH 提取物減壓回收 EtOH濃縮物石油醚提取石油醚部分 （油脂）殘留物Et2O或CHCl3提取EtOAc提取殘留物n-BuOH提取 EtOAc提取液（含單糖甙或含糖較少的甙） n-BuOH提取液（含糖較多的甙）殘留物Et2O或CHCl3提取物 （甙元）2.苷的分離純化v溶劑處理法溶劑處理法：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后，用：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后，用合適的溶劑處理，根據(jù)苷類與雜質(zhì)的溶解度不同分離。

3、合適的溶劑處理，根據(jù)苷類與雜質(zhì)的溶解度不同分離。如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。v鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法：利用醋酸鉛在水或稀醇中能沉淀某類成分：利用醋酸鉛在水或稀醇中能沉淀某類成分的性質(zhì)，進(jìn)行除雜或提純。中性醋酸鉛能沉淀具鄰二酚的性質(zhì)，進(jìn)行除雜或提純。中性醋酸鉛能沉淀具鄰二酚OHOH、-COOH-COOH的酸性苷；堿式醋酸鉛能沉淀酚性成分。的酸性苷；堿式醋酸鉛能沉淀酚性成分。v色譜法色譜法：利用混合物中各組分與固定相和流動相的相互利用混合物中各組分與固定相和流動相的相互之間的作用不同，使各組分以不同程度分布在固定相和之間的作用不同，使各組分以不同程度分布在固定相和流動相中，當(dāng)流動

4、相流過固定相時，各組分以不同的速流動相中，當(dāng)流動相流過固定相時，各組分以不同的速度移動，達(dá)到分離。分離效果好，是一種實(shí)驗(yàn)室常規(guī)分度移動，達(dá)到分離。分離效果好，是一種實(shí)驗(yàn)室常規(guī)分離方法。離方法。l 按流動相分：液相色譜按流動相分：液相色譜（liquid chromatography） 氣相色譜氣相色譜（gas chromatography）l 按操作方式分：薄層色譜按操作方式分：薄層色譜 紙色譜紙色譜 柱色譜柱色譜l 按分離機(jī)理分：吸附色譜按分離機(jī)理分：吸附色譜 分配色譜分配色譜 離子交換色譜離子交換色譜 l 按極性分：正相色譜按極性分：正相色譜 反相色譜反相色譜色譜法（Chromatograp

5、hy）分類：2.苷的分離純化 大孔樹脂吸附色譜大孔樹脂吸附色譜 原理原理：大孔樹脂是一類具有多孔結(jié)構(gòu)、不溶于水的固體高分：大孔樹脂是一類具有多孔結(jié)構(gòu)、不溶于水的固體高分子物質(zhì)，可以通過物理吸附（范德華力）從水溶液中有選擇子物質(zhì)，可以通過物理吸附（范德華力）從水溶液中有選擇的吸附成分，達(dá)到分離目的。的吸附成分，達(dá)到分離目的。 特點(diǎn)特點(diǎn)：選擇性、機(jī)械強(qiáng)度高、再生處理方便、吸附速度快等。：選擇性、機(jī)械強(qiáng)度高、再生處理方便、吸附速度快等。應(yīng)用廣泛，如苷與糖類的分離等。應(yīng)用廣泛，如苷與糖類的分離等。 分類分類：非極性、中極性、極性和強(qiáng)極性四類。選擇的樹脂極非極性、中極性、極性和強(qiáng)極性四類。選擇的樹脂極性

6、與被分離物質(zhì)極性既不能相似（吸附過強(qiáng)），也不能差太性與被分離物質(zhì)極性既不能相似（吸附過強(qiáng)），也不能差太大（無法分離）。常用的有大（無法分離）。常用的有DA-101DA-101、DA-201DA-201、AB-8AB-8型等。型等。 操作操作：樣品用水溶解，上樣后依次用水、含水醇、濃醇洗樣品用水溶解，上樣后依次用水、含水醇、濃醇洗脫。收集洗脫液，回收溶劑，濃縮干燥，即得。脫。收集洗脫液，回收溶劑，濃縮干燥，即得。 聚酰胺色譜聚酰胺色譜 凝膠色譜凝膠色譜苷的分離（有效部位）：2.苷的分離純化 硅膠、氧化鋁吸附色譜：適用于極性低的苷類或苷元的分離。利用被分離組分與吸附劑之間的相互作用（可逆的范德華力

7、）差異進(jìn)行分離。在洗脫過程中，柱內(nèi)不斷地發(fā)生解吸、吸附，再解吸、再吸附的過程。即被吸附的物質(zhì)被溶劑解吸而隨溶劑向下移動，又遇到新的吸附劑顆粒被再吸附，后面流下的溶劑又再解吸而使其下移動。經(jīng)過一段時間以后，該物質(zhì)會向下移動一定距離。此距離的長短與吸附劑對該物質(zhì)的吸附力以及溶劑對該物質(zhì)的解吸(溶解)能力有關(guān)。不同的物質(zhì)由于吸附力和解吸力不同 ，移動速度也不同。吸附力弱而解吸力強(qiáng)的物質(zhì)，移動速度就較快。 分配色譜：以硅膠、纖維素等為支持劑，水飽和的溶劑為流動相進(jìn)行分離，適用于極性較大的苷類成分。常用反相色譜，即以鍵合硅膠為固定相，含水的溶劑系統(tǒng)為流動相分離。苷的純化（有效成分）：3.苷的檢識v化學(xué)檢

8、識 Molish反應(yīng)（反應(yīng)（-萘酚濃硫酸）：糖、苷（）紫色環(huán)。萘酚濃硫酸）：糖、苷（）紫色環(huán)。 糖被氧化成糠醛，糖醛與酚胺縮合生成有色化合物。糖被氧化成糠醛，糖醛與酚胺縮合生成有色化合物。 Fehling或Tollen反應(yīng)：還原糖（）。 苷、非還原糖(-)。比較水解前后結(jié)果，判斷是糖還是苷。 RCHO+2Ag(NH3)2+OHRCOONH4+2Ag+3NH3+H2O RCHO+2Cu(OH)2+NaOHRCOONa+Cu2O+3H2O第6節(jié) 苷的結(jié)構(gòu)研究l純度鑒定l分子式的測定l苷的水解l苷元的結(jié)構(gòu)鑒定l糖的結(jié)構(gòu)鑒定糖的結(jié)構(gòu)鑒定v糖的種類v糖的數(shù)目v糖鏈的結(jié)構(gòu) 位置：苷元-糖、糖-糖 順序：糖

9、-糖 構(gòu)型：苷鍵1.糖的種類的確定 色譜法測定水解液中的單糖，與對照品比較。 PC：最常用。 TLC：點(diǎn)樣量較少5g?？捎脽o機(jī)鹽（強(qiáng)堿弱酸）的水溶液制板，增加樣品承載量，改善分離效果。如0.3mol/L Na2HPO4、0.03mol/L H3BO3等。 HPLC：直接進(jìn)樣，但靈敏度不及GC。 GC：靈敏度高，但需水解、制備衍生物。 NMR法直接測定苷，與標(biāo)準(zhǔn)品的糖數(shù)據(jù)比較。1HNMR、13CNMR 二維NMR常見單糖紙色譜hRfBAWBAW：正丁醇醋酸水（：正丁醇醋酸水（4:1:5, 4:1:5, 上層）上層）BEWBEW：正丁醇乙醇水（：正丁醇乙醇水（4:1:24:1:2）BBPWBBPW

10、：正丁醇苯吡啶水（：正丁醇苯吡啶水（5:1:3:35:1:3:3）PhOHPhOH：水飽和苯酚：水飽和苯酚 2.糖的數(shù)目的確定 MS法 測定苷和苷元分子量，根據(jù)差值或碎片質(zhì)荷比差值計(jì)算。 色譜法測定水解液中的單糖 TLC-Scan、HPLC-定量，以單糖對照品為標(biāo)準(zhǔn)。 NMR法1HNMR：根據(jù)糖端基質(zhì)子信號數(shù)目確定；或全乙?；?、全甲基化數(shù)目推測。13CNMR：根據(jù)糖端基碳信號數(shù)目（90-112ppm）確定；或苷和苷元碳信號差值推斷。 二維NMR 3.糖的連接位置苷元與糖13CNMR 苷化位移（苷化位移（glycosylation shift, GS）：）：苷元與糖結(jié)合成苷苷元與糖結(jié)合成苷后，苷

11、元的成苷碳原子（后，苷元的成苷碳原子（-C）與相鄰的碳原子（）與相鄰的碳原子（-C）信信號會發(fā)生位移，其他碳信號不變；糖端基碳原子與游離單號會發(fā)生位移，其他碳信號不變；糖端基碳原子與游離單糖信號相比也發(fā)生了位移。糖信號相比也發(fā)生了位移。 苷元：醇苷，苷元：醇苷，-C 低場位移低場位移 4-10ppm -C 高場位移高場位移 1-4.6ppm 酚苷，酚苷，-C 高場位移高場位移 -C 低場位移低場位移 糖：端基糖：端基C低場位移低場位移 4-7ppm 相鄰相鄰C高場位移高場位移 1-4ppm 二維二維NMR OCHOHOOHOHOHMeOH62.571.377.475.997.477.5OCHO

12、HOOHOMeOH62.471.277.374.6104.677.413CNMR 法：法：苷的碳譜數(shù)據(jù)與單糖的碳譜數(shù)據(jù)比較，苷的碳譜數(shù)據(jù)與單糖的碳譜數(shù)據(jù)比較，根據(jù)苷化位移規(guī)律可確定單糖的連接位置。若內(nèi)側(cè)根據(jù)苷化位移規(guī)律可確定單糖的連接位置。若內(nèi)側(cè)糖的某碳原子向低場移動（糖的某碳原子向低場移動（4-7ppm），），而相鄰兩個而相鄰兩個碳原子又略向高場移動（碳原子又略向高場移動（1-4ppm），），確定內(nèi)側(cè)糖的確定內(nèi)側(cè)糖的碳原子是連接糖的位置。碳原子是連接糖的位置。OCHOHOOHOHOH62.571.377.475.997.477.5OCHOHOOHOMeOH62.471.277.374.610

13、4.677.44.糖的連接位置糖與糖6.苷鍵構(gòu)型的確定酶水解法 麥芽糖酶水解 -苷鍵 苦杏仁苷酶水解 -苷鍵NMR1HNMR：糖成苷后，端基質(zhì)子常位于較低場。H-2為a鍵的糖，如葡萄糖，形成-苷或-苷時，偶合常數(shù)J不同，由此可判斷苷鍵構(gòu)型。H-2為e鍵的糖，如鼠李糖，形成不同構(gòu)型苷的J值相近，無法判斷。OHHe-OOROHHOHHOHOROHHHOHOHOR-OHeOHHOHHOHHOHHOROHC 3H aC 2123aeJaa = 6-9H zC 3H aC 2123aJae = 2-3.5H z-D -葡 萄 糖 -D -葡 萄 糖a21OHHCH3OHHOHOHHORH21OHHCH3

14、OHHOHOHHHOR-L-鼠李糖苷鼠李糖苷 J12 = Jae = 2-3 Hz-L-鼠李糖苷鼠李糖苷 J12 = Jae = 2-3 Hz13CNMR：糖成苷后端基碳原子向低場位移，而其他碳變化不大。 2D-NMR（NOE） -D-葡萄糖苷，H1H2 -D-葡萄糖苷，H1H3、H1H5復(fù)習(xí)思考題：1.名詞解釋名詞解釋苷苷 原生苷原生苷 次生苷次生苷 乙酰解反應(yīng)乙酰解反應(yīng) 酶解反應(yīng)酶解反應(yīng) Smith降解降解 Molish反應(yīng)反應(yīng) 與與構(gòu)型構(gòu)型 全甲基化甲醇解全甲基化甲醇解 苷化位移苷化位移 端基碳端基碳 氧苷氧苷 2.比較以下各化合物水解難易，并說明理由。比較以下各化合物水解難易，并說明理由。ABDCN