課用肝糖原的提取與ppt課件

1、實驗四實驗四肝糖原的提取與鑒定肝糖原的提取與鑒定劉曼劉曼manna_liu126實驗報告問題：實驗報告問題：字如其人字如其人結(jié)果無分析結(jié)果無分析照抄照抄糖原的構(gòu)造特點糖原的構(gòu)造特點 糖原是一種高分子化合物(分子量約為400萬)。微溶于水，無復原性，與碘作用生成紅色。1. 葡萄糖單元以-1,4-糖苷 鍵形生長鏈。2. 約10個葡萄糖單元處構(gòu)成分枝，分枝處葡萄糖以-1,6-糖苷鍵銜接，分支添加，溶解度添加。實驗原理v肝糖原是糖在體內(nèi)的重要儲存方式之一，儲存量雖然不多，但在代謝過程中，它是維持血糖平衡及體內(nèi)糖的重要來源之一，其合成或分解，對血糖濃度的調(diào)理起著重要的作用。肝臟

2、肝臟蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)(沉淀沉淀)糖原糖原(上清上清)糖原沉淀糖原沉淀與碘液反響與碘液反響斑氏試劑斑氏試劑三氯乙酸三氯乙酸95%乙醇，離心乙醇，離心HCl水解水解加加H2O溶解溶解肝糖原：棕紅色磚紅色沉淀實驗試劑10w/v三氯乙酸溶液三氯乙酸溶液1w/v三氯乙酸溶液三氯乙酸溶液295v /v乙醇乙醇3濃鹽酸濃鹽酸4實驗試劑20%w/vNaOH溶液溶液1碘液碘液2斑氏試劑斑氏試劑3實驗器材洗凈的石英砂洗凈的石英砂1研缽研缽2離心機離心機3電磁爐電磁爐4實驗步驟一、肝糖原的提取稱取肝組織稱取肝組織2g兩個組用，置研缽兩個組用，置研缽中。參與洗凈的石英砂少許及中。參與洗凈的石英砂少許及10三三氯醋酸氯醋酸

3、2ml，然后研磨。，然后研磨。再加再加5三氯乙酸三氯乙酸4ml，繼續(xù)研磨，至，繼續(xù)研磨，至肝臟組織已充分磨成肉糜狀為止。然肝臟組織已充分磨成肉糜狀為止。然后以后以2500rmin離心離心10min。將上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中，丈量其將上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中，丈量其體積。體積。參與等體積的參與等體積的95乙醇。混勻后，靜乙醇?；靹蚝?，靜置置10min，此時可見糖原呈絮狀析出，此時可見糖原呈絮狀析出。將此混合物以將此混合物以2500rmin離心離心10min。棄去上清液，并將離心管倒置于濾。棄去上清液，并將離心管倒置于濾紙上紙上12min。向沉淀內(nèi)參與蒸餾水向沉淀內(nèi)參與蒸餾水2ml，再用玻璃，再用玻

4、璃棒攪拌沉淀至溶解，即得糖原溶液。棒攪拌沉淀至溶解，即得糖原溶液。分兩份分兩份實驗步驟二、肝糖原的鑒定糖原的顏色反響：在白瓷盤的兩個凹糖原的顏色反響：在白瓷盤的兩個凹槽內(nèi)，一個滴加槽內(nèi)，一個滴加3滴肝糖原溶液，一滴肝糖原溶液，一個滴加個滴加3滴蒸餾水。滴蒸餾水。在兩個凹槽內(nèi)各加在兩個凹槽內(nèi)各加1滴滴I2-KI溶液，在溶液，在桌面上來回晃動白瓷盤。桌面上來回晃動白瓷盤。比較兩凹槽內(nèi)溶液顏色有何不同，并比較兩凹槽內(nèi)溶液顏色有何不同，并解釋之。解釋之。取出冷卻，然后以取出冷卻，然后以20NaOH溶液中和至溶液中和至中性中性(用用pH試紙檢驗，參與約試紙檢驗，參與約3滴滴)。在上述溶液內(nèi)，參與斑氏試劑

5、在上述溶液內(nèi)，參與斑氏試劑2ml2ml。再將該試管置沸水浴加熱再將該試管置沸水浴加熱5min5min，取出，取出冷卻。察看沉淀的生成，并解釋之。冷卻。察看沉淀的生成，并解釋之。肝糖原水解實驗：將剩余的糖原溶液肝糖原水解實驗：將剩余的糖原溶液轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入1支試管內(nèi)，參與濃鹽酸支試管內(nèi)，參與濃鹽酸3滴后，滴后，將之放在沸水浴中加熱將之放在沸水浴中加熱10 min。本卷須知v取肝臟組織時，吸去其附著血液，因血液能夠含復原性葡萄糖，會影響后面糖原的鑒定。v研磨應充分，使細胞破裂，肝糖原釋放出來。研磨不充分會得不到糖原或含量很少，影響后面的鑒定。v研磨后勻漿轉(zhuǎn)入離心管離心可用滴管轉(zhuǎn)移，假設采用倒入，不能灑落

6、管外，應盡量轉(zhuǎn)移干凈。v離心時與另一組的離心管平衡，對稱放入離心機。v上清液參與95乙醇后，留意混勻，防止分層，可用滴管吹吸混勻，或玻璃棒攪拌混勻。v調(diào)理pH，必需調(diào)至中性。糖原會在濃鹽酸在沸水浴下分解成小分子化合物，其中有復原性的麥芽糖和葡萄糖。復原性糖會在堿性條件下，班氏試劑與其在沸水浴下生成磚紅色Co2O沉淀。班氏試劑為堿性溶液，所以須用20%NaOH溶液中和至中性。過酸，Cu2+會變得較為穩(wěn)定，不容易發(fā)生反響，所以不能進展實驗。 假設溶液中復原糖含量較低，產(chǎn)生的氧化亞銅便會相應減少，因此實驗后能夠只會出現(xiàn)綠色、混濁的黃色或橙色沉淀物。班氏試劑中有CuSO4，NaCO3和檸檬酸鈉。CO3

7、2-提供堿性環(huán)境，檸檬酸鈉為絡合物，協(xié)助Cu2+與葡萄糖反響，沸水浴下，Cu2+變?yōu)镃u+，即Cu2O，Cu2O為磚紅色沉淀。葡萄糖被氧化為糖酸，麥芽糖亦如此。v糖原儲存于細胞內(nèi)，采用研磨勻漿等方法可使細胞破碎，低濃度的三氯醋酸能使蛋白量變性，破壞肝組織中的酶且沉淀蛋白質(zhì)，而糖原仍穩(wěn)定地保管于上清液中，從而使糖原與蛋白質(zhì)等其它成分別分開來。糖原不溶于乙醇而溶于熱水，故先用95乙醇將濾液中糖原沉淀，再溶于熱水中。v糖原水溶液呈乳樣光澤，遇碘呈紅棕色。這是糖原中葡萄糖長鏈構(gòu)成的螺旋中，依托分子間引力吸附碘分子后呈現(xiàn)的顏色。糖原還可被酸水解為葡萄糖，利用呈色反響和葡萄糖的復原性，可斷定肝組織中糖原的存在。vCuSO4十2NaOH Na2 SO4+Cu(OH)2v2Cu(OH)2十C6H12O6 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2Ov2CuOH Cu2O(紅色)+H2OvCu(OH)2 CuO(黑色)+H2Ov提取糖原時，首先將新穎的肝組織與石英砂及三氯乙酸共同研磨。這樣當肝組織被充分破碎后，其中的蛋白質(zhì)會被三氯乙酸所沉淀。而糖原仍留在溶液中。然后離心除去沉淀，濾液中的肝糖原可經(jīng)過參與乙醇而沉淀下來。將乙醇沉淀的糖原溶于水，一部分用做碘的顏色反響，另一部分經(jīng)酸水解成葡萄糖后，用斑氏試劑進展檢驗。v糖原中葡萄糖螺旋鏈