吉林省伊通滿族自治縣高中生物 第一章 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序（二）課件 新人教選修3

1、1.2 基因工程的基本操作程序（二）1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化 transformation）轉(zhuǎn)化：轉(zhuǎn)化：目的基因進入受體細胞內(nèi)，并且在受體細胞內(nèi)穩(wěn)定存在目的基因進入受體細胞內(nèi)，并且在受體細胞內(nèi)穩(wěn)定存在和表達的過程。和表達的過程。1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化 transformation）1、將目的基因?qū)胫参锛毎⒛康幕驅(qū)胫参锛毎?）導(dǎo)入細胞的種類）導(dǎo)入細胞的種類（2）導(dǎo)入方法）導(dǎo)入方法農(nóng)桿菌

2、轉(zhuǎn)化（最常用）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化（最常用）體細胞體細胞雙子葉植物和裸子植物雙子葉植物和裸子植物其他植物可用酚類物質(zhì)處理后用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化其他植物可用酚類物質(zhì)處理后用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化 transformation）1、將目的基因?qū)胫参锛毎?、將目的基因?qū)胫参锛毎?）導(dǎo)入方法）導(dǎo)入方法基因槍法基因槍法 花粉管通道法花粉管通道法1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化 transformation）2、將目的

3、基因?qū)雱游锛毎?、將目的基因?qū)雱游锛毎?）導(dǎo)入細胞的種類）導(dǎo)入細胞的種類（2）導(dǎo)入方法）導(dǎo)入方法 顯微注射法顯微注射法最好是受精卵細胞最好是受精卵細胞1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化 transformation）3、將目的基因?qū)胛⑸锛毎?、將目的基因?qū)胛⑸锛毎?）微生物作為受體的優(yōu)勢）微生物作為受體的優(yōu)勢（2）導(dǎo)入方法）導(dǎo)入方法 Ca2+處理處理繁殖速度快，可大量生產(chǎn)繁殖速度快，可大量生產(chǎn) 生產(chǎn)成本低生產(chǎn)成本低胰島素原的人工合成胰島素原的人工合成1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本

4、操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化 transformation）3、將目的基因?qū)胛⑸锛毎?、將目的基因?qū)胛⑸锛毎?）原核生物作為受體細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沒有空間結(jié)構(gòu)，）原核生物作為受體細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沒有空間結(jié)構(gòu)，需要在體外加工。需要在體外加工。1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化 transformation）生物種類生物種類植物細胞植物細胞動物細胞動物細胞微生物細胞微生物細胞導(dǎo)入方法導(dǎo)入方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用）（最常用）基因槍法基因槍法花

5、粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法Ca2+處理法（感處理法（感受態(tài)細胞）受態(tài)細胞）受體細胞受體細胞受精卵或受精卵或體細胞體細胞受精卵受精卵原核細胞（細菌）原核細胞（細菌）1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化 transformation）生物生物種類種類植物細胞植物細胞動物細胞動物細胞微生物細胞微生物細胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化過程過程將目的基因插入將目的基因插入Ti質(zhì)質(zhì)粒的粒的T-DNA上上Ca2+處理導(dǎo)入農(nóng)桿菌細胞處理導(dǎo)入農(nóng)桿菌細胞侵染植物細胞侵染植物細胞目目的基因整合到受體細的基因整合到受體細胞的染色體上胞的

6、染色體上DNA上上植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)試試管苗表達目的基因管苗表達目的基因產(chǎn)生相應(yīng)性狀。產(chǎn)生相應(yīng)性狀。將含有目的基因?qū)⒑心康幕虻谋磉_載體提純的表達載體提純?nèi)∈芫讶∈芫扬@顯微注射微注射獲得導(dǎo)獲得導(dǎo)入目的基因的受入目的基因的受體細胞體細胞早期胚早期胚胎培養(yǎng)胎培養(yǎng)胚胎移胚胎移植植獲得新性狀獲得新性狀的動物。的動物。Ca2+處理細胞處理細胞感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞重組的基因重組的基因表達載體與感表達載體與感受態(tài)細胞混合受態(tài)細胞混合感受態(tài)細胞感受態(tài)細胞吸收吸收DNA分子分子完成轉(zhuǎn)化完成轉(zhuǎn)化目目的基因表達，的基因表達，獲得新性狀。獲得新性狀。1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第四步：目的基因的檢測與鑒定第四步：目的基因的檢測與鑒定抗蟲鑒定、抗病鑒定活抗蟲鑒定、抗病鑒定活性鑒定等性鑒定等DNA分子分子限制片段限制片段限制性酶切割限制性酶切割瓊脂糖電泳瓊脂糖電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上與放射性標記與放射性標記DNA探針雜交探針雜交放射自顯影放射自顯影帶有帶有DNA片段的凝膠片段的凝膠凝膠凝膠濾膜濾膜用緩沖液轉(zhuǎn)用緩沖液轉(zhuǎn)移移DNA吸附有吸附有DNA片片段的膜段的膜DNA分子雜交分子雜交32P-抗體抗體裂解細胞，表達蛋白轉(zhuǎn)裂解細胞，表達蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上