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文檔簡(jiǎn)介

1、RNA干擾機(jī)制干擾機(jī)制安德魯安德魯法爾和克雷格法爾和克雷格梅洛梅洛+Arthur KornbergDNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)者聚合酶的發(fā)現(xiàn)者1959Roger D. Kornberg真核生物轉(zhuǎn)錄機(jī)制真核生物轉(zhuǎn)錄機(jī)制2006 拓?fù)洚悩?gòu)酶DNA聚合酶III前導(dǎo)鏈前導(dǎo)鏈模板解鏈酶 引發(fā)酶 RNA引物后隨鏈模板DNA聚合酶III岡崎片段 親本DNA單鏈結(jié)合蛋白引發(fā)體 半不連續(xù)復(fù)制與岡畸片段半不連續(xù)復(fù)制與岡畸片段(1)引發(fā)酶合成RNA引物 (2)DNA聚合酶III在引物3-OH延伸,合成岡崎片段 (3)DNA聚合酶I切除引物,填補(bǔ)缺口 (4)連接酶封閉缺口 型復(fù)制型復(fù)制 滾環(huán)式復(fù)制滾環(huán)式復(fù)制 D D環(huán)復(fù)制環(huán)復(fù)制

2、PCR: Viral detectionPCR: DNA fingerprintingPCR: DNA fingerprintingDNAmRNATranscriptionCellPolypeptide(protein)TranslationRibosome4. 轉(zhuǎn)錄的底物是轉(zhuǎn)錄的底物是4 4種核糖核苷三磷酸種核糖核苷三磷酸(rNTP)(rNTP),即,即ATPATP、GTPGTP、CTPCTP和和UTPUTP;RNARNA與模板與模板DNADNA的堿基相互配對(duì)關(guān)系為的堿基相互配對(duì)關(guān)系為G-C G-C 和和A-UA-U。而復(fù)制的底物是。而復(fù)制的底物是dNTPdNTP,堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系為,堿基互

3、補(bǔ)配對(duì)關(guān)系為G-CG-C和和A-TA-T。5. RNARNA的合成依賴(lài)于的合成依賴(lài)于RNARNA聚合酶的催化作用,而聚合酶的催化作用,而DNADNA復(fù)制需復(fù)制需要要DNADNA聚合酶,兩種聚合酶系不同。聚合酶,兩種聚合酶系不同。6. 轉(zhuǎn)錄時(shí)轉(zhuǎn)錄時(shí)DNA-RNADNA-RNA雜合雙鏈分子是不穩(wěn)定的,雜合雙鏈分子是不穩(wěn)定的,RNARNA鏈在延伸鏈在延伸過(guò)程中不斷從模板鏈上游離出來(lái),模板過(guò)程中不斷從模板鏈上游離出來(lái),模板DNADNA又恢復(fù)雙鏈狀態(tài);又恢復(fù)雙鏈狀態(tài);而而DNADNA復(fù)制叉形成之后一直打開(kāi),不斷向兩側(cè)延伸,新合成的復(fù)制叉形成之后一直打開(kāi),不斷向兩側(cè)延伸,新合成的鏈與親本鏈形成子鏈。鏈與親

4、本鏈形成子鏈。7. 真核生物基因和真核生物基因和rRNArRNA、tRNAtRNA基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄生成的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄生成的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物一般都需經(jīng)過(guò)加工,才能具有生物功能和成熟的一般都需經(jīng)過(guò)加工,才能具有生物功能和成熟的RNARNA分子。分子。 RNA TranscriptProtein Coding RegionTerminator SequencePromoter/Control Region3 Untranslated RegionTranscription Start Site5 Untranslated Region Constitutive GeneHeat Shock GeneP1

5、P2Different promotersRNAPol. 2、轉(zhuǎn)錄的延伸、轉(zhuǎn)錄的延伸3、轉(zhuǎn)錄的終止、轉(zhuǎn)錄的終止 強(qiáng)終止子的結(jié)構(gòu)強(qiáng)終止子的結(jié)構(gòu) 因子不依賴(lài)轉(zhuǎn)錄終止機(jī)制因子不依賴(lài)轉(zhuǎn)錄終止機(jī)制 Robert Holley H. G. Khorana Marshal Nirenberg 1968 肽鏈的延伸過(guò)程肽鏈的延伸過(guò)程 肽鏈的延伸過(guò)程肽鏈的延伸過(guò)程Francois JacobJacques Monod1965trpRtrpOtrpEDCBAPtrpLtrpa色氨酸色氨酸阻遏蛋白阻遏蛋白不轉(zhuǎn)錄不轉(zhuǎn)錄 6個(gè)層次個(gè)層次轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄RNA 加工加工mRNA 轉(zhuǎn)運(yùn)轉(zhuǎn)運(yùn)mRNA 翻譯翻譯mRNA 降解降解1.

6、蛋白質(zhì)降解蛋白質(zhì)降解1、DNA及染色體水平的調(diào)控及染色體水平的調(diào)控2、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控2.1 基因轉(zhuǎn)錄的順式作用元件和反式作用元件基因轉(zhuǎn)錄的順式作用元件和反式作用元件 順式作用元件:基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)。順式作用元件:基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)。(增強(qiáng)子、啟動(dòng)子、沉默子及應(yīng)答元件等)(增強(qiáng)子、啟動(dòng)子、沉默子及應(yīng)答元件等) 反式作用元件:轉(zhuǎn)錄因子,與順式作用元件相結(jié)合,反式作用元件:轉(zhuǎn)錄因子,與順式作用元件相結(jié)合,影響轉(zhuǎn)錄。影響轉(zhuǎn)錄。 轉(zhuǎn)錄因子:基本轉(zhuǎn)錄因子,轉(zhuǎn)錄激活因子,轉(zhuǎn)錄抑轉(zhuǎn)錄因子:基本轉(zhuǎn)錄因子,轉(zhuǎn)錄激活因子,轉(zhuǎn)錄抑制因子制因子轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域(左圖為結(jié)合域(左圖為H-T-H結(jié)構(gòu),右圖為鋅指結(jié)構(gòu))結(jié)構(gòu),右圖為鋅指結(jié)構(gòu))二聚體化域是負(fù)責(zé)蛋白與蛋白相互作用形成二聚體的結(jié)構(gòu)域,常二聚體化域是負(fù)責(zé)蛋白與蛋白相互作用形成二聚體的結(jié)構(gòu)域,常見(jiàn)的特征性結(jié)構(gòu)有:見(jiàn)的特征性結(jié)構(gòu)有:亮氨酸拉鏈(亮氨酸拉鏈(leucine zipper)和螺旋

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