尿樣中氧氟沙星的含量測(cè)定浙江大學(xué)

1、尿樣中氧氟沙星的含量測(cè)定尿樣中氧氟沙星的含量測(cè)定 組員：胡帆、周凡漪實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)?zāi)康模?1.分析臨床上廣泛用于治療泌尿系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)感染的藥物氧氟沙星。 2.比較LC-UV與LC-熒光分析氧氟沙星的區(qū)別。背景資料：背景資料： 氧氟沙星是第三代喹諾酮類新型廣譜抗菌藥,并具分布廣,吸收好,半衰期長(zhǎng)等特點(diǎn),臨床廣泛應(yīng)用具有廣譜抗菌作用。尿樣采集：尿樣采集： 受試者空腹飲水200ml排尿, 留取1h后尿樣作空白,一次口服OFLX片600 mg, 收集1，2，3，4，5小時(shí)后的尿樣，做好標(biāo)記。LC-UVLC-UV法分析尿樣中氧氟沙星的含量法分析尿樣中氧氟沙星的含量一、實(shí)驗(yàn)條件：一、實(shí)驗(yàn)條件：1.1 實(shí)

2、驗(yàn)儀器 Agilent高效液相色譜儀，G1314B-VWD紫外檢測(cè)器，色譜柱，量瓶1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 氧氟沙星片劑，甲醇(色譜純)，尿樣，空白尿樣，HAc溶液 1.3色譜條件 色譜柱:C18 5m (250 mm 416 mm) 流動(dòng)相: 甲醇/0.05 %HAC=80：20 流速:1ml/min 進(jìn)樣量：20l 柱溫：室溫 檢測(cè)波長(zhǎng)：在250400nm處掃描，選取有最大吸收度處作為檢測(cè)波長(zhǎng)。實(shí)際過(guò)程中選用294nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。二、實(shí)驗(yàn)方法二、實(shí)驗(yàn)方法2.1 尿液的預(yù)處理 取空白尿樣和尿樣，13000r/min離心10min，取上清液經(jīng)0.45m的水相濾膜過(guò)濾，保留濾液。 2.2 氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)

3、液的配制 精密稱取氧氟沙星片劑200 mg ,置50ml容量瓶中,以流動(dòng)相稀釋至刻度,配成4.0 mg/ml的儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋400倍，吸取20l作為進(jìn)樣品。 2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 測(cè)定時(shí)，取標(biāo)準(zhǔn)液0.5，1，1.5，2，2.5ml,用流動(dòng)相稀釋于10ml量瓶，吸取20l作為進(jìn)樣品，記錄色譜圖，以氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)濃度對(duì)峰面積進(jìn)行回歸，得到回歸方程。2.4 空白尿樣的配制 取空白尿液濾液1ml,用流動(dòng)相稀釋20倍，吸取20l作為進(jìn)樣品。2.5 尿樣的配制 取尿液濾液1ml,用流動(dòng)相稀釋20倍，吸取20l作為進(jìn)樣品。2.6 進(jìn)樣 先進(jìn)1針標(biāo)準(zhǔn)品觀察流動(dòng)相配置是否合適,合適后,進(jìn)1針空白尿樣觀察有

4、無(wú)雜質(zhì)在測(cè)定波長(zhǎng)處影響左氧氟沙星的吸收,然后進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣品,標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣5針來(lái)檢驗(yàn)儀器精密度。2.7回收率實(shí)驗(yàn) 取濃度為0.5，1，1.5 g/ml的氧氟沙星尿樣，稱取氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品，配置為相同濃度，通過(guò)峰面積比值，測(cè)定回收率。2.8精密度實(shí)驗(yàn) 取濃度為0.52.5g/ml的氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品，1d內(nèi)重復(fù)測(cè)定5次,測(cè)得日內(nèi)RSD，隔日測(cè)定5 次, 測(cè)得日間RSD。紫外檢測(cè)測(cè)定尿液中左氧氟沙星的含量 紫外檢測(cè)測(cè)定尿液中左氧氟沙星的含量，實(shí)驗(yàn)操作方法除檢測(cè)器設(shè)定與熒光檢測(cè)器不同外（檢測(cè)波長(zhǎng)：294nm），其余設(shè)置和操作均與熒光檢測(cè)時(shí)相同。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 熒光法測(cè)定尿樣中左氧氧氟沙星濃度標(biāo)

5、準(zhǔn)曲線圖紫外法測(cè)定尿樣中左氧氟沙星濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線圖精密度日內(nèi)、 日間RSD 測(cè)量熒光法 日內(nèi)RSD=2.6% 日間RSD=3.3%紫外法 日內(nèi)RSD=0.8% 日間RSD=2.9%回收率實(shí)驗(yàn)回收率 熒光 98.7%、101.4%、101.2%； 紫外 99.6%、98.4%、99.1%。熒光法測(cè)定尿樣中排出左氧氟沙星量（g）-時(shí)間曲線 紫外檢測(cè)測(cè)定尿樣中排出左氧氟沙星量（g）-時(shí)間曲線 熒光法測(cè)定尿樣中排出左氧氟沙星的累計(jì)量（g）-時(shí)間曲線 紫外檢測(cè)測(cè)定尿樣中排出左氧氟沙星的累計(jì)量（g）-時(shí)間曲線 討論 1、采用LC-UV法與LC-熒光法分別測(cè)定尿樣中氧氟沙星的含量，并且比較兩種方法測(cè)量結(jié)果的不

6、同，因此要求測(cè)量過(guò)程具有對(duì)照性：待測(cè)樣品，標(biāo)準(zhǔn)品，空白樣品的濃度兩者均相同，流動(dòng)相也相同，都采用外標(biāo)法，但因?yàn)榉治龇椒ǖ牟煌?，檢測(cè)波長(zhǎng)不同。 2、實(shí)驗(yàn)中所采用的尿液因?yàn)樾迈r尿液，如果無(wú)法做到這點(diǎn)，因在尿液中加入二甲苯等防腐劑，避免尿液因細(xì)菌繁殖造成混濁，影響試驗(yàn)效果。而且尿樣中的藥物會(huì)分解，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因而最好是現(xiàn)取，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不使用時(shí)放入冰箱保存 3、由于沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，在測(cè)定時(shí)以左氧氟沙星片作為標(biāo)準(zhǔn)品使用。而事前沒(méi)有對(duì)其中左氧氟沙星的實(shí)際含量進(jìn)行過(guò)標(biāo)定，也不能排除片劑中的其他成分（如輔料中的抗氧化劑等）對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。 4、實(shí)驗(yàn)本來(lái)應(yīng)該統(tǒng)計(jì)每次的尿液量，計(jì)算出每次排尿中含有的左氧氟沙星

7、的含量，然后制的排出藥物量-時(shí)間曲線，因?yàn)楸敬螌?shí)驗(yàn)中沒(méi)有精密的容器量尿液體積，只能大概估計(jì)尿液量，測(cè)算出尿液中藥物的量。 5、實(shí)驗(yàn)中考慮到出峰時(shí)間和分離度以及實(shí)際操作的便利程度，最終選擇的流動(dòng)相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是還是有脫尾現(xiàn)象，在熒光檢測(cè)中特別明顯。 6、從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，我們可以認(rèn)為熒光檢測(cè)器作為檢測(cè)裝置，靈敏度、專屬性好（沒(méi)有雜質(zhì)峰），較紫外檢測(cè)器優(yōu)。 標(biāo)準(zhǔn)品中左氧氟沙星出峰圖（紫外檢測(cè)器檢測(cè)）min00.511.522.5mAU 050100150200250300 VWD1 A, 波長(zhǎng)=294 nm (20080524DOX000028.D) 1.045尿樣中左氧氟沙星出峰圖（紫外檢測(cè)器檢測(cè)）min00.511.522.533.544.5mAU 05101520253035 VWD1 A, 波長(zhǎng)=294 nm (20080524DOX000033.D) 1.116 2.363標(biāo)準(zhǔn)品中左氧氟沙星出峰圖（熒光檢測(cè)法）min00.511.522.533.5LU 0510152025 FLD1 A, Ex=295, Em=505 (STU20080523DOX000097.D) 1.