復(fù)方利咽潤喉顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)

1、復(fù)方利咽潤喉顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究(一)    作者：孔銘， 錢大瑋， 朱玲英， 周軍【關(guān)鍵詞】 熊果酸；,復(fù)方利咽潤喉顆粒；,高效液相色譜摘要：目的建立高效液相色譜蒸發(fā)光散色（HPLCELSD）法測定復(fù)方利咽潤喉顆粒中熊果酸的含量。方法采用漢邦ODSC18 (4.6 mm×250 mm,5 m)色譜柱；柱溫:30；流動相:甲醇水冰醋酸(83170.1)；流速:1.0 ml/min；檢測器：Alltech ELSD2000蒸發(fā)光散射檢測器（漂移管溫度:72，氣體流量：1.9 L/min）。結(jié)果熊果酸在4.22742.27 g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回收

2、率為98.54%，RSD為2.12%。結(jié)論該方法具有良好的精密度和重現(xiàn)性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，是測定熊果酸含量的較好方法。關(guān)鍵詞：熊果酸； 復(fù)方利咽潤喉顆粒； 高效液相色譜蒸發(fā)光散色法； 山楂復(fù)方利咽潤喉顆粒由山楂等多味中藥經(jīng)加工制成的中藥復(fù)方制劑。具有清熱利咽、寬胸清咽等功能，臨床上用于外感風(fēng)熱所致的咽喉發(fā)干、聲音嘶啞及急慢性咽炎、扁桃體炎見上述證候者，常用于保護(hù)聲帶作用。 在處方組成固定，原料穩(wěn)定，工藝穩(wěn)定的前提下，本文對該制劑中熊果酸1的含量進(jìn)行了測定，作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究內(nèi)容。1 儀器與試劑1.1 儀器Waters高效液相色譜儀，Alliance 2695四元泵及自動進(jìn)樣系統(tǒng)、柱溫箱、Empo

3、wer色譜工作站；Alltech ELSD 2000 檢測器； Millipore MilliQ純水器； METTLER萬分之一及十萬分之一電子天平；GA10B無油低噪音空氣源。2 方法與結(jié)果2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性實驗色譜柱：Lichrospher C18 (4.6 mm×250 mm，5 m)，柱溫30，流動相：甲醇水冰醋酸（83170.1），流速1.0 ml/min蒸發(fā)光散射檢測法檢測，漂移管溫度72，氣體流速1.9 L/min，進(jìn)樣量20 l。在此條件下,供試品溶液中熊果酸與相鄰成分達(dá)到基線分離,分離度大于1.5,理論板數(shù)以熊果酸峰計可達(dá)10 000。2.2 對照品溶液的

4、制備精密稱取熊果酸對照品適量，加甲醇溶解制成每毫升含1.409 mg的溶液,作為對照品溶液。2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密吸取熊果酸對照品溶液（ 1.409 mg/ml）3.0，5.0，10.0，15.0，20.0，30.0 l，注入液相色譜儀，測定其峰面積，以考察在選定的HPLC條件下熊果酸線性范圍。以進(jìn)樣量的常用對數(shù)值作為橫坐標(biāo),峰面積的常用對數(shù)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y= 1.642 6X+ 4.056 4，r= 0.999 6。2.4 供試品溶液的制備取復(fù)方利咽潤喉顆粒5 g，研細(xì)，精密稱定，置50 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，超聲提取30 min，放冷，濾液

5、過濾，殘渣用少量甲醇洗，合并濾液，蒸干，甲醇溶解并定容至10 ml，搖勻，用微孔濾膜（0.45 m）濾過，取濾液，即得。2.5 陰性對照液的制備按處方比例稱取除去山楂的其他藥材適量，依照復(fù)方利咽潤喉顆粒的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液，依法測定。結(jié)果陰性樣品在熊果酸相應(yīng)的保留時間無干擾。見圖1。a供試品 b對照品 c陰性對照溶液圖1 HPLC色譜圖（略） 2.6 精密度實驗按選定的HPLC條件下以1.409 mg/ml的熊果酸對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，10 l/次，以考察儀器的精密度，RSD為2.15%。 2.7 重復(fù)性實驗平行提取5份樣品，在所擬訂色譜條件下分別進(jìn)樣20 l，測

6、定，計算結(jié)果熊果酸含量為 0.449 mg/g，RSD（）為2.64%。2.8 穩(wěn)定性實驗對同一供試品溶液每隔2 h進(jìn)樣1次，依法測定，結(jié)果表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定，測得熊果酸含量RSD為 3.03。2.9 回收率實驗采用加樣回收法，取已知含量（0.449 mg/g）的樣品適量，分別加入熊果酸對照品(1.106 mg/ml)1.0 ml，按上述色譜條件，計算回收率。結(jié)果見表1。表1 加樣回收率實驗結(jié)果（略） 2.10 樣品含量測定分別取不同批號的本品各2份，精密稱定，按供試品制備方法制備測定,計算結(jié)果取平均值。結(jié)果見表2。表2 樣品含量測定結(jié)果（略） 3 討論3.1 作者首先比較了甲醇、乙

7、醚、醋酸乙酯對樣品中熊果酸含量的影響，結(jié)果測得樣品含量分別為0.42，0.21，0.23 mg/g，結(jié)果表明乙醚，醋酸乙酯提取不完全，故選擇甲醇為提取溶媒。3.2 隨后比較了超聲時間對熊果酸提取的影響，分別選擇的超聲時間為15，30，45 ，60 min，結(jié)果測得樣品含量為0.36，0.41，0.40，0.41 mg/g，說明超聲提取30 min后熊果酸不再增加，故選擇超聲30 min。3.3 熊果酸與齊墩果酸在紫外末端吸收很難分離較好24，選用紫外檢測器，操作條件十分嚴(yán)格，噪音對結(jié)果影響很大，而采用ELSD檢測器檢測，不受外部環(huán)境干擾，分離較好，且簡便、靈敏，故本方法為復(fù)方利咽潤喉顆粒中熊果酸含量測定的有效分析方法。參考文獻(xiàn)：1 國家藥典委員會.中國藥典，部S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.2 王 旭，關(guān) 晶.大山楂口嚼片定性定量的研究J.中國中藥雜志，1999，24（11）：675.