尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一課件

1、病例(bngl) 患者(hunzh)，男，68歲，因浮腫、無尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用慶大霉素和復(fù)方新諾明而出現(xiàn)浮腫，尿量進(jìn)行性減少。體格檢查：眼瞼浮腫，雙下肢可凹性水腫。 1.初步診斷為什么疾病？ 2.要明確診斷需要哪些進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)室檢查？急性(jxng)腎小管壞死第一頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)(jinyn)Urine Protein Analysis黃 輝第二頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一教學(xué)(jio xu)目標(biāo)了解(lioji)蛋白尿的定義一一理解蛋白尿形成的原因(yunyn)和機(jī)制二二掌握尿液蛋白質(zhì)檢查的檢測原理、方法學(xué)評價(jià)、質(zhì)量保證及臨床意義三三第三頁

2、，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一教學(xué)內(nèi)容蛋白尿的定義一一蛋白尿形成的原因(yunyn)和機(jī)制二二尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)三三尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)(jinyn)的臨床意義四四第四頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一一、蛋白尿的定義(dngy)腎小球的濾過(l u)腎小管與集合(jh)管的重吸收腎小管的分泌正常人尿液中蛋白質(zhì)的含量很少！第五頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一一、蛋白尿的定義(dngy) 健康人尿液蛋白質(zhì)含量很少，當(dāng)尿液蛋白質(zhì)超過150mg24h-1或超過100mgL-1時(shí),蛋白質(zhì)定性試驗(yàn)為陽性(yngxng)稱為蛋白尿(proteinuria)。 第六頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一二、蛋

3、白尿形成的原因(yunyn)和機(jī)制腎性蛋白尿renal proteinuria腎小球性蛋白尿glomerular proteinuria混 合 性 蛋 白 尿mixed proteinuria腎小管性蛋白尿tubular proteinuria第七頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一二、蛋白尿形成(xngchng)的原因和機(jī)制腎前性蛋白尿prerenal proteinuria溢出(y ch)性蛋白尿overflow proteinuria第八頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一二、蛋白尿形成的原因(yunyn)和機(jī)制腎后性蛋白尿postrenal proteinuria組織性蛋白尿histic pr

4、oteinuria第九頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一二、蛋白尿形成(xngchng)的原因和機(jī)制腎小球性蛋白尿：蛋白尿的選擇性選擇性蛋白尿：腎小球損傷程度(chngd)較輕，以分子量49萬中相對分子量的白蛋白為主。非選擇性蛋白尿：腎小球損傷(snshng)程度較重，尿液中大分子量蛋白質(zhì)和中分子量蛋白質(zhì)同時(shí)存在。第十頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一二、蛋白尿形成的原因(yunyn)和機(jī)制蛋白尿種類病變部位尿液蛋白質(zhì)特點(diǎn)腎小球性蛋白尿腎小管性蛋白尿混合性蛋白尿溢出性蛋白尿組織性蛋白尿第十一頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一二、蛋白尿形成(xngchng)的原因和機(jī)制蛋白尿種類病變部位尿液蛋白質(zhì)特點(diǎn)

5、腎小球性蛋白尿腎小球中分子量蛋白、大分子量蛋白質(zhì)增加腎小管性蛋白尿腎小管小分子量蛋白質(zhì)增加為主混合性蛋白尿 腎小球、腎小管腎小球、腎小管受損程度不同而有一定的差異溢出性蛋白尿腎前性小分子量蛋白質(zhì)組織性蛋白尿腎小管、泌尿組織T-H蛋白質(zhì)增加為主第十二頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn) 尿液中有無(yu w)蛋白質(zhì)？ 尿液中蛋白質(zhì)的量？ 尿液中有哪一類(y li)蛋白質(zhì)？第十三頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)蛋白質(zhì)理化(lhu)性質(zhì)蛋白質(zhì)的兩性(lingxng)電離和等電點(diǎn)蛋白質(zhì)的變性蛋白質(zhì)的沉淀蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)第十四頁，共四十九頁

6、。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一尿液蛋白質(zhì)定性(dng xng)加熱(ji r)乙酸法磺基水楊酸法干化學(xué)(huxu)試帶法三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)第十五頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定性(dng xng)：加熱乙酸法蛋白質(zhì)加熱加熱(ji r)蛋白質(zhì)變性蛋白質(zhì)沉淀稀乙酸稀乙酸第十六頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定性：加熱(ji r)乙酸法u方法經(jīng)典而準(zhǔn)確，為蛋白定性確證實(shí)驗(yàn)(shyn)；u特異性強(qiáng)，干擾因素少；u靈敏度較低，為150mg/L；upH值、鹽離子濃度對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。第十七頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿

7、液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定性(dng xng)：磺基水楊酸法蛋白質(zhì)酸性酸性(sun xn)條件條件氨基酸陽離子蛋白鹽沉淀磺酸根離子磺酸根離子第十八頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定性(dng xng)：磺基水楊酸法u操作簡便、反應(yīng)(fnyng)靈敏、結(jié)果顯示快；u檢測靈敏度高，為50mg/L；u造影劑、青霉素鉀鹽等可以造成假陽性。第十九頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定性(dng xng)：干化學(xué)試帶法蛋白質(zhì)酸堿指示劑復(fù)合物+酸堿指示劑電離(dinl)發(fā)生顏色改變第二十頁，共四十九頁。尼龍(n

8、lng)膜層：防止大分子物質(zhì)對反應(yīng)污染。碘酸鹽層：破壞維生素C等干擾(gnro)物質(zhì)。試劑(shj)層：與尿中所檢測化學(xué)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。支持層：塑料片，起支持作用。試帶組成尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)第二十一頁，共四十九頁。尿干化學(xué)分析儀工作(gngzu)原理示意圖機(jī)械系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)電路系統(tǒng)第二十二頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定性(dng xng)：干化學(xué)試帶法u操作簡便、快速、易于標(biāo)準(zhǔn)化；u對球蛋白(dnbi)、本周蛋白(dnbi)的敏感度低；u不同類型試帶靈敏度有一定的區(qū)別，在70100mg/L。第二十三頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(

9、jinyn)如何(rh)選擇這些定性方法？尿液蛋白質(zhì)定性(dng xng)第二十四頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定性(dng xng)實(shí)驗(yàn)方法操作性靈敏度實(shí)驗(yàn)干擾因素加熱乙酸法較復(fù)雜150mgL-1尿液中鹽濃度磺基水楊酸法簡便50mgL-1藥物及造影劑干化學(xué)試帶法簡便100mgL-1對球蛋白不敏感第二十五頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定性(dng xng)采用(ciyng)干化學(xué)法或磺基水楊酸法進(jìn)行尿蛋白初查。加熱乙酸法作為尿蛋白定性確證實(shí)驗(yàn)。當(dāng)不同定性實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果不一致時(shí)如何處理？第二十六頁，共四十九

10、頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)1.尿液中存在(cnzi)的蛋白質(zhì)為球蛋白。加強(qiáng)與臨床醫(yī)師的溝通(gutng)非常必要！磺基水楊酸法陽性，干化學(xué)試帶法為陰性2.蛋白質(zhì)含量介于兩種方法靈敏度之間。3.尿液中含有青霉素或者造影劑等物質(zhì)。第二十七頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定量(dngling)雙 縮 脲 法比 濁 法染料(rnlio)結(jié)合法需要對尿液標(biāo)本進(jìn)行濃縮處理！第二十八頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一方 法原 理 雙縮脲法蛋白質(zhì)與堿性銅溶液作用，形成紫色縮合物。比濁法酸性條件下，生物堿類試劑與蛋白質(zhì)結(jié)合沉淀。染料結(jié)合法染料

11、與蛋白質(zhì)結(jié)合后最大吸收峰發(fā)生漂移。三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定量(dngling)第二十九頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)如何選擇這些(zhxi)定量方法？方 法方法優(yōu)缺點(diǎn)雙 縮 脲 法蛋白質(zhì)測定經(jīng)典方法，但靈敏度較低比 濁 法操作簡便，線性范圍窄，影響因素多染料結(jié)合法顯色穩(wěn)定，容易對比色器皿造成污染尿液蛋白質(zhì)定量(dngling)第三十頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)定量(dngling)1.根據(jù)(gnj)實(shí)驗(yàn)室條件選擇合適的定量方法。2.衛(wèi)生部臨檢中心推薦雙縮脲法和麗春紅S法。3.加強(qiáng)尿液蛋白質(zhì)

12、定量的質(zhì)量控制非常必要！第三十一頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一尿液蛋白質(zhì)分類(fn li)SDS-PAGESDS-PAGE凝膠電泳雙向凝膠電泳 三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)第三十二頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)分類(fn li)：SDS-PAGE凝膠電泳 SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合，消除了蛋白質(zhì)分子(fnz)中的電荷差異，再通過聚丙烯酰胺的分子篩作用，將蛋白質(zhì)按分子量大小相互分離。第三十三頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液標(biāo)本(biobn)葡聚糖、PEG等SDS-PAGE凝膠電泳染色(rns)、光密度掃描第三十四

13、頁，共四十九頁。第三十五頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一1 2 3 4AlbAlb小小分分子子量量蛋蛋白白大大分分子子量量蛋蛋白白1 1 腎小球性蛋白尿腎小球性蛋白尿2 2 腎小管性蛋白尿腎小管性蛋白尿3 3 生理性蛋白尿生理性蛋白尿4 4 混合性蛋白尿混合性蛋白尿三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)第三十六頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)分類(fn li)：雙向凝膠電泳 蛋白組學(xué)的重要技術(shù)，第一向基于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同進(jìn)行分離(fnl)，第二向則按蛋白質(zhì)分子量的不同進(jìn)行分離。第三十七頁，共四十九頁。第三十八頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白

14、質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)尿液蛋白質(zhì)分類(fn li)1.SDS-PAGE凝膠電泳用于對尿液蛋白質(zhì)進(jìn)行(jnxng)分類。2.雙向凝膠電泳主要用于科學(xué)研究。第三十九頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)第四十頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一三、尿液蛋白質(zhì)的檢驗(yàn)(jinyn)質(zhì)量保證u分析前質(zhì)量控制；u分析中質(zhì)量控制：堅(jiān)持室內(nèi)質(zhì)控、遵守SOP操作規(guī)程(cozuguchng)、注意實(shí)驗(yàn)過程中的影響因素；u分析后質(zhì)量控制：完善的報(bào)告審核制度，結(jié)果不符合時(shí)及時(shí)分析原因。第四十一頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一u生理性蛋白尿u病理性蛋白尿四、尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)(jinyn)的臨床意義

15、腎前性蛋白尿腎性蛋白尿腎后性蛋白尿第四十二頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一u功能性蛋白尿（functional proteinuria）u體位(t wi)性蛋白尿 (postural proteinuria)u偶然性蛋白尿 (accidental proteinuria)四、尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)(jinyn)的臨床意義生理性蛋白尿第四十三頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一腎小球性蛋白尿腎小管性蛋白尿混合性蛋白尿溢出性蛋白尿組織性蛋白尿四、尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)(jinyn)的臨床意義第四十四頁，共四十九頁。尿液蛋白質(zhì)檢驗(yàn)一 患者，男，68歲，因浮腫、無尿入院。入院前因上呼吸道感染多次使用慶大霉素和復(fù)方新諾明而出現(xiàn)浮腫，尿量進(jìn)行性減少。體格檢查：眼瞼(ynjin)浮腫，雙下肢可凹性水腫。 1.初步診斷為什么疾病？ 2.要明確診斷需要哪些進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)室檢查？病例(bngl)急性(jxng)腎小管壞死第四十五頁，共