大容量注射劑生產(chǎn)企業(yè)檢查要點(diǎn)學(xué)習(xí)資料

1、大容雖注射劑生產(chǎn)企業(yè)檢查要點(diǎn)一、大容雖注射劑特點(diǎn)和其他無菌制劑相比，大容雖注射劑的特點(diǎn)在于體積大,易導(dǎo)致：(1) 發(fā)生微生物污染、內(nèi)毒素污染和微粒污染后對(duì)使用者的后果更嚴(yán)重；(2) 降低微生物、內(nèi)毒素和微粒污染的技術(shù)復(fù)雜性較高；(3) 廠房面積大且高，維持廠房潔凈度的難度大、成本高;(4) 生產(chǎn)設(shè)備體積大且固定，需要在線清潔和消毒滅菌(5) 工藝管路和在線清潔消毒管路并存，連接復(fù)雜，發(fā)生污染和交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)大；(6) 大規(guī)模地處理物料和包裝材料，生產(chǎn)周期較長，發(fā)生微生物污染并在生產(chǎn)過程中繁殖的概率增加。二、生產(chǎn)工藝流程大容雖注射劑產(chǎn)品包裝：玻璃瓶、聚丙烯塑料輸液瓶、非PVC多層共擠膜或復(fù)合膜軟

2、袋。本文以玻璃瓶大容雖注射劑為例，談?wù)剬?duì)大容雖注射劑生產(chǎn)企業(yè)檢查要點(diǎn)的理解。玻璃瓶，具有耐高溫、良好的透明度、相容性及阻水阻氣性能。但是，玻璃瓶體積大、易破碎、口部密封性差、碰撞時(shí)會(huì)引起隱形裂傷，膠塞與藥液直接接觸易產(chǎn)生脫落而使藥液混濁出現(xiàn)微粒。大容量注射劑（玻璃瓶）工藝流程圖輸液瓶原輔料D級(jí)區(qū)C級(jí)區(qū)A級(jí)區(qū)(J)原料稱重在D級(jí)區(qū)進(jìn)行。應(yīng)設(shè)計(jì)有足夠大的待稱重原料和己稱重原料的存放場地。稱雖器具的雖程應(yīng)適用。同一批產(chǎn)品使用的多種原料應(yīng)集中存放。應(yīng)由中間控制人員對(duì)稱好的物料及重雖進(jìn)行雙重復(fù)核。技術(shù)先進(jìn)的企業(yè)已采用計(jì)算機(jī)化的自動(dòng)物料識(shí)別一重雖控制系統(tǒng)代替人工復(fù)核。(二) 配制濃配和稀配：我國大部分企業(yè)

3、采用濃配一稀配兩步。通過加入活性炭粉末于熱的濃溶液中，以吸附分子雖較大的雜質(zhì)，如細(xì)菌內(nèi)毒素。但該工藝有明顯的缺點(diǎn)：活性炭中的可溶性雜質(zhì)將進(jìn)入藥液而無法除去；容易污染潔凈區(qū)和空調(diào)凈化系統(tǒng)。從風(fēng)險(xiǎn)一利益角度，更合理的配制工藝是步配制O2.一步配制法目前工業(yè)發(fā)達(dá)國家已普遍取消了加活性炭濃配一過濾一稀配的傳統(tǒng)工藝，而采用不加活性炭的一步配制工藝。一步配制法避免了傳統(tǒng)工藝的風(fēng)險(xiǎn)。采用一步配制法的前提是原料生產(chǎn)企業(yè)采用可靠的去除細(xì)菌內(nèi)毒素污染的工藝，如粗品溶解后加活性炭處理后結(jié)晶，使活性炭帶入的可溶性雜質(zhì)留在母液中。原料生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)采取防止微生物污染的措施，能穩(wěn)定可靠地供應(yīng)微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素污染受控的原料

4、。配制投料過程中應(yīng)通過收集核對(duì)物料標(biāo)簽等措施進(jìn)行投料復(fù)核，保證原輔料按要求加入。（三）過濾大容雖注射劑通常采用孔徑為O.22微米的彈筒式終端過濾器，并配合使用適當(dāng)?shù)念A(yù)過濾器，截留溶液中的微粒和微生物。應(yīng)在使用前后對(duì)終端過濾器進(jìn)行完整性試驗(yàn)，如發(fā)泡點(diǎn)試驗(yàn)，以確保過濾效果。也有采用兩個(gè)串聯(lián)的0.22微米終端過濾器以進(jìn)一步降低使用過程中過濾器破損的風(fēng)險(xiǎn)。1. （四）灌封洗瓶和洗塞：洗瓶通常米用粗洗一精洗工藝。粗洗常用毛刷刷洗或超聲波清洗，以去除瓶內(nèi)外壁的各種污染物。精洗多采用多道注射用水噴射淋洗，以徹底去除污染物。應(yīng)對(duì)精洗后的輸液瓶進(jìn)行可見異物檢查。丁基膠塞使用前應(yīng)由洗塞機(jī)進(jìn)行清洗，必要時(shí)加入一定雖

5、的甲基硅油進(jìn)行硅化。硅化的目的是防止膠塞粘連，并有利于膠塞在自動(dòng)壓塞機(jī)軌道上的運(yùn)動(dòng)。但硅化后的膠塞可能向藥液釋放微H硅油，并吸附在玻璃瓶壁上造成掛壁現(xiàn)象，雖然對(duì)使用者無害，但容易引起輸液瓶未洗干凈的誤解。經(jīng)清洗的膠塞如不立刻使用應(yīng)滅菌。應(yīng)采用純蒸汽，以過度殺滅程序進(jìn)行滅菌。對(duì)膠塞的滅菌有兩種形式：在洗塞機(jī)內(nèi)在線滅菌和裝袋后在滅菌釜內(nèi)滅菌。在線滅菌使用具備在線滅菌的洗塞機(jī)時(shí)，可采用在線滅菌。該類洗塞機(jī)與純蒸汽連接。膠塞清洗完成后，通入純蒸汽的同時(shí)，裝置膠塞的籃筐繼續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)，保證膠塞均勻受熱。經(jīng)過度殺滅程序后，用經(jīng)0.22微米除菌過濾的空氣將膠塞吹干、冷卻。完成后在A級(jí)層流下裝入無菌塑料袋中存放。由

6、于最后包裝染菌的風(fēng)險(xiǎn)較高，膠塞存放時(shí)間不宜過長。裝袋后滅菌經(jīng)清洗的膠塞，在防止微粒污染的措施下裝入可通透水蒸汽的塑料袋中并密封，再放入滅菌設(shè)備中滅菌。經(jīng)驗(yàn)證的滅菌程序能可靠地殺滅微生物，因此膠塞可存放較長時(shí)間。兩種滅菌工藝都應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證。2. 灌裝與壓塞：灌裝和壓塞在C級(jí)背景下的A級(jí)層流下進(jìn)行。應(yīng)采用自動(dòng)灌裝和壓塞機(jī)完成灌裝和壓塞過程。應(yīng)對(duì)灌封環(huán)境進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)控。軋蓋：軋蓋會(huì)產(chǎn)生大雖金屬微粒，對(duì)潔凈區(qū)環(huán)境產(chǎn)生影響，故軋蓋間的設(shè)計(jì)應(yīng)保證壓蓋過程不污染對(duì)環(huán)境要求最高的灌裝間及灌裝過程。另外，未軋蓋的產(chǎn)品，膠塞可能松脫，存在產(chǎn)品污染的風(fēng)險(xiǎn)，因此經(jīng)灌封的產(chǎn)品應(yīng)盡快軋蓋。在廠房平面設(shè)計(jì)和工藝布局設(shè)計(jì)中必須權(quán)

7、衡兩方面的風(fēng)險(xiǎn)和利益。目前實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)中軋蓋工序既有設(shè)計(jì)在與灌裝間一墻之隔的D級(jí)區(qū)的，也有設(shè)計(jì)在緊鄰灌裝間的C級(jí)區(qū)內(nèi)的。從盡雖降低產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)且簡化潔凈區(qū)域布局，減少輔助面積的角度，軋蓋工序設(shè)計(jì)在與配制和灌裝同一級(jí)別C級(jí)，這樣可以共用一個(gè)人員更衣通道，但應(yīng)做到以下兩點(diǎn)，以防止微粒對(duì)產(chǎn)品的污染：軋蓋機(jī)和灌裝機(jī)應(yīng)分置于兩個(gè)房間。 軋蓋間對(duì)灌裝間為相對(duì)負(fù)壓；或者軋蓋機(jī)安裝在有足夠排風(fēng)的裝置內(nèi)，該裝置對(duì)其外圍環(huán)境為相對(duì)負(fù)壓。可采用其他防止微粒污染風(fēng)險(xiǎn)的措施，但應(yīng)通過驗(yàn)證證明其有效性。在完成軋蓋進(jìn)行滅菌前，應(yīng)根據(jù)需要取樣監(jiān)測產(chǎn)品滅菌前微生物污染及污染菌的耐熱性。（五）滅菌滅菌區(qū)應(yīng)限制無關(guān)人員進(jìn)入。產(chǎn)品應(yīng)在規(guī)

8、定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行滅菌。產(chǎn)品滅菌主要有蒸汽滅菌和過熱水噴淋或過熱水浴三種。 蒸汽滅菌：采用清潔蒸汽（工業(yè)蒸汽經(jīng)過濾除去鐵銹等異物）為加熱介質(zhì)。冷卻介質(zhì)為經(jīng)消毒處理的水。過熱水噴淋：采用純化水為直接接觸產(chǎn)品的介質(zhì)。在滅菌腔室中加入一定雖的純化水，通過循環(huán)泵經(jīng)噴嘴均勻噴灑在產(chǎn)品上。純化水通過由工業(yè)蒸汽加熱的熱交換器達(dá)到滅菌需要的溫度。在冷卻階段該純化水乂通過低溫水冷卻的熱交換器降溫，并使產(chǎn)品降溫。過熱水?。号c過熱水噴淋相同的加熱一冷卻原理。區(qū)別在于產(chǎn)品完全浸沒在水中。國際上普遍要求具有防止滅菌后產(chǎn)品二次污染微生物的措施，主要方法有：蒸汽滅菌采用的冷卻介質(zhì)為經(jīng)消毒處理的水，消毒方法主要是化學(xué)消毒法，如加入

9、次氨酸，使游離氯濃度達(dá)到lOppm以上并至少保持1小時(shí)，可以殺滅生長態(tài)的微生物。但該方法無法保證殺滅細(xì)菌芽抱，可靠性較差，已趨于淘汰。過熱水滅菌采用的冷卻介質(zhì)即經(jīng)過腔室-加入熱交換器-冷卻熱交換器-腔室循環(huán)的純化水。在產(chǎn)品滅菌階段該純化水自身也被滅菌，在封閉狀態(tài)下冷卻后依然保持無菌，是最可靠的防止產(chǎn)品二次污染的設(shè)計(jì)。 如果能對(duì)所有產(chǎn)品進(jìn)行檢漏，確保有密封缺陷的產(chǎn)品能被剔除，則可不控制產(chǎn)品冷卻水的微生物污染。（六）燈檢通過燈檢剔除個(gè)別有異物的產(chǎn)品。應(yīng)通過生產(chǎn)工藝及其控制保證產(chǎn)品中有異物的概率很低。燈檢僅為防止有異物產(chǎn)品上市的最后措施。（七）包裝產(chǎn)品經(jīng)貼標(biāo)簽、裝箱后成為成品。包裝線最重要的是防止混

10、淆。應(yīng)確保標(biāo)簽正確，批號(hào)、生產(chǎn)日期和有效期等信息準(zhǔn)確。產(chǎn)品數(shù)、標(biāo)簽消耗數(shù)等應(yīng)合理平衡。為防止混淆，包裝區(qū)應(yīng)防止無關(guān)人員進(jìn)入。三、工藝布局大容雖注射劑因加工處理的物料雖大，在布局時(shí)應(yīng)注意生產(chǎn)現(xiàn)場有足夠的空間滿足人流和物流的合理流動(dòng)。傳統(tǒng)灌封工藝包括洗瓶，灌裝，加塞三個(gè)步驟。通常洗瓶結(jié)束到密封完成需要數(shù)秒乃至數(shù)十秒的時(shí)間，來自環(huán)境的微粒和微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)較大，應(yīng)采用C級(jí)背景的局部A級(jí)保護(hù)暴露的容器和藥液。輸液瓶經(jīng)最終清洗后由A級(jí)層流保護(hù)的傳送帶送入灌裝機(jī)。歐盟GMP對(duì)污染風(fēng)險(xiǎn)不高的產(chǎn)品灌裝環(huán)境要求為C級(jí)。所謂污染風(fēng)險(xiǎn)不高指產(chǎn)品不易長菌、灌裝速度很快、采用非敞口的容器、容器暴露于空氣數(shù)秒以內(nèi)即密封等

11、情況。近年國際國內(nèi)越來越多地采用吹-灌-封系統(tǒng)。該系統(tǒng)實(shí)際上使得容器從高溫塑料顆粒制備后即刻完成灌裝和密封，與外界幾乎沒有空氣交流。歐盟GMP允許在D級(jí)區(qū)安裝該系統(tǒng)，用于最終滅菌的大容雖注射液的生產(chǎn)。四、質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)分析與質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)控制方法大容雖注射劑質(zhì)雖保證的重點(diǎn)在于無菌保證、細(xì)菌內(nèi)毒素和微粒污染的控制。此外，防止混淆和交叉污染也需要特別關(guān)注。生產(chǎn)人員的技能、所接受的培訓(xùn)及其工作態(tài)度是達(dá)到上述目標(biāo)的關(guān)鍵因素。生產(chǎn)必須嚴(yán)格按照以風(fēng)險(xiǎn)分析和控制為基礎(chǔ)精心設(shè)計(jì)并經(jīng)驗(yàn)證的方法和規(guī)程進(jìn)行。產(chǎn)品無菌或其他質(zhì)雖特性絕不能只依賴于任何形式的最終處理或成品檢驗(yàn)。風(fēng)險(xiǎn)管理的理念應(yīng)貫穿于生產(chǎn)與質(zhì)H管理的全過程。無菌保證

12、的風(fēng)險(xiǎn)主要來自以下四個(gè)重要方面，即： 產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平滅菌工藝的可靠性容器密封完整性無菌保證管理體系每個(gè)方面都包含有多個(gè)常見的風(fēng)險(xiǎn)因素。具體的風(fēng)險(xiǎn)因素，不同的企業(yè)和生產(chǎn)線各不相同，需要具體問題具體分析。以下分別論述常見的風(fēng)險(xiǎn)因素及其控制方法。(一)無菌保證風(fēng)險(xiǎn)與質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)控制點(diǎn)1.產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平：產(chǎn)品滅菌前通常都存在一定程度的微生物污染，污染的程度用一瓶產(chǎn)品或單位體積藥液中的微生物個(gè)數(shù)表示。微生物污染數(shù)大致受五類因素影響，分別為：原材料和包裝材料中的微生物：存在于原材料和包裝材料中的微生物可能進(jìn)入產(chǎn)品。而固體原料中的微生物分布可能是不均勻的，導(dǎo)致樣品檢驗(yàn)結(jié)果不一定能代表該批原料

13、的整體情況。質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)控制方法：制定原輔料采購標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定微生物限度。通常應(yīng)不超過lOOcfu/g,并不得檢出致病菌。進(jìn)行供應(yīng)商的確認(rèn)時(shí)應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注供應(yīng)商的生產(chǎn)過程對(duì)微生物污染、細(xì)菌內(nèi)毒素污染、產(chǎn)品混淆和交叉污染風(fēng)險(xiǎn)的控制措施。對(duì)供應(yīng)商及其供應(yīng)的原料進(jìn)行年度質(zhì)雖回顧分析，以評(píng)估其質(zhì)雖狀況。對(duì)有質(zhì)H不良趨勢的供應(yīng)商應(yīng)采取針對(duì)性的措施，如增加現(xiàn)場檢查的頻率，更嚴(yán)格的抽樣方案。嚴(yán)格管理倉儲(chǔ)條件，確保原料儲(chǔ)存過程中質(zhì)雖受控。如干燥、防蟲、防鼠等。包裝材料如玻璃瓶應(yīng)定點(diǎn)采購，其包裝應(yīng)能防止昆蟲進(jìn)入，儲(chǔ)存過程防止受潮長霉。生產(chǎn)環(huán)境：大容雖注射劑的生產(chǎn)從原料稱雖開始直至完成密封，都分別在相應(yīng)的衛(wèi)生潔凈區(qū)中進(jìn)行。上

14、述生產(chǎn)步驟中都存在藥物直接暴露于環(huán)境的環(huán)節(jié)，存在來自于生產(chǎn)環(huán)境中的微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。為控制上述風(fēng)險(xiǎn)，國際上較普遍地采用A、B、C、D四個(gè)等級(jí)的潔凈區(qū)標(biāo)準(zhǔn)，分別對(duì)應(yīng)注射劑的各生產(chǎn)工序。其中與大容雖注射劑相關(guān)的主要為A、C、D三級(jí)。如果能證明在動(dòng)態(tài)下生產(chǎn)區(qū)的潔凈度能符合上述標(biāo)準(zhǔn)，則來自環(huán)境的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)是較低的。然而，目前國內(nèi)多數(shù)企業(yè)尚未有計(jì)劃、有標(biāo)準(zhǔn)地開展對(duì)潔凈區(qū)的動(dòng)態(tài)監(jiān)控，或者監(jiān)控計(jì)劃不夠完善。質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)控制方法：潔凈區(qū)應(yīng)配置設(shè)計(jì)良好并經(jīng)過驗(yàn)證、定期再驗(yàn)證且良好維護(hù)的空調(diào)凈化系統(tǒng)。潔凈區(qū)新風(fēng)和人員數(shù)雖的關(guān)系，應(yīng)至少達(dá)到GB50457.2008醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范規(guī)定的室內(nèi)每人新3鮮空氣雖應(yīng)

15、不小于40m/h的標(biāo)準(zhǔn)?？照{(diào)凈化系統(tǒng)應(yīng)保證持續(xù)穩(wěn)定地運(yùn)行。空調(diào)凈化系統(tǒng)停機(jī)超出規(guī)定時(shí)間后，應(yīng)重新進(jìn)行潔凈區(qū)的驗(yàn)證。應(yīng)精心設(shè)計(jì)、實(shí)施動(dòng)態(tài)環(huán)境監(jiān)控方案，保證監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)能反映潔凈區(qū)的實(shí)際情況。每年對(duì)環(huán)境監(jiān)控結(jié)果進(jìn)行環(huán)境質(zhì)雖統(tǒng)計(jì)分析。根據(jù)環(huán)境質(zhì)H統(tǒng)計(jì)結(jié)果制定、修訂環(huán)境監(jiān)控警戒標(biāo)準(zhǔn)和糾偏標(biāo)準(zhǔn)，確保能及時(shí)發(fā)現(xiàn)、糾正環(huán)境惡化的趨勢。養(yǎng)成良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣和意識(shí)，即環(huán)境監(jiān)控取樣時(shí)段與非取樣時(shí)段的行為一致制定SOP明確規(guī)定發(fā)生諸如停電、空調(diào)凈化系統(tǒng)故障、環(huán)境超標(biāo)等偏差后相應(yīng)的措施。生產(chǎn)設(shè)備：大容雖注射劑通常采用固定的設(shè)備，安裝了生產(chǎn)及在線清洗、消毒等多種工藝管道。因此設(shè)備存在殘留微生物的可能，對(duì)產(chǎn)品有潛在風(fēng)險(xiǎn)。質(zhì)

16、雖風(fēng)險(xiǎn)控制方法設(shè)備在線清潔和在線滅菌的方法應(yīng)足夠詳細(xì)，應(yīng)包含所有影響清潔效果的參數(shù)，如水溫、清潔劑濃度、流速、時(shí)間、閥門的開閉次序和時(shí)間、蒸汽溫度、壓力等的書面規(guī)定，以確保清潔效果的重現(xiàn)性。設(shè)備清潔與滅菌方法，包括清潔、滅菌后最長存放時(shí)間應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證。認(rèn)真執(zhí)行、記錄清潔和滅菌過程，發(fā)生偏差應(yīng)及時(shí)調(diào)查、糾正。應(yīng)制定、執(zhí)行可靠的設(shè)備狀態(tài)管理措施，保證設(shè)備的狀態(tài)受控。最好采用經(jīng)驗(yàn)證的計(jì)算機(jī)化系統(tǒng)，自動(dòng)執(zhí)行、記錄清潔和滅菌程序，設(shè)備狀態(tài)管理由計(jì)算機(jī)完成。人員與生產(chǎn)操作：人員及其活動(dòng)被視為最大的污染源。一方面通過人員對(duì)環(huán)境的污染間接影響產(chǎn)品帶菌雖，另一方面，某些生產(chǎn)操作，人員與物料或藥液有可能相互接觸，從

17、而直接污染產(chǎn)品。生產(chǎn)設(shè)備的狀況、尤其是對(duì)降低藥液帶菌雖有顯著作用的過濾器、清洗輸液瓶和膠塞的設(shè)備、滅菌設(shè)備等的狀態(tài)和性能，都對(duì)產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平產(chǎn)生影響。質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)控制方法生產(chǎn)操作人員應(yīng)掌握微生物的基本知識(shí)，養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣。設(shè)備設(shè)計(jì)、工藝及生產(chǎn)操作設(shè)計(jì)應(yīng)能盡雖降低人員和生產(chǎn)操作導(dǎo)致污染的風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)配備質(zhì)地良好的個(gè)人防護(hù)服裝。選用質(zhì)雖可靠的藥液終端過濾器，配合使用適當(dāng)?shù)念A(yù)過濾器，以截留藥液中的微生物。終端過濾器使用后必須經(jīng)完整性測試，使用周期經(jīng)過驗(yàn)證。滅菌前各工序的最長時(shí)限應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證。生產(chǎn)設(shè)備或生產(chǎn)過程發(fā)生偏差后應(yīng)分批，并增補(bǔ)產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平樣品，為質(zhì)雖評(píng)價(jià)提供依據(jù)。包裝材料的清洗

18、設(shè)備，如洗瓶機(jī)應(yīng)經(jīng)清洗效果和微生物殘留驗(yàn)證。應(yīng)設(shè)置設(shè)備關(guān)鍵參數(shù)監(jiān)控和報(bào)警裝置。微生物在產(chǎn)品中的增殖：活微生物在適宜的條件下能迅速繁殖而使產(chǎn)品帶菌雖急劇增加。充足的水分是必要條件。不同的微生物適宜的繁殖溫度跨度很大。藥液的性質(zhì)，如有無抑菌性、pH等也能顯著影響微生物的繁殖速度。通?？蓪⒃虾退旌献鳛樯a(chǎn)的起始時(shí)間。一般分為配制時(shí)間，從配制結(jié)束到灌裝結(jié)束的時(shí)間，從灌裝開始到最后一瓶產(chǎn)品開始滅菌的時(shí)間等。在配制罐或灌裝前的儲(chǔ)罐中的藥液的微生物和內(nèi)毒素污染可視為均勻的，但經(jīng)過灌裝后，就有可能存在污染不均勻的情況。質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)控制方法根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和驗(yàn)證制定各步驟的時(shí)限。對(duì)每一種產(chǎn)品都應(yīng)進(jìn)行微生物繁殖驗(yàn)證。通過

19、在產(chǎn)品中接入有代表性的菌株并在生產(chǎn)工藝溫度下培養(yǎng)，可直觀地獲得微生物數(shù)雖和時(shí)間的關(guān)系曲線。在生產(chǎn)過程中嚴(yán)格執(zhí)行各步驟時(shí)限。發(fā)生偏差后應(yīng)分批、取樣。對(duì)以上各風(fēng)險(xiǎn)因素和風(fēng)險(xiǎn)控制方法效果的評(píng)價(jià)，可通過對(duì)一定周期內(nèi)產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平檢查結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析而進(jìn)行。如果超過95%的樣品為低污染水平，即不超過10CFU/IOOml藥液，則說明生產(chǎn)過程整體上微生物污染風(fēng)險(xiǎn)控制措施是有效的。（6）微生物耐熱性檢查：從滅菌原理可知，產(chǎn)品無菌保證水平不僅與滅菌前產(chǎn)品中的污染菌數(shù)雖有關(guān)，也與污染菌的耐熱參數(shù)相關(guān)。耐熱參數(shù)（D值）的測定是非常繁瑣且費(fèi)時(shí)的工作，僅在滅菌工藝驗(yàn)證的微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)中進(jìn)行，不可能用于日常質(zhì)

20、H控制。由于在日常生產(chǎn)中產(chǎn)品污染的微生物絕大多是不耐熱的，因此可以通過簡便可行的耐熱性檢查作為日常監(jiān)控手段。耐熱性檢查的步驟如下（應(yīng)遵循無菌操作的要求）：將100ml滅菌前的產(chǎn)品經(jīng)0.45微米濾膜過濾。濾膜浸沒于預(yù)先裝有產(chǎn)品的試管中，將試管置于沸水浴中，保持15分鐘，迅速冷卻。在試管中加入一定H的液體培養(yǎng)基，于300C35oC培養(yǎng)7天。如無生長，則通過。如有生長，則說明可能存在耐熱菌，需作進(jìn)一步確認(rèn)，如測定D值或與驗(yàn)證用生物指示劑作耐熱性比較，以確定產(chǎn)品是否達(dá)到無菌保證水平。2.滅菌工藝的可靠性：滅菌工藝的目的是使具有一定微生物污染水平的產(chǎn)品，經(jīng)滅菌后達(dá)到殘存微生物概率不超過白萬分之一的水平。

21、滅菌工藝的可靠性通過以下四個(gè)環(huán)節(jié)保證，分別為：滅菌設(shè)備的適用性滅菌設(shè)備的適用性是指滅菌設(shè)備執(zhí)行滅菌工藝的能力，即滅菌設(shè)備對(duì)滅菌工藝各參數(shù)的控制準(zhǔn)確度和精確度能否使任意位置的產(chǎn)品的實(shí)際F0值符合滅菌工藝規(guī)定的F0值范圍。例如：某500ml規(guī)格的氯化鈉注射液的滅菌工藝為121土1C,F0值為1220分鐘，通過執(zhí)行特定的滅菌程序，滅菌設(shè)備如能保證一定的裝載方式下腔室內(nèi)任意位置的產(chǎn)品實(shí)際達(dá)到的F0值在1220分鐘內(nèi)，就說明該設(shè)備的適用性良好。顯然，滅菌工藝允許的F0值范圍越窄，對(duì)滅菌設(shè)備的控制精確度、熱分布均勻度的要求越高。現(xiàn)代化的滅菌設(shè)備為計(jì)算機(jī)控制。計(jì)算機(jī)通過接收多個(gè)溫度、壓力傳感器的信號(hào)，按預(yù)定

22、的程序調(diào)節(jié)加熱、冷卻介質(zhì)的流雖，以實(shí)現(xiàn)預(yù)定的滅菌工藝，計(jì)算機(jī)同時(shí)自動(dòng)記錄整個(gè)滅菌過程數(shù)據(jù)。影響滅菌設(shè)備適用性的因素主要為滅菌設(shè)備的設(shè)計(jì)制造、安裝、傳感器的準(zhǔn)確性和精確度、計(jì)算機(jī)程序、設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)等。質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)控制方法通過滅菌設(shè)備的設(shè)計(jì)確認(rèn)，使滅菌設(shè)備以預(yù)定的滅菌工藝為設(shè)計(jì)目標(biāo)。通過安裝確認(rèn)、運(yùn)行確認(rèn)、性能確認(rèn)、滅菌工藝驗(yàn)證，證明設(shè)備性能達(dá)到設(shè)計(jì)要求，適用于預(yù)期滅菌工藝。至少每半年校驗(yàn)一次關(guān)鍵參數(shù)傳感器，如溫度傳感器，至少每年進(jìn)行一次滅菌設(shè)備再確認(rèn)。(1) 滅菌工藝的驗(yàn)證見無菌保證原理與最終滅菌工藝的相關(guān)部分。滅菌工藝的執(zhí)行應(yīng)確保滅菌設(shè)備執(zhí)行了滅菌程序，完成了滅菌工藝。主要風(fēng)險(xiǎn)在于：滅菌設(shè)備中的

23、溫度傳感器準(zhǔn)確度發(fā)生漂移，使記錄的滅菌數(shù)據(jù)與真實(shí)值不符合導(dǎo)致的偏差。意外事件如停電等導(dǎo)致的滅菌中斷和數(shù)據(jù)丟失。質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)控制方法至少每6個(gè)月進(jìn)行一次溫度傳感器的校驗(yàn)，每年對(duì)滅菌設(shè)備進(jìn)行一次再驗(yàn)證，再驗(yàn)證試驗(yàn)應(yīng)至少重復(fù)運(yùn)行兩次滅菌程序，以證明其重現(xiàn)性。啟動(dòng)滅菌程序之前，操作人員必須確認(rèn)滅菌設(shè)備、滅菌工藝、測溫探頭等均在驗(yàn)證或校驗(yàn)的有效期內(nèi)。滅菌全過程應(yīng)通過兩套相互獨(dú)立的監(jiān)控系統(tǒng)控制和記錄，并應(yīng)在操作人員的監(jiān)督之下。防止二次微生物污染產(chǎn)品經(jīng)滅菌后再次污染微生物稱為二次微生物污染。二次污染的主要原因是高溫滅菌完成后用于冷卻產(chǎn)品的介質(zhì)中存在的微生物穿過密封屏障進(jìn)入廣品。局溫狀態(tài)時(shí)廣品的密封可能和平時(shí)存在

24、差異。質(zhì)雖風(fēng)險(xiǎn)控制方法滅菌設(shè)備設(shè)計(jì)應(yīng)充分考慮二次微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。盡雖米用過熱水噴淋或過熱水浴的滅菌方式。g. 定期監(jiān)控冷卻水的微生物質(zhì)H。定期維護(hù)滅菌設(shè)備，確保不發(fā)生冷卻水發(fā)生微生物污染。3.藥品容器密封完整性大容雖注射劑容器應(yīng)能在整個(gè)藥品有效期內(nèi)有完好的密封性，防止微生物的侵入。最理想、直接的方法是逐瓶測試容器的密封完整性。限于成本，目前對(duì)大容雖注射劑的逐瓶完整性測試設(shè)備應(yīng)用得尚不普遍，國際上普遍接受基于容器密封系統(tǒng)設(shè)計(jì)一密封組件生產(chǎn)一密封完成一密封完整性驗(yàn)證的質(zhì)雖保證過程，以證明成品的密封特性。造成密封完整性失控的潛在風(fēng)險(xiǎn)因素主要有以下四個(gè)方面：（1）密封系統(tǒng)設(shè)計(jì)缺陷，（2）容器或密封組

25、件存在質(zhì)雖偏差，（3）密封工藝過程偏差，（4）密封完整性驗(yàn)證方法不嚴(yán)謹(jǐn)。質(zhì)H風(fēng)險(xiǎn)控制方法密封系統(tǒng)應(yīng)設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)。應(yīng)盡雖采用符合國際通行標(biāo)準(zhǔn)的密封構(gòu)件，防止為節(jié)約成本而減小瓶口一膠塞的尺寸，從而增加泄漏風(fēng)險(xiǎn)的行為。密封組件，如膠塞、玻璃瓶和鋁蓋供應(yīng)商經(jīng)過定期審計(jì)，保證其質(zhì)雖穩(wěn)定可靠。應(yīng)制定鋁蓋扭力矩標(biāo)準(zhǔn)，并制訂抽樣監(jiān)測計(jì)劃。密封系統(tǒng)的密封完好性應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證。基本方法介紹如下：a.受試樣品制備：按待驗(yàn)證產(chǎn)品規(guī)格灌裝適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，并在生產(chǎn)線上正常壓塞和軋蓋。每個(gè)規(guī)格的容器至少灌裝300瓶。產(chǎn)品采用過度殺滅法滅菌。b.經(jīng)滅菌后的樣品倒轉(zhuǎn)接觸密封系統(tǒng)，并在30。C35。C下倒豎培養(yǎng)14天。在培養(yǎng)期內(nèi)，如發(fā)現(xiàn)任

26、何瓶內(nèi)培養(yǎng)基有微生物生長，則丟棄所有的容器，重新制備受試樣品。C.確認(rèn)焙養(yǎng)基的促菌生長效果。隨機(jī)取20個(gè)容器，每個(gè)容器內(nèi)接種0.1ml(0.1ml含10100CFU)的挑戰(zhàn)試驗(yàn)微生物一銅綠假單胞菌(PseudomonasaeruginosaATCC9027)o在30C-35C下培養(yǎng)7天或培養(yǎng)至所有容器內(nèi)培養(yǎng)基出現(xiàn)微生物生長。如有不生長的情況，則丟棄所有樣品，重新制各樣品，重復(fù)試驗(yàn)。d.制備挑戰(zhàn)試驗(yàn)微生物菌懸液。通常采用銅綠假單胞菌為挑戰(zhàn)菌。挑戰(zhàn)用菌懸液的活細(xì)胞數(shù)6必須達(dá)到lxl0CFU/ml。e.微生物侵入試驗(yàn)。取50瓶試驗(yàn)樣品，使其倒置于菌懸液中。持續(xù)時(shí)間約4小時(shí)。也可采用在密封設(shè)備中抽真空

27、、加壓等更有利于微生物侵入的措施以增加挑戰(zhàn)性。6f.試驗(yàn)結(jié)束后確認(rèn)挑戰(zhàn)用菌懸液的活細(xì)胞數(shù)必須達(dá)到lxl0CFU/mlo用化學(xué)消毒劑消毒樣品。在30。C。35。C下培養(yǎng)7天。若所有樣品都無生長，并再次通過培養(yǎng)基促菌生長效果確認(rèn)，則通過本驗(yàn)證。i.如發(fā)現(xiàn)有樣品生長，應(yīng)小心去除鋁蓋，仔細(xì)檢查有無瓶口、瓶身破損現(xiàn)象。如無破損跡象，則該密封系統(tǒng)未通過驗(yàn)證。j.應(yīng)將剩余未經(jīng)過挑戰(zhàn)試驗(yàn)的容器于室溫下避光保存。在合適的時(shí)間間隔(如12個(gè)月、24個(gè)月、36個(gè)月等)取出相同數(shù)雖的容器，重復(fù)挑戰(zhàn)試驗(yàn)。以涵蓋產(chǎn)品的有效期。在密封系統(tǒng)的部件發(fā)生變更時(shí)，必須評(píng)估其對(duì)密封系統(tǒng)完好性的影響，必要時(shí)重新進(jìn)行密封完好性驗(yàn)證。4.

28、無菌保證管理體系：無菌保證管理體系涉及GMP關(guān)注的各個(gè)方面的管理，對(duì)大容雖注射劑而言需要特別強(qiáng)調(diào)的有以下兩個(gè)方面。(1)生產(chǎn)管理應(yīng)采取必要的措施防止發(fā)生未滅菌產(chǎn)品和已滅菌產(chǎn)品的混淆。主要的措施可包括但不限于以下各項(xiàng)，應(yīng)根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果組合采用某些措施：滅菌工序所在區(qū)域應(yīng)與其他工序隔離并上鎖，防止無關(guān)人員隨意進(jìn)入。采用能防止未滅菌產(chǎn)品不受控離開滅菌車的裝置。待滅菌區(qū)與已滅菌區(qū)之間最好有物理隔離。在每輛滅菌車上放置滅菌指示膠帶。滅菌結(jié)束后的產(chǎn)品在已滅菌區(qū)卸載，并計(jì)數(shù)。不立即包裝的產(chǎn)品應(yīng)上鎖并有封簽，封簽的解封由雙人負(fù)責(zé)并記錄。應(yīng)有嚴(yán)格的物料平衡，待滅菌產(chǎn)品和己滅菌產(chǎn)品、滅菌破損產(chǎn)品的數(shù)H應(yīng)能完全

29、吻合。(2)質(zhì)雖管理對(duì)生產(chǎn)過程及其產(chǎn)品應(yīng)實(shí)施嚴(yán)格的微生物學(xué)監(jiān)控。而可能導(dǎo)致監(jiān)控失敗的主要風(fēng)險(xiǎn)因素是樣品缺乏代表性和檢驗(yàn)方法有缺陷。以采用殘存概率滅菌工藝的產(chǎn)品為例，需要特別強(qiáng)調(diào)的措施主要有：在每批產(chǎn)品灌封的開始、中間、結(jié)束階段取樣進(jìn)行滅菌前微生物污染水平的檢查和污染菌的耐熱試驗(yàn)。所有原輔料的含菌雖檢驗(yàn)方法、產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平的檢測方法及污染菌的耐熱試驗(yàn)方法均經(jīng)過科學(xué)的驗(yàn)證。質(zhì)雖評(píng)價(jià)應(yīng)能發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)和質(zhì)雖控制試驗(yàn)中出現(xiàn)的偏差并正確地判斷和處理。相應(yīng)的管理措施包括：a.嚴(yán)格的質(zhì)H評(píng)價(jià)程序：批生產(chǎn)記錄、中間控制記錄、質(zhì)雖檢驗(yàn)記錄必須經(jīng)相應(yīng)的負(fù)責(zé)人審核。在此基礎(chǔ)之上，QA質(zhì)雖評(píng)價(jià)員、QA經(jīng)理對(duì)批生產(chǎn)、中控和