各種緩沖液配方

1、.三、核酸電泳相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)組份濃度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.稱量以下試劑，置于1 L燒杯中。Tris242 gNa2EDTA·2H2O37.2 g 2.向燒杯中參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.參加57.1 ml的乙酸，充分?jǐn)嚢琛?4.加去離子水將溶液定容至l L后，室溫保存。10×TBE Buffer (pH8.3) 組份濃度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 l.稱量以下試劑，置于l L燒杯中。T

2、ris108 gNa2EDTA·2H2O7.44 g硼酸55 g 2.向燒杯中參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加去離子水將溶液定容至l L后，室溫保存。10×MOPS(3-嗎啉基丙磺酸)Buffer組份濃度 200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.稱41.8 g MOPS，置于1 L燒杯中。 2.加約700 ml DEPC處理水，攪拌溶解。 3.使用2 N NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4.再向溶液中參加以下試劑。1 M NaOAc(DEPC處理)20ml0.5 M EDTA(pH8.0)(DEPC

3、處理)20 ml 5.用DEPC處理水將溶液定容至1 L。 6.用0.45 m濾膜過濾除去雜質(zhì)。 7.室溫避光保存。注：溶液見光或高溫滅菌后會(huì)變黃。變黃時(shí)也可使用，但變黑時(shí)不要使用。溴乙錠 (10 mg/ml)組份濃度 10 mg/ml溴乙錠配制量 100 ml配制方法 1.稱量1 g溴乙錠，參加到100 ml容器中。 2.參加去離子水100 ml，充分?jǐn)嚢钄?shù)h完全溶解溴乙錠。 3.將溶液轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，室溫避光保存。 4.溴乙錠的工作濃度為0.5 g/ml。注意：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)，必須小心操作。Agarose凝膠 配制方法 1.配制適量的電泳及制膠用的緩沖液(通常是0.5×TB

4、E或1×TAE)。 2.根椐制膠量及凝膠濃度，準(zhǔn)確稱量瓊脂糖粉，參加適當(dāng)?shù)腻F形瓶中。 3.參加一定量的電泳緩沖液(總液體量不宜超過錐形瓶的50%容量)。 注：用于電泳的緩沖液和用于制膠的緩沖液必須統(tǒng)一。 4.在錐形瓶的瓶封上保鮮膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波爐中加熱熔化瓊脂糖。加熱過程中，當(dāng)溶液沸騰后，請(qǐng)戴上防熱手套。小心搖動(dòng)錐形瓶。使瓊脂糖充分均勻熔化。此操作重復(fù)數(shù)次，直至瓊脂糖完全熔化。必須注意，在微波爐中加熱時(shí)間不宜過長(zhǎng)，每次當(dāng)溶液起泡沸騰時(shí)停頓加熱，否那么會(huì)引起溶液過熱暴沸，造成瓊脂糖凝膠濃度不準(zhǔn)，也會(huì)損壞微波爐。熔化瓊脂糖時(shí)，必須保證瓊脂糖充分完全熔化，否那么，會(huì)造成電泳

5、圖像模糊不清。 5.使溶液冷卻至60左右，如需要可在此時(shí)參加溴乙錠溶液(終濃度0.5 µg/ml)。并充分混勻。 注：溴乙錠是一種致癌物質(zhì)。使用含有溴乙錠的溶液時(shí)，請(qǐng)戴好手套。 6.將瓊脂糖溶液倒入制膠模中，然后在適當(dāng)位置處插上梳子。凝膠厚度 一般在35 min之間。 7.在室溫下使膠凝固(大約30 min1 h)，然后放置于電泳槽中進(jìn)展電泳。 注：凝膠不立即使用時(shí)，請(qǐng)用保鮮膜將凝膠包好后在4下保存，一 般可保存25天。瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的最正確分辨X圍瓊脂糖濃度最正確線形DNA分辨X圍(bp) 0.5% 0.7% 1.0% 1.2% 1.5% 2.0% 1,00030,00

6、0 80012,000 50010,000 4007,000 2003,000 502,0006× Loading Buffer(DNA電泳用) 組份濃度30 mMEDTA36%(V/V)Glycerol0.05%(W/V)Xylene Cyanol FF0.05%(W/V)Bromophenol Blue 配制量 500 ml 配制方法 1.稱量以下試劑，置于500 ml燒杯中。EDTA4.4gBromophenol Blue250 mgXylene Cyanol FF250 mg 2.向燒杯中參加約200 ml的去離子水后，加熱攪拌充分溶解。 3.參加180 ml的甘油(Glyc

7、erol)后，使用2 N NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4.用去離子水定容至500 ml后，室溫保存。10 × Loadlng Buffer(RNA電泳用)組份濃度10 mMEDTA50%(V/V)Glycerol0.25%(W/V)Xylene Cyanol FF0.25%(W/V)Bromophenol Blue配制置 10 ml配制方法 1.稱量以下試劑，置于10 ml離心管中。0.5 M EDTA(pH8.0)200 µlBromophenol Blue25 mgXylene Cyanol FF25 mg 2.向離心管中參加約4 ml的DEPC處理水后，充分?jǐn)嚢枞芙?/p>

8、。 3.參加5 ml的甘油(Glycerol)后，充分混勻。 4.用DEPC處理水定容至10 ml后，室溫保存。四、核酸、蛋白質(zhì)雜交用相關(guān)試劑、緩沖液的配制方法20×SSC 組份濃度 3.0 M NaCl，0.3 MNa3citrate·2H2O(檸檬酸鈉)配制量 1 L配制方法 1.稱量以下試劑，置于l L燒杯中。NaCl175.3 gNa3citrate·2H2O88.2 g 2.向燒杯中參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3滴加14 N HCl，調(diào)節(jié)pH值至7.0后，加去離子水將溶液定容至1 L。 4.高溫高壓滅菌后，室溫保存。20×SS

9、PE Buffer 組份濃度 3.0 M NaCl，0.2 M NaH2PO4，0.02 M EDTA配制量 1.L配制方法 1.稱量以下試劑，置于l L燒杯中。NaCl175.3gNaH2PO4·H2O27.6gNa2EDTA·2H2O7.4g 2.向燒杯中參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.4(約6.5 ml的10 N NaOH)。 4.加去離子水將溶液定容至l L。 5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。50 X DenhardtS溶液 1%(W/V)Ficoll 400(菲可400/水溶性聚蔗糖400)1%(W/V)Polyvinyl

10、pyrrolidone(聚維酮/聚乙烯吡咯烷酮)1%(W/V)BSA組份濃度配制量 500 ml配制方法 1.稱量以下試劑，置于500 ml燒杯中。Flcoll 4005 gPoLyvlnylpyrrolldone5 gBSA5 g 2.加去離子水約400 ml，充分?jǐn)嚢枞芙?3.加去離子水將溶液定容至500 ml。 4.用0.45µm濾膜過濾后，分裝成每份25 ml。 5.-20保存。0.5 M磷酸鹽Buffer 組份濃度 0.5 M Na2HPO4。 配制量 l L 配制方法 1.稱量134 g Na2HPO4·7H2O置于l L燒杯中。 2.參加約800 ml的去離子

11、水充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.參加85%的H3PO4(濃磷酸)調(diào)節(jié)溶液pH值至7.2。 4.加去離子水定容至1 L。 5.高溫高壓滅菌后，室溫保存。Salmon DNA (鮭魚精DNA) 組份濃度 10 mg/ml Salmon DNA配制量 約100 ml配制方法 1.稱取鮭魚精DNA 2 g置于500 ml燒杯中，參加約200 ml的TE Buffer。 2用磁力攪拌器室溫?cái)嚢?4h，溶解后參加4 ml的5 M NaCl，使其終濃度為0.1 M。 3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。 4.回收水相溶液后，使用17號(hào)皮下注射針頭快速吸打溶液約20次，以 切斷DNA。 5.參加2倍體積的預(yù)冷乙醇進(jìn)展乙醇

12、沉淀。 6.離心回收DNA后，溶解于100 ml的去離子水中。測(cè)定溶液的OD260值。 7.計(jì)算溶液的DNA濃度后，稀釋DNA溶液至10 mg/ml。 8.煮沸10min后，分裝成小份(1 ml/份)。-20保存。 9.使用前在沸水浴中加熱5min后，迅速冰浴冷卻。DNA變性緩沖液 組份濃度 1.5 M NaCl，0.5 M NaOH 配制量 1 L 配制方法 1.稱量以下試劑，置于l L燒杯中。NaCl87.7 gNaOH20 g 2.向燒杯中參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加去離子水將溶液定容至l L后，室溫保存。預(yù)雜交液/雜交液(DNA雜交用)6×SSC(或S

13、SPE)5×Denhardts0.5%(W/V)SDS100 µg/mlSalmon DNA 組份濃度 配制置 100 ml 配制方法 1.稱量以下試劑，置于200 ml燒杯中。20×SSC(或SSPE)30 ml50×Denhardts10 ml10% SDS 5 ml10 mg/ml Salmon DNA1 mldH2O54 ml2.充分混勻后，使用0.45µm濾膜濾去雜質(zhì)后使用。預(yù)雜交液/雜交液(RNA雜交用)6×SSC(或SSPE)5×Denhardts0.5%(W/V)SDS100g/mlSalmon DNA50%

14、(V/V)Formamlde組份濃度配制量 100 mL配制方法 1.稱量以下試劑，置于200 ml燒杯中。20×SSC(或SSPE)30 ml50×Denhardts10 ml10% SDS 5 ml10 mg/ml Salmon DNA1 mlFormamide(甲酰胺)50 mldH2O4 ml2.充分混勻后，使用0.45µm濾膜濾去雜質(zhì)后使用。膜轉(zhuǎn)移緩沖液(Western雜交用) 組份濃度 39 mM Glycine，48 mM Tris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V)甲醇配制量 1 L配制方法 1.稱量以下試劑，置于l L燒杯中。Glyc

15、ine2.9 gTris5.8 gSDS0.37 g 2.向燒杯中參加約600 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加去離子水將溶液定溶至800 ml后，參加200 ml的甲醇。 4.室溫保存。TBST Buffer(Western雜交膜清洗液)組份濃度 20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.05%(V/V)Tween 20配制量 1 L配制方法 1.稱量以下試劑，置于l L燒杯中。NaCl8.8 g1 M Tris-HCl(pH8.0)20 ml 2.向燒杯中參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.參加0.5 ml Tween 20后充分混勻。 4.加去離子水將

16、溶液定容至l L后，4保存。封閉緩沖液(Western雜交用)組份濃度 5%(W/V)脫脂奶粉/TBST Buffer配制量 100 ml配制方法 1.稱5 g脫脂奶粉參加到100 mlTBST Buffer中，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.4保存待用(本封閉液應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用)。五、實(shí)驗(yàn)室常用培養(yǎng)基的配制方法Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)組份濃度 100 mg/ml Ampicillin配制量 50 ml配制方法 1.稱量5 g Ampicillin置于50 ml離心管中。 2.參加40 ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0.22 µm過濾膜過濾除菌。

17、 4.小份分裝(1 ml/份)后，-20保存。IPTG(異丙基-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)組份濃度 24 mg/mL IPTG配制量 50 mL配制方法 1.稱1.2 g IPTG置于50 ml離心管中。 2.參加40 ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0 22 µm過濾膜過濾除菌。 4小份分裝(1 ml，份)后，-20保存。X-Gal (20 mg/ml)組份濃度 20 mg/ml X-Gal配制量 50 ml配制方法 1.稱量l g X-Gal置于50 ml離心管中。 2.參加40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。

18、3.小份分裝(1 ml/份)后，-20避光保存。LB培養(yǎng)基組份濃度 1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl配制量 1 L配制方法 1.稱取以下試劑，置于l L燒杯中。Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g 2.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.滴加5 N NaOH(約0.2 m1)，調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。 5高溫高壓滅菌后，4。C保存。LB/Amp培養(yǎng)基 組份濃度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast

19、Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmpicillin配制量 1 L配制方法 1.稱取以下試劑，置于l L燒杯中。Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g 2.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.滴加5 N NaOH(約0.2 mL)。調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。 5.高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。 6.參加1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均勻混合。7.4保存。1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17mM

20、KH2PO472mMK2HPOaTB培養(yǎng)基 組份濃度配制量 1.L配制方法 1.配制磷酸鹽緩；中液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于90 ml的去離子水中，攪拌溶解 后，加去離子水定容至100 ml，高溫高壓滅菌。 2.稱取以下試劑，置于l L燒杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 m 3.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后，高溫高壓滅菌。 5.待溶液冷卻至60以下時(shí)，；參加100 ml的上述滅菌磷酸

21、鹽緩沖液。6.4保存。TB/Amp培養(yǎng)基 組份濃度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mMKH2PO472 mMK2HPO40.1 mg/mlAmpicillin 配制量 1 L 配制方法 1.配制磷酸鹽緩沖液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4,和12.54g K2HPO4于90 ml的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100 ml，高溫高壓滅菌。 2.稱取以下試劑，置于l L燒杯中。Tryptone12 gYeast Extract24

22、 gGlycerol4 ml 3.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至l L后，高溫高壓滅菌。 5.待溶液冷卻至60以下時(shí)， 參加100 ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。6.均勻混合后4保存。SOB培養(yǎng)基 組份濃度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCl2.5mMKCl10 mMMgCl2配制量 1 L配制方法 1.配制250 mM KCl溶液。 在90 ml的去離子水中溶解l.86 g KCl后，定容至100 ml。 2.配制2 M MgCl2溶液。 在90 ml去離子水中溶解19 g MgCl2

23、后，定容至100 ml，高溫高壓滅菌。 3.稱取以下試劑，置于l L燒杯中。Tryptone20 gYeast Extract5 gNaCl0.5 g 4.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?5.量取10 m1 250 mM KCl溶液，參加到燒杯中。 6.滴加5 N NaOH溶液(約0.2 m1)，調(diào)節(jié)pH值至7.0。 7.參加去離子水將培養(yǎng)基定容至l L。 8.高溫高壓滅菌后，4保存。 9.使用前參加5 ml滅菌的2 M MgCl2溶液。SOC培養(yǎng)基 組份濃度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCl2.5 mMKCl1

24、0 mMMgCl220 mMGlucose配制量 100 mL配制方法 1.配制l MGlucose溶液。 將18 gGlucose溶于90 ml去離子水中，充分溶解后定容至100 ml。用0.22 µm濾膜過濾除菌。 2.向l 00 ml SOB培養(yǎng)基中參加除菌的1 MGlucose溶液2 ml，均勻混合。3.4保存。2×YT培養(yǎng)基組份濃度 1.6%(WV)Tryptone，1%(W/V)Yeast Extract，0.5%(W/V)NaCl配制量 1 L配制方法 1.稱取以下試劑，置于l L燒杯中。Tryptone16 gYeast Extract10 gNaCl5 g

25、 2.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.滴加5 N NaOH，調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。 5.高溫高壓滅菌后，4保存。b×broth 組份濃度 2%(W/V)Tryptone，0.5%(W/V)Yeast Extract，o 5%(W/V)MgSO4·7H2O配制量 1 L配制方法 1.稱取以下試劑，置于l L燒杯中。Tryptone20 gYeast Extract5 gMgSO4·7H2O 5 g 2.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.滴加1 N KOH。調(diào)節(jié)pH值至7.5。 4.加去離子水將培養(yǎng)

26、基定容至1 L。 5.高溫高壓滅菌后，4保存。NZCYM培養(yǎng)基組份濃度0.5%(WV)Yeast Extract0.1%(WV)Casamino Acid酪蛋白氨基酸1%(WV)NZ胺0.5%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4·7HO配制量 1 L配制方法 1.稱取以下試劑。置于l L燒杯中。Yeast Extract5 gCasamino Acid1 gNZ胺10 gNaCl5 gMgSO4·7HO2 g 2.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.滴加5 N NaOH(約0.2 m1)，調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。 5.高

27、溫高壓滅菌后，4保存。NZYM培養(yǎng)基 組份濃度0.5%(WV)Yeast Extract1%(WV)NZ胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4·7HO 配制方法 NZYM培養(yǎng)基除不含Casamino Acid外，其他成份與 NZCYM培養(yǎng)基一樣。NZM培養(yǎng)基組份濃度1%(WV)NZ胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4·7HO 配制方法 NZM培養(yǎng)基除不含Yeast Extract(酵母提取物)外，其他成份與NZYM培養(yǎng)基一樣。一般固體培養(yǎng)基的配制 配制方法 1.按照液體培養(yǎng)基配方準(zhǔn)備好液體培養(yǎng)基，在高溫高壓滅菌前，參加以下 試劑中的一種。Aga

28、r(瓊脂；鋪制平板用) 15 g/LAgar(瓊脂；配制頂層瓊脂用) 7 g/LAgarose(瓊脂糖；鋪制平板用) 15 g/LAgarose(瓊脂糖；配制頂層瓊脂用) 7 g/L 2.高溫高壓滅菌后，戴上手套取出培養(yǎng)基，搖動(dòng)容器使瓊脂或瓊脂糖充分混勻(此時(shí)培養(yǎng)基溫度很高，小心燙傷)。 3.待培養(yǎng)基冷卻至5060時(shí)，參加熱不穩(wěn)定物質(zhì)(如抗生素等)，搖動(dòng)容器充分混勻。 4.鋪制平板(3035 ml培養(yǎng)基/90 mm培養(yǎng)皿)。LB/Amp/X-Gal/LPTG平板培養(yǎng)基 組份濃度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAm

29、picillin0.024mg/mlIPTG0.04 mg/mlX-GaL1.5%(W/V)Agar配制量 1 L配制方法 1.稱取以下試劑，置于l L燒杯中。Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g 2.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.滴加5 N NaOH(約0.2 mL)，調(diào)節(jié)pH值至7.0。 4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后，參加15 g Agar。 5.高溫高壓滅菌后，冷卻至60左右。 6.參加1 ml Ampicillin(100 mg/ml)、1 ml IPTG(24 mg/ml)、2 ml X-Gal(20 mg/mL)后均勻

30、混合。 7.鋪制平板(3035 ml培養(yǎng)基/90 mm培養(yǎng)皿)。8.4避光保存。TB/Amp/X-Gal/LPTG平板培養(yǎng)基 組份濃度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mMKH2PO472 mMK2HPO40.1 mg/mlAmpicillin0.024 mg/mlIPTG0.04mg/mLX-GaL1.5%(W/V)Agar配制量 1 L配制方法 1.配制磷酸鹽緩沖液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4和12.54g K2HPO4于90 ml

31、的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100 ml，高溫高壓滅菌。 2.稱取以下試劑，置于l L燒杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 ml 3.參加約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?4.加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后。參加l 5 g Agar。 5.高溫高壓滅菌后，冷卻至60左右。 6.參加100 ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖液、l ml Ampicillin (100mg/ml)、1 ml IPTG(24mg/mL)、2 ml X-Gal(20 mg/ml)后均勻混合。 7.鋪制平板(3035 ml培養(yǎng)基/90 mm培養(yǎng)皿)。 8 4

32、避光保存。六、抗生素的貯存溶液及其工作濃度抗生素 貯存液*1 工作濃度 濃度 保存條件 嚴(yán)緊型質(zhì)粒 松弛型質(zhì)粒 氨芐青霉素 羧芐青霉素 氯霉素 卡那霉素 鏈霉素 四環(huán)素*2 50 mg/ml(溶于水) -20 50 mg/mL(溶于水) -20 34 mg/mL(溶于乙醇) -20 10 mg/mL(溶于水) -20 10 mg/mL(溶于水) -20 5 mg/mL(溶于乙醇) -20 20µg/ml 60µg/ml 20µg/ml 60µg/ml 25µg/ml l70µg/mL 10µg/ml 50µg/ml

33、 10µg/ml 50 µg/ml 10µg/ml 50µg/mL*1以水為溶劑的抗生素貯存液應(yīng)通過0.22µm濾器過濾除菌。以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應(yīng)保存于不透光的容器中。*2鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應(yīng)使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基(如LB培養(yǎng)基)。七、SDS-PAGE濃縮膠(5%Acrylamide)配方表 各種組份名稱各種凝膠體積所對(duì)應(yīng)的各種組份的取樣量1 m1 2 m1 3 m1 4 ml 5 ml 6 m1 8 m1 10 mL H2O 30%Acrylamide1.0M Tris-HCl(pH6

34、.8) 10%SDS 10%過硫酸銨 TEMED. 0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 0.17 0.33 0.5 0.67 0.83 1.0 1.3 17 0.13 0.25 0.38 0.5 0.63 0 75 1.0 l.25 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0 06 0.08 0.1 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1 0.001 0.002 0.003 0.004 0.005 0.006 0.008 0.01八、SDS-PAGE別離膠配方表各種組份名稱各種凝膠體積所對(duì)應(yīng)的各種組份的取樣量5m1 10m1 15m1 20 ml 25m1 30m1 40m1 50 ml6%GelH2O30%Acrylamide1.5 M Tris-HCl(pH8.8)10%SDS10%過硫酸銨TEMED8%GelH2O30%Acrylamide1.5M Tris-HCl(pH8 8)10%SDS10%過硫酸銨TEMED10%GeLH2O30%Acrylamide1.5 M Tris+HCl(pH8.8)10%SDS10%過硫酸銨TEMED12%GeLH2O30%Acrylamide1.5 M Tris-HCl(pH8.8)10%SDS10%過硫酸銨TEMED15%GelH2O30%Acrylamid