小鼠沙眼衣原體肺炎的誘生及檢測

1、小鼠沙眼衣原體肺炎的誘生及檢測                 【關鍵詞】 小鼠沙眼衣原體肺炎【摘要】 目的 探討沙眼衣原體小鼠肺炎感染模型的建立及檢測。 方法 用沙眼衣原體小鼠肺炎株（MoPn）鼻腔吸入感染C57BL/6小鼠。用過氧化物酶連接的鼠抗衣原體脂多糖單抗染色及RT-PCR，檢測衣原體在小鼠肺組織的生長;通過肺組織髓過氧化物酶檢測，確定肺炎癥細胞類型。 結果 一定劑量的衣原體MoPn經(jīng)鼻腔吸入可引起小鼠衣原體肺炎，以肺組織衣原

2、體生長及肺組織大量中性粒細胞浸潤為特征。 結論 小鼠可作為研究沙眼衣原體肺炎有價值的動物模型。 【關鍵詞】 沙眼衣原體 小鼠 肺炎 髓過氧化物酶Establishment and detection to Chlamydia trachomatis pneumonitis of the mouse【Abstract】 Objective To establish a mouse model of Chlamydia trachomatis pneumonitis and investigate the detective method.Methods Pneumonitis was produ

3、ced by intranasal inoculation of Chlamydia trachomatis mouse pneu-monitis（MoPn）biovar in C57BL/6mice.Chlamydia growth in the lungs were determined by chlamydia infectivity and chlamydia mRNA expression in the lungs.Lung inflammatory cell type was determined by lung myeloperoxidase assay.The infectio

4、n was confirmed by inoculating Hela229cell monolayer with lung homogenates followed by HRP conjugate anti-Chlamydia LPS mAb.Results Intranasally infected with C.trachomatis MoPn in mice resulted in Chlamydia mouse pneumonitis featured by chlamydia growth and massive infiltration of neutrophils in th

5、e lung.Conclusion Mice may serve as a useful animal model for the study of the Chlamydia trac (此 資 料 轉 貼 于 ) homatis pneumonitis.【Key words】 Chlamydia trachomatis mouse pneumonitis myeloperoxidase沙眼衣原體小鼠肺炎菌株（MoPn）是小鼠肺炎的天然病原體，最初是從小鼠肺組織分離得到的，所以MoPn感染的小鼠模型最常用于研究衣原體體內(nèi)感染。本研究以MoPn通過呼吸道感染易感小鼠，并通過檢測衣原體在肺組織中

6、的生長及肺組織炎癥細胞的浸潤，對小鼠衣原體肺炎進行檢測和鑒定。 1 材料與方法1.1 沙眼衣原體菌株 MoPn生長于HeLa229細胞，用不連續(xù)密度梯度離心法純化衣原體，進行活性測定后用于感染小鼠。1.2 感染小鼠 68周齡雌性C57BL/6小鼠（中國醫(yī)學科學院血液病研究所提供），在微麻狀態(tài)下鼻腔內(nèi)吸入40l含1×10 3 包涵體形成單位（IFU）的MoPn。1.3 肺組織上清液中衣原體活性測定 無菌采集小鼠肺組織右葉，制備成組織勻漿，離心。用肺組織上清液滴定HeLa細胞單層。用連接有過氧化物酶的鼠抗衣原體脂多糖單抗（anti-LPS mAb）（Virostat）染色，以鑒定衣原體的

7、感染性，感染強度以IFU表示 1 。1.4 肺組織髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）檢測 2 制備肺組織勻漿，沉淀物超聲粉碎。上清液與25l TMB底物液反應，以人髓過氧化物酶做標準品，在全自動酶標儀上讀取650nm OD值。1.5 MoPn mRNA的表達 RT-PCR檢測小鼠肺組織沙眼衣原體MoPn mRNA表達。 2 結果2.1 MoPn感染后小鼠肺組織衣原體生長 見圖1。圖1顯示，在感染后第2天，小鼠肺組織可檢測到衣原體生長，IFU值增高。衣原體生長在感染后第7天達高峰，4只小鼠肺組織均檢測到衣原體MoPn mRNA表達，見圖2。圖1 衣原體感染C57BL/6小鼠肺

8、組織衣原體活性略圖2 小鼠呼吸道沙眼衣原體感染后肺組織衣原體MoPn mRNA表達略2.2 中性粒細胞髓過氧化物酶（MPO）檢測 C57BL/6小鼠呼吸道感染衣原體MoPn后第2天，肺組織MPO活性明顯增高（P<0.01），至第3天達高峰，以后逐漸下降，感染后21天恢復正常水平（圖未顯示）。說明中性粒細胞于感染后第2天在肺組織大量聚集。3 討論沙眼衣原體是影響人類健康的重要病原體，隨著臨床衣原體感染性疾病的日益增多，迫切需要深入了解衣原體感染的保護性免疫學機制。近年來，使用感染的動物模型在闡明衣原體感染的免疫生物學上取得了重要的研究進展。本研究采用適宜劑量的沙眼衣原體小鼠肺炎株，通過鼻腔

9、吸入感染C57BL/6種系小鼠，結果導致小鼠衣原體肺炎的發(fā)生。肺組織出現(xiàn)以中性粒細胞為主的大量炎癥細胞滲出。小鼠生殖道衣原體感染模型證實，BALB/C鼠感染第1周生殖道大量中性粒細胞浸潤及感染后第2周C3H小鼠輸卵管持續(xù)炎癥細胞浸潤 3 。我們的研究也證實，C57BL/6種系小鼠呼吸道感染衣原體MoPn引起肺組織大量中性粒細胞浸潤，與感染誘導的炎癥性細胞因子IL-1、IL-6及TNF的產(chǎn)生有關 4 。MPO是中性粒細胞氧依賴殺菌系統(tǒng)的基本成分。人類中性粒細胞MPO占細胞干重的5%，而單核白細胞MPO含量很低。故認為MPO是中性粒細胞的標志性酶。檢測MPO可作為檢測中性粒細胞聚集的常用方法 5

10、。 ? ( 小鼠沙眼衣原體肺炎的誘生及檢測(2) 慰嘉南?/STRONG>1 Yang X，Gartner J，Zhu L，et al.IL-10gene knockout mice show en-hanced Th-1-like protective immunity and absent granuloma forma-tion following Chlamydia trachomatis lung infection.J Immunol，1999，162:1010.2 Bai H，Yang J，Yang X，et al.Intranasal inoculation of Chlamydia tra-chomatis mouse pneumonitis agent（MoPn）induces significant neu-trophil infiltration which is not efficient in controlling the infection in mice.Immunology，2005，114（2）:246.5 Schierwage