惡性腫瘤臨床DCCIK治療手冊(cè)

1、惡性腫瘤CIK/DCCIK臨床治療手冊(cè)月中瘤的CIK細(xì)胞過(guò)繼免疫治療應(yīng)用的報(bào)道已近10年，2009年6月，國(guó)家衛(wèi) 生部正式批準(zhǔn)CIK細(xì)胞治療作為第三類醫(yī)療技術(shù)應(yīng)用于臨床(衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)2009 84號(hào))。結(jié)合我公司治療數(shù)千病例的經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)制定本治療規(guī)范，以方便臨床使 用。-、產(chǎn)品知識(shí)腫瘤生物治療簡(jiǎn)述長(zhǎng)期以來(lái)，月中瘤治療最常見(jiàn)的方法是手術(shù)、放療和化療。但這三種傳統(tǒng)的常規(guī)模式均有其自身的局限性。隨著人們對(duì)月中瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制的深入研究，及月中瘤免疫學(xué)、分子生物學(xué)、生 物工程技術(shù)的發(fā)展，月中瘤的生物治療迅速發(fā)展，成為腫瘤治療的第四種治療模式。 生物治療具有較強(qiáng)的針對(duì)性、特異性、有效性，對(duì)正常造血及免疫系統(tǒng)

2、、主要器 官無(wú)負(fù)面影響和明顯毒性，被認(rèn)為是本世紀(jì)月中瘤綜合治療模式中最活躍、最有前 途的治療手段。生物治療可以單獨(dú)使用，也可以與現(xiàn)代手術(shù)、化療和放療方法聯(lián) 合應(yīng)用，具有很強(qiáng)的互補(bǔ)作用，不但具有清除體內(nèi)不同部位的月中瘤細(xì)胞，防止腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的作用，而且對(duì)病人受損的免疫系統(tǒng)又能起到恢復(fù)與 重建的獨(dú)特作用。目前，月中瘤生物治療主要有5類：細(xì)胞因子治療、單克隆抗體及其偶聯(lián)物技 術(shù)、基因治療、過(guò)繼細(xì)胞治療和月中瘤疫苗治療。其中， CIK細(xì)胞治療是最具有 發(fā)展應(yīng)用價(jià)值的過(guò)繼細(xì)胞治療方法，而DC細(xì)胞治療是最具有發(fā)展應(yīng)用價(jià)值的月中 瘤疫苗治療方法。CIK細(xì)胞1、CIK基本信息CIK細(xì)胞，即細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷

3、細(xì)胞(Cytokine-Induced Killer , CIK)是 一種新型的免疫活性細(xì)胞，CIK增殖能力強(qiáng)，細(xì)胞毒作用強(qiáng)，具有一定的免疫特 性。由于該細(xì)胞同時(shí)表達(dá) CD3 +和CD56+兩種膜蛋白分子，故又稱為 NK細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）樣T淋巴細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性，和NK細(xì) 胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn)。該細(xì)胞對(duì)月中瘤細(xì)胞的識(shí)別能力很強(qiáng)，如同“細(xì)胞 導(dǎo)彈”，能精確“點(diǎn)射”月中瘤細(xì)胞，但不會(huì)傷及“無(wú)辜”的正常細(xì)胞。 尤其對(duì)手 術(shù)后或放化療后患者效果顯著，能消除殘留微小的轉(zhuǎn)移病灶，防止癌細(xì)胞擴(kuò)散和 復(fù)發(fā)，提高機(jī)體免疫力，因此， CIK細(xì)胞被認(rèn)為是新一代的月中瘤過(guò)繼細(xì)胞免疫 治療的

4、首選方案。2、CIK細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制a） CIK細(xì)胞能以不同的機(jī)制識(shí)別月中瘤細(xì)胞，通過(guò)直接的細(xì)胞質(zhì)顆粒穿透封 閉的腫瘤細(xì)胞膜進(jìn)行胞吐，釋放穿孔素、顆粒酶，實(shí)現(xiàn)對(duì)月中瘤細(xì)胞的裂 解；b） CIK細(xì)胞能分泌IFN-r TNF-a、IL-2、IL-6等多種炎性細(xì)胞因子，對(duì) 月中瘤也有直接抑制作用；c） CIK細(xì)胞可以通過(guò)配體-受體（Fas:FasD介導(dǎo)的方式誘導(dǎo)月中瘤細(xì)胞凋亡， 因此CIK尤其適用于FasL陽(yáng)性月中瘤的治療；d） CIK細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子能顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖，有效激活機(jī)體 的免疫系統(tǒng)，使之趨于正常，提高病人自身抗月中瘤的能力。目前，月中瘤的發(fā)生機(jī)制尚未形成普遍接受的理論。 研究者

5、普遍認(rèn)可月中瘤的發(fā) 生、發(fā)展與人體的免疫功能密切相關(guān)。即在正常情況下，月中瘤與機(jī)體的防御機(jī)能 之間處于一種動(dòng)態(tài)的平衡，而一旦這種平衡被破壞，就可能發(fā)生月中瘤。身體各組 織細(xì)胞受到外界化學(xué)、物理、生物等因素刺激或自身細(xì)胞衰老變異等因素的影響， 使得體內(nèi)某些細(xì)胞發(fā)生突變，成為癌前細(xì)胞；而機(jī)體免疫功能低下或者由于免疫 異常，無(wú)法及時(shí)識(shí)別、殺傷、清除這些異常細(xì)胞，突變細(xì)胞在組織內(nèi)復(fù)制生長(zhǎng)， 達(dá)到一定數(shù)量后破壞器官功能，月中瘤即發(fā)生。月中瘤患者，尤其是惡性月中瘤病人往 往免疫功能、特別是細(xì)胞免疫功能低下，因而疾病呈進(jìn)展、活動(dòng)、預(yù)后差。因此， 提高機(jī)體免疫力，建立有效的免疫應(yīng)答是治療月中瘤最有希望的途徑。

6、CIK細(xì)胞治療即將大量殺傷性高、功能強(qiáng)、數(shù)量多的免疫活性細(xì)胞回輸患者體內(nèi)， 直接發(fā) 揮殺死月中瘤細(xì)胞的作用，并通過(guò)調(diào)節(jié)、激活患者的免疫體系，調(diào)動(dòng)、提高患者自 身的抗月中瘤能力。a）增殖能力強(qiáng)，主要效用細(xì)胞 CD3+CD56+T增殖1000倍；b）殺傷活力強(qiáng)，遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)的LAK細(xì)胞和細(xì)胞因r-干擾素、白細(xì)胞介素2 等；c）殺瘤譜廣，不受MHC艮制，具有廣譜殺月中瘤和病毒的作用，d）對(duì)多重耐藥月中瘤細(xì)胞仍敏感，殺瘤活性不受環(huán)抱素 A （CsA）和FK506等免疫抑制劑的影響，能抵抗月中瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞 Fas-FasL凋亡。e）對(duì)多重耐藥月中瘤細(xì)胞同樣敏感。CIK細(xì)胞對(duì)放、化療敏感的親本細(xì)胞和

7、 不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性。f） CIK細(xì)胞具有識(shí)別月中瘤的機(jī)制，特異性強(qiáng)，對(duì)正常的細(xì)胞無(wú)毒性作用， 無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)。g）安全性好。CIK細(xì)胞是活化的患者自體細(xì)胞，應(yīng)用安全，不會(huì)產(chǎn)生排斥 等反應(yīng)，患者副反應(yīng)小。4、CIK細(xì)胞治療技術(shù)的優(yōu)勢(shì)a）可有消除手術(shù)、放化療后殘余的癌細(xì)胞及微小病灶，預(yù)防月中瘤的復(fù)發(fā)和 轉(zhuǎn)移；b）可與放、化療聯(lián)合使用，能降低放化療的毒副作用的感染率，提高放化 療的療效；c）可用于放、化療無(wú)效的患者，或?qū)熕幬锂a(chǎn)生耐藥性的患者的治療；d）對(duì)于失去手術(shù)機(jī)會(huì)或已復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的晚期月中瘤患者，能迅速緩解其臨床癥 狀，延長(zhǎng)生存期；大部分患者出現(xiàn)瘤體減小甚至消失或長(zhǎng)期帶瘤生存

8、的 治療效果；e）由于CIK細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)和體細(xì)胞修復(fù)作用，在治療月中瘤的同時(shí)，大 部分患者尤其是放化療后的患者，可出現(xiàn)消化道癥狀減輕或消失，皮膚 有光澤，黑斑淡化，靜脈曲張消失，脫發(fā)停止甚至頭發(fā)生長(zhǎng)或白發(fā)變黑 等“年輕化”表現(xiàn)，及精神狀態(tài)或體力明顯恢復(fù)等現(xiàn)象，從而提高月中瘤 患者的生存質(zhì)量，延長(zhǎng)生存期。DC細(xì)胞1、DC細(xì)胞基本信息DC細(xì)胞，即樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic Cell）是正常人體內(nèi)存在的一種具有強(qiáng) 大的抗原提呈功能的一類特殊的細(xì)胞，被喻為機(jī)體的“天然佐劑”。2011年10月3日，瑞典卡羅琳醫(yī)學(xué)院在斯德哥爾摩宣布，2011年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予加拿大科學(xué)家拉爾夫斯坦曼、生于

9、盧森堡的法國(guó)籍科學(xué)家朱爾斯霍夫曼以 及美國(guó)科學(xué)家布魯斯博伊特勒，以表彰他們?cè)诿庖邔W(xué)領(lǐng)域取得的革命性研究成 果。其中，斯坦曼（RalphM。Steinman）教授，因其在免疫系統(tǒng)領(lǐng)域以及樹(shù)突狀 細(xì)胞（Dendriticcell 簡(jiǎn)稱DC為一系列研究發(fā)現(xiàn)，獨(dú)享獎(jiǎng)金的一半，另外一半由 其他兩位科學(xué)家分享。被譽(yù)為“DCffl胞之父”的斯坦曼教授在2006年就查出胰腺 癌晚期。在醫(yī)學(xué)上，晚期胰腺癌的惡化程度高，生存期不會(huì)超過(guò)6個(gè)月。然而，斯坦曼教授正是在接受了以他自己的研究成果“樹(shù)突細(xì)胞”（DC細(xì)胞）為依據(jù)的細(xì)胞免疫治療后，成功地將生命延長(zhǎng)。2、DQ田胞抗腫瘤機(jī)制a） DCT以高表達(dá)MHC-I類和MHC

10、6類分子，MH翁子與其捕獲加工的月中瘤 抗原結(jié)合，形成肽-MH分子復(fù)合物，并遞呈給T細(xì)胞，從而啟動(dòng)MHC-類 限制性CTLE應(yīng)和MHC也類限制性的CD4+ Thl反應(yīng)。同時(shí)，DCE!過(guò)其 高表達(dá)的共刺激分子（CD80/B7-1、CD86/B7-2、CD4第）提供T細(xì)胞活化 所必須的第二信號(hào)，啟動(dòng)了免疫應(yīng)答。b） DGWT細(xì)胞結(jié)合可大量分泌IL-12、IL-18激活T細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)CT民成, 主導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答，利于月中瘤清除；激活穿孔素 P顆粒酶B?口FasL/Fas 介導(dǎo)的途徑增強(qiáng)N隹田胞毒作用；c） Ds泌趨化因子（Chemotactic Cytokines , CCK）專一趨化初始型T

11、細(xì)胞 促進(jìn)T細(xì)胞聚集，增強(qiáng)了 T細(xì)胞的激發(fā)。保持效應(yīng)T細(xì)胞在月中瘤部位長(zhǎng)期 存在，可能通過(guò)釋放某些抗血管生成物質(zhì)（如IL-12、IFN-）及前血管生 成因子而影響月中瘤血管的形成。上述 CCKJ一步以正反饋旁分泌的方式 活化DC上調(diào)IL-12及CD80 CD86勺表達(dá)；同時(shí)DC也直接向CD8+T田胞 呈遞抗原肽，在活化的CD4+既田胞輔助下使CD8+既田胞活化，CD4+和 CD8+T5胞還可以進(jìn)一步通過(guò)分泌細(xì)胞因子或直接殺傷，增強(qiáng)機(jī)體抗腫 瘤免疫應(yīng)答。3、DC細(xì)胞治療的特點(diǎn)a）樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）人體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞，DC相當(dāng)于信使，將抗原信息傳遞給T細(xì)胞，并具有活化T細(xì)胞的功能，很

12、少量就可 以激發(fā)強(qiáng)大的T細(xì)胞反應(yīng)。b）可致敏輔助T細(xì)胞的多種細(xì)胞因子，顯著刺激初始型 T細(xì)胞增殖，以激 活體內(nèi)靜止?fàn)顟B(tài)的初始型T細(xì)胞（而巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞僅能刺激已活化 的或記憶性T細(xì)胞）。c）幫助重建月中瘤患者對(duì)月中瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視功能。機(jī)體的免疫系統(tǒng)具有完 備的監(jiān)視功能，但月中瘤細(xì)胞對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)有抵抗和抑制作用，使得 免疫細(xì)胞不能識(shí)別和殺傷月中瘤細(xì)胞。在 DC疫苗培養(yǎng)中用月中瘤抗原誘導(dǎo) DO其致敏后，可將其抗原信息傳遞給T細(xì)胞，使T細(xì)胞重新識(shí)別和殺 傷月中瘤細(xì)胞。DC-CIKa 胞1、DC-CIK基本信息DC-CIK生物細(xì)胞免疫治療即DC-CIK自體細(xì)胞治療技術(shù)，是癌癥治療領(lǐng)域的 科學(xué)家

13、們從高速發(fā)展的細(xì)胞學(xué)和免疫學(xué)中發(fā)現(xiàn)的研究突破?？茖W(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，在人體免疫系統(tǒng)內(nèi)，有兩種專門(mén)對(duì)付癌細(xì)胞的專項(xiàng)功能細(xì)胞 （DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞）， 但在人體內(nèi)的含量極少，僅占1%左右，月中瘤患者體內(nèi)的含量更少。科學(xué)家們經(jīng) 過(guò)刻苦攻關(guān)，成功從人體外周血中分離出這兩種細(xì)胞， 通過(guò)專項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)后再 回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，能系統(tǒng)殺滅癌細(xì)胞，防止轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散。臨床證明，DC-CIK細(xì)胞免疫治療能克服手術(shù)、放療、化療三大傳統(tǒng)治療方式的“不徹底、易轉(zhuǎn)移、副 作用大”等弊端，部分患者可提高三到五年生存率近一倍，是國(guó)際公認(rèn)的有望消滅癌細(xì)胞的月中瘤治療第四大新技術(shù)。DC-CIK細(xì)胞免疫治療主要是利用樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）和細(xì)胞

14、因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì) 胞（CIK）兩種細(xì)胞聯(lián)合治療月中瘤。DC-CIK細(xì)胞不僅能激發(fā)、增強(qiáng)月中瘤患者特異性 抗月中瘤免疫應(yīng)答，有效清除體內(nèi)殘留病灶，且在患者體內(nèi)誘發(fā)免疫記憶，從而獲 得長(zhǎng)期的抗瘤效應(yīng)，因而能夠防治常規(guī)治療（手術(shù)、化療和放療）后月中瘤殘留病灶 導(dǎo)致的復(fù)發(fā)，是一種全新、特異、有效的治療手段 。2、DC-CIK細(xì)胞抗腫瘤特點(diǎn)a）精準(zhǔn)殺月中瘤無(wú)毒副作用，DC細(xì)胞就像“雷達(dá)”，能識(shí)別抗原，激活免疫應(yīng) 答；CIK細(xì)胞就像“導(dǎo)彈”，能通過(guò)發(fā)揮自身細(xì)胞毒性，分泌細(xì)胞因子，精 確殺傷月中瘤細(xì)胞。DC和CIK細(xì)胞都是來(lái)源于患者自身，屬自體細(xì)胞，不存 在排異反應(yīng)，沒(méi)有明顯的毒副反應(yīng)和風(fēng)險(xiǎn)，在國(guó)際臨床應(yīng)用

15、中已經(jīng)非常成 熟。b）系統(tǒng)殺瘤防轉(zhuǎn)移，“雷達(dá)+導(dǎo)彈”產(chǎn)生了一個(gè)高效和諧的免疫體系，經(jīng)專項(xiàng) 實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)、增值、活化后，再回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，可以顯著抵制月中瘤細(xì)胞 的生長(zhǎng)、增殖，幫助機(jī)體恢復(fù)同月中瘤細(xì)胞作斗爭(zhēng)的能力，最大限度地調(diào)動(dòng) 人體免疫功能，全方位防止復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，明顯改善患者的生活質(zhì)量，有效 延長(zhǎng)生存期。二、細(xì)胞制備流程血液運(yùn)輸1、 采血采血前要進(jìn)行常規(guī)的檢查，包括肝功能、腎功能、血常規(guī)、抗凝血項(xiàng)以及乙 肝、艾滋、霉毒、丙肝病毒等傳染病。a）確保采到足量外周血約50-80ml,如血量不足及時(shí)通知實(shí)驗(yàn)室；b）要保證無(wú)菌，采血完畢要用采血針原套管套住針頭并用膠布纏牢，為保 險(xiǎn)起見(jiàn)，可再給采血管打結(jié)；

16、c）保證血液治療，無(wú)溶血、無(wú)血凝塊（導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量減少）；d）采血時(shí)間安排：上午，在手術(shù)、化療和放療之前或化療和放療之后患者身體狀況恢復(fù)，特別是白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞恢復(fù)正常；e）患者如為乙肝患者，提前通知實(shí)驗(yàn)室，以便安排專用實(shí)驗(yàn)室；2、 血液運(yùn)輸血液使用低溫藥品保存箱運(yùn)輸，并在 6個(gè)小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)輸過(guò)程中 盡量避免出現(xiàn)劇烈晃動(dòng)。3、 血液接收a）檢查采血袋外包裝，確認(rèn)包裝完整、血量充足；b）檢查細(xì)胞治療申請(qǐng)單，核對(duì)病人信息，并查看病人化驗(yàn)單；c）填寫(xiě)血液合格接收單等記錄工作；三、適應(yīng)癥1 .月中瘤的類型:CIK細(xì)胞溶瘤作用是非MHC艮制性的，不受癌癥組織類型的限制，因此對(duì)任 何一種癌癥均有殺滅

17、作用。文獻(xiàn)報(bào)道CIK細(xì)胞治療以下月中瘤取得了明顯的近、 遠(yuǎn) 期療效。頭頸部月中瘤：鼻咽癌、喉癌和舌癌等呼吸系統(tǒng)：肺癌（小細(xì)胞肺癌、鱗癌、腺癌）等消化系統(tǒng)：食管癌、肝癌、胃癌、腸癌、胰腺癌等泌尿系統(tǒng)：腎癌、腎上腺癌、膀胱癌等生殖系統(tǒng)：乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、前列腺癌等血液系統(tǒng)：急慢性白血病、淋巴瘤（除T細(xì)胞淋巴瘤）及其轉(zhuǎn)移癌等其他月中瘤：惡性黑色素瘤、腦膠質(zhì)瘤等。2 .月中瘤的臨床分期：（一）癌前階段（用T0代表）：細(xì)胞已發(fā)生變化但不是癌，可雙向發(fā)展一 恢復(fù)正?；驉夯砂?；（二）原位癌（用Tis代表）：細(xì)胞剛剛發(fā)生惡變（例如上皮層）；（三）浸潤(rùn)癌（用T1-4代表侵犯的深度和范圍）：細(xì)胞已由發(fā)生的

18、部位向深 處（如黏膜下）浸潤(rùn)；（四）局部或區(qū)域性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（用N0-4代表程度）：月中瘤細(xì)胞沿淋巴管轉(zhuǎn) 移到淋巴結(jié)；（五）遠(yuǎn)處播散（一般用 M代表）：指月中瘤細(xì)胞隨血流轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處器官。癌前病變期是可逆轉(zhuǎn)的。一旦細(xì)胞發(fā)生惡變，雖有一定階段性，皆不可逆轉(zhuǎn)。CIK/DCCIK療法適合早、中、晚各個(gè)時(shí)期的月中瘤。特別是早期月中瘤術(shù)后聯(lián)合 CIK/DCCIK治療，能有效清除術(shù)后殘余月中瘤細(xì)胞，防止轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。對(duì)于中、晚 期月中瘤患者，CIK/DCCIK聯(lián)合放、化療，能夠殺滅月中瘤細(xì)胞，控制月中瘤增長(zhǎng)，延長(zhǎng)生存時(shí)間，提高生活質(zhì)量。部分患者得以長(zhǎng)期生存三、治療流程按由左至右的順序，相關(guān)人員分工如下:主管醫(yī)生

19、中心負(fù)責(zé)人技術(shù)貝護(hù)士主管醫(yī)生知情同意輔助檢查評(píng)估米血few回輸復(fù)查評(píng)估再次治療隨訪1、主管醫(yī)生與患者談話，患者同意接受CIK/DCCIK治療，并簽署知情同意書(shū)（見(jiàn) 附表1）。注意：CIK/DC細(xì)胞治療可在手術(shù)治療后最早1周，放、化療前后最少2周進(jìn)行； 不可與化療及全身放療同時(shí)進(jìn)行，以免回輸?shù)募?xì)胞被殺傷破壞而降低療效。采血時(shí)間安排在手術(shù)、化療和放療之前或化療和放療之后患者身體狀況恢復(fù)，特 別是白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞恢復(fù)正常。2、患者采血前要進(jìn)行常規(guī)的檢查，包括肝功能、腎功能、血常規(guī)、抗凝血項(xiàng)以及乙肝、艾滋、霉毒、丙肝病毒等，若患者情況可以接受治療，請(qǐng)?zhí)顚?xiě)好“CIK/DCCIK 細(xì)胞治療申請(qǐng)單”（見(jiàn)附表

20、2）和相關(guān)的化驗(yàn)報(bào)告。3、將填好的“ CIK/DCCIK細(xì)胞治療申請(qǐng)單”送達(dá)生物細(xì)胞 GM改驗(yàn)室（生物細(xì) 胞實(shí)驗(yàn)中心，以便該治療的負(fù)責(zé)人進(jìn)行評(píng)估。如患者適合接受治療并付款后，實(shí) 驗(yàn)室做好細(xì)胞培養(yǎng)的準(zhǔn)備和計(jì)劃工作。4、采用患者自體外周血50-150 ml即可（采血袋到細(xì)胞中心實(shí)驗(yàn)室?。?，采血前 1天和當(dāng)天早餐正常飲食，盡量少食油膩食物，清淡為好。5、將采集到的血液/細(xì)胞送達(dá)生物細(xì)胞中心 GM或驗(yàn)室進(jìn)行誘導(dǎo)、培養(yǎng)，每 次換液后及細(xì)胞回輸前進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)，每次檢測(cè)結(jié)果均為陰性，方可給患者進(jìn)行 回輸。正常情況下，DC細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間為7天，將培養(yǎng)好的細(xì)胞分為2份，一份 當(dāng)時(shí)回輸，另一份與CIK共培養(yǎng)后回輸。

21、CIK細(xì)胞培養(yǎng)約需12-14大。培養(yǎng)好的 細(xì)胞分3份，每份間隔1天，進(jìn)行三次細(xì)胞回輸。細(xì)胞培養(yǎng)完成后，在給患者回 輸前12天，細(xì)胞中心實(shí)驗(yàn)室將向患者所在科室發(fā)送“ CIK/DCCIK細(xì)胞輸注通知 單”（見(jiàn)附表3）。以便患者所在科室安排好回輸準(zhǔn)備工作。6、回輸細(xì)胞的運(yùn)輸條件：溫度在4-37 C常溫條件下，1個(gè)小時(shí)內(nèi)可不用特殊 處理。若時(shí)間超過(guò)1小時(shí)，或溫度37c時(shí)，須低溫（2c-8 C）保存和運(yùn)輸。； 若溫度0 2c時(shí)，須保溫運(yùn)輸。運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)盡量避免劇烈震蕩。7、細(xì)胞治療前30分鐘，肌注25mg非那根（肝功能不全者慎用），或經(jīng)小壺加入 5mg地塞米松，以預(yù)防過(guò)敏反應(yīng)。將 CIK/DCCIK細(xì)胞

22、混懸液通過(guò)輸血器（7號(hào)針 頭）經(jīng)靜脈輸給患者。輸注細(xì)胞前，先輸 50毫升滅菌生理鹽水進(jìn)行引導(dǎo)，然后 再輸入細(xì)胞，輸完后，繼續(xù)輸 50毫升生理鹽水。細(xì)胞輸注過(guò)程中，速度稍慢， 保持3040滴/分鐘?；剌斶^(guò)程中關(guān)注病人的各方面反應(yīng)并做好記錄，若有異常 情況按臨床常規(guī)方法處理，若病人反應(yīng)強(qiáng)烈時(shí)可暫停輸入。 輸注完成后，繼續(xù)觀 察病人的反應(yīng)和體溫變化。8、復(fù)查、評(píng)價(jià)療效，進(jìn)行下次治療。9、門(mén)診定期復(fù)查和隨訪。四、規(guī)格及用法1 .細(xì)胞品質(zhì)及數(shù)量：外周血單個(gè)核細(xì)胞在生物細(xì)胞中心 GMP實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行誘導(dǎo)、培養(yǎng)，每次換液后及細(xì)胞回 輸前進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)，每次檢測(cè)結(jié)果均為陰性， 方可給患者進(jìn)行回輸。CIK細(xì)胞需要經(jīng)過(guò)

23、12-14 天培養(yǎng)，單次回輸細(xì)胞量約為（12.0） X109,隔天回輸1次，也可連續(xù)回輸；DC細(xì)胞需要 經(jīng)過(guò)7天培養(yǎng)后，靜脈回輸一份，單次細(xì)胞輸注量約為 13X107,另一份與CIK細(xì)胞共培養(yǎng) 后回輸。2 .用法及療程初次治療一般應(yīng)該連續(xù)兩個(gè)療程的治療， 然后第一年每1-3個(gè)月追加一個(gè)療 程的鞏固治療。隨訪，根據(jù)月中瘤類型和臨床分期等，決定后續(xù)治療。3 .聯(lián)合治療CIK細(xì)胞治療可用于各個(gè)分期的月中瘤患者，根據(jù)患者的病情、病程、及治療 史，可靈活安排應(yīng)用。當(dāng)與手術(shù)、化療和放療聯(lián)合使用時(shí)，CIK/DCCIK細(xì)胞治療可在手術(shù)治療后最 早1周，化放療前后最少2周進(jìn)行；不可與化療及全身放療同時(shí)進(jìn)行，以免

24、回輸?shù)募?xì)胞被殺傷破壞而降低療效。以下是部分參考方案:手術(shù)+CIK/DCCIK適用于早期月中瘤患者，手術(shù)后患者因應(yīng)激導(dǎo)致免疫抵抗力下降， 又不能很快 進(jìn)行化放療，在此窗口期，殘留月中瘤細(xì)胞獲得快速生長(zhǎng)的機(jī)會(huì)。此時(shí)盡早使用 CIK/DCCIK細(xì)胞可有效清除術(shù)后殘余的癌細(xì)胞及微小病灶，防止復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，提高 治愈率。在術(shù)前采血，最早可在術(shù)后一周時(shí)回輸。微創(chuàng)手術(shù)枇放療+CIK/DCCIK適用于中晚期月中瘤患者，手術(shù)后發(fā)生轉(zhuǎn)移、或者身體無(wú)法承受手術(shù)的患者。微創(chuàng)手術(shù)減輕瘤負(fù)荷，化放療殺死快速生長(zhǎng)的小病灶和癌細(xì)胞，CIK細(xì)胞消除殘留的癌細(xì)胞，對(duì)靜止期癌細(xì)胞也有效，達(dá)到阻止或延緩復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的目的?；暖?+CIK

25、/DCCIK適用于中晚期月中瘤患者，CIK細(xì)胞具有協(xié)同治療作用，可抑制或逆轉(zhuǎn)癌細(xì)胞 耐藥性，提高其對(duì)化放療的敏感性，明顯減輕放、化療的毒副作用，提高患者免 疫力。單獨(dú)使用CIK/DCCIK適用于各分期患者。對(duì)于已經(jīng)接受過(guò)治療的早期患者，可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)， 防止復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，提高治愈率。對(duì)于化放療耐藥或不耐受的月中瘤患者， 對(duì)于沒(méi)有機(jī) 會(huì)手術(shù)和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的晚期月中瘤患者，大量的CIK細(xì)胞回輸能迅速緩解晚期月中瘤患 者的癥狀，穩(wěn)定病情，提高患者身體機(jī)能狀況，改善生活質(zhì)量，降低復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn) 移率，延長(zhǎng)生存時(shí)間，爭(zhēng)取其它治療機(jī)會(huì)，而且還出現(xiàn)瘤體縮小甚至消失或長(zhǎng)期 帶瘤生存的大量病例。五、安全性及不良反應(yīng)的處

26、理：CIK/DCCIK細(xì)胞治療的安全性非常好，至今未有嚴(yán)重不良反應(yīng)（嚴(yán)重的變態(tài) 反應(yīng)、肝腎功能損害、骨髓抑制等）的報(bào)道。常見(jiàn)的伴隨反應(yīng)有發(fā)熱、皮疹、流 感樣癥狀等（質(zhì)控部已排除細(xì)胞質(zhì)量問(wèn)題）。以下對(duì)可能發(fā)生的不良反應(yīng)的處理 做出建議。1 .有少數(shù)病例在細(xì)胞輸注過(guò)程中，出現(xiàn)嚴(yán)重過(guò)敏體征，如大汗淋漓、呼吸困難等, 應(yīng)停止細(xì)胞輸注治療，并作相應(yīng)的臨床對(duì)癥處理?？闪⒓唇o予 1）、吸氧，2）、 地塞米松10mg靜推，3）安定注射液10mg肌肉注射等對(duì)癥治療。檢查心電圖、 腎功能等。2 .發(fā)熱：細(xì)胞輸注結(jié)束后，有部分患者出現(xiàn)發(fā)熱（37.0 C38.5C之間）、困乏 等一過(guò)性流感樣癥狀，絕大部分病人在 26

27、小時(shí)內(nèi)自行恢復(fù)正常。極少數(shù)出現(xiàn)體 溫較高，超過(guò)39 C, 一般對(duì)癥處理即可恢復(fù)。3 .少數(shù)患者在應(yīng)用“血細(xì)胞分離機(jī)”進(jìn)行細(xì)胞采集過(guò)程中可能會(huì)出現(xiàn)口面部、 四肢發(fā)麻、肌肉痙攣，口服葡萄糖酸鈣即可消失。身體虛弱者，采集時(shí)間可能會(huì) 適當(dāng)延長(zhǎng)。4 .皮疹，皮膚瘙癢：處理：立即停止細(xì)胞輸注。藥物：異丙嗪注射液25mg肌肉注射；地塞米松5mg肌肉注射；5%葡萄糖250ml,葡萄糖酸鈣20ml, 胰島素注射液6U靜脈滴注。5 .消化系統(tǒng)癥狀：惡心，嘔吐不良反應(yīng)一般較少見(jiàn)，這一類患者屬于敏感型體 質(zhì)，尤其是在第1療程時(shí)，患者胃腸道反應(yīng)比較劇烈，可注射胃復(fù)安、異內(nèi)嗪。6 .精神癥狀：較少見(jiàn)，一般常見(jiàn)于女性患者，

28、此類患者常伴有精神疾病，如輕， 中，重憂郁癥，躁狂癥，或者有精神分裂癥病史。一般表現(xiàn)為興奮，敏感，夸大 言語(yǔ)及行為，出現(xiàn)假性胸悶，呼吸困難，頭暈。查體可見(jiàn)肌張力增強(qiáng)，眼球輕微 震顫等體征。此類患者心理暗示作用比較強(qiáng)， 在處理上要以語(yǔ)言暗示為主。 在輸 注細(xì)胞時(shí)注意緩慢滴注，每分鐘 30滴即可。如患者情緒仍有波動(dòng)，可使用安定 口服。7 .造血系統(tǒng)異常：月中瘤患者一般均有極限放化療史，當(dāng)血像偏低，尤其是白細(xì) 胞和血小板計(jì)數(shù)顯著降低時(shí)，大劑量使用免疫細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)進(jìn)一步血像降低， 從而 有導(dǎo)致加重醫(yī)源性再障的可能，患者可能會(huì)出現(xiàn)感染，出血等癥狀。因此，待血 像恢復(fù)后，再予細(xì)胞治療。8 .雙下肢水月中：某些患者在使用 DC-CIK后出現(xiàn)雙下肢水月中，出現(xiàn)的時(shí)間不等， 有的甚至數(shù)周后出現(xiàn)雙下肢水月中。 一般無(wú)需特殊處理，自行消退?？赡芤虬捉樗?2引起。必要時(shí)，可做腎功檢查排除其他疾病。9 .各個(gè)臟器處于失代償期：這種情況均見(jiàn)于晚期月中瘤患者，尤其是出現(xiàn)惡病質(zhì)。 這個(gè)時(shí)期正在衰減或者壞死的細(xì)胞大量出現(xiàn)，在使用 DC-CIK時(shí)慎用，以免造成 組織器官進(jìn)一步衰竭。10 .尿潴留：給予導(dǎo)尿，嚴(yán)重者留置導(dǎo)尿。反復(fù)尿潴留者給予生理鹽