TLC薄層色譜分析步驟及注意事項(xiàng)

1、薄層色譜分析步驟及注意事項(xiàng)薄層色譜法(thin layer chromatography簡(jiǎn)寫(xiě)TLC)是物理化學(xué)的分離技術(shù)，常用于藥物的分離與分析現(xiàn)對(duì)此方法的分析步驟及注意事項(xiàng)提點(diǎn)建議。薄層色譜分析步驟完成TLC分析通常需經(jīng)制板、點(diǎn)樣、展開(kāi)、檢出4步操作。制板在一平面支持物(通常玻璃)上，均勻地涂制硅膠、氧化鋁或其他吸附劑薄層、樣品的分離、檢測(cè)就在此薄層色譜板上進(jìn)行。一般選用適當(dāng)規(guī)格的表面光滑平整的玻璃板。常用的薄層板規(guī)格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。稱(chēng)取適量硅膠，加入0.20.5%羧甲基纖維素鈉溶液（CMC-Na），充分?jǐn)嚢杈鶆颍?/p>

2、進(jìn)行制板。一般來(lái)說(shuō)10cm×20cm的玻璃板，35g硅膠/塊；硅膠與羧甲基纖維素鈉的比例一般為1：21：4。制好的玻璃板放于水平臺(tái)上，注意防塵。在空氣中自然干燥后，置1l0烘箱中烘0.5lh，取出，放涼，并將其放于紫外光燈(254nm)下檢視，薄層板應(yīng)無(wú)花斑、水印，方可備用。點(diǎn)樣用微量進(jìn)樣器進(jìn)行點(diǎn)樣。點(diǎn)樣，先用鉛筆在層析上距末端lcm 處輕輕畫(huà)一橫線(xiàn)，然后用毛細(xì)管吸取樣液在橫線(xiàn)上輕輕點(diǎn)樣，如果要重新點(diǎn)樣，一定要等前一次點(diǎn)樣殘余的溶劑揮發(fā)后再點(diǎn)樣，以免點(diǎn)樣斑點(diǎn)過(guò)。一般斑點(diǎn)直徑大于2mm，不宜超過(guò)5mm.底線(xiàn)距基線(xiàn)125cm，點(diǎn)間距離為lcm左右，樣點(diǎn)與玻璃邊緣距離至少lcm，為防止邊緣

3、效應(yīng)，可將薄層板兩邊刮去12cm，再進(jìn)行點(diǎn)樣。展開(kāi)將點(diǎn)了樣的薄層板放在盛在有展開(kāi)劑的展開(kāi)槽中，由于毛細(xì)管作用，展開(kāi)溶劑在薄層板上緩慢前進(jìn)，前進(jìn)至一定距離后，取出薄層板，樣品組分固移動(dòng)速度不同而彼此分離。 展開(kāi)室應(yīng)預(yù)飽和。為達(dá)到飽和效果，可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑；或者在壁上貼兩條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封室頂?shù)纳w。 展開(kāi)劑一般為兩種以上互溶的有機(jī)溶劑，并且臨用時(shí)新配為宜。 薄層板點(diǎn)樣后，應(yīng)待溶劑揮發(fā)完，再放人展開(kāi)室中展開(kāi)。 展開(kāi)應(yīng)密閉，展距一般為815cm。薄層板放入展開(kāi)室時(shí)，展開(kāi)劑不能沒(méi)過(guò)樣點(diǎn)。一般情況下，展開(kāi)劑浸入薄層下端的高度不宜超過(guò)0.5cm。 展開(kāi)劑每次展開(kāi)后，都

4、需要換，不能重復(fù)使用。 展開(kāi)后的薄層板用適當(dāng)?shù)姆椒?，使溶劑揮發(fā)完全，然后進(jìn)行檢視。 Rf值一般控制在0.30.8，當(dāng)Rf值很大或很小時(shí)，應(yīng)適當(dāng)改變流動(dòng)相的比例。 斑點(diǎn)的檢出展開(kāi)后的薄層板經(jīng)過(guò)干燥后，常用紫外光燈照射或用顯色劑顯色檢出斑點(diǎn)。對(duì)于無(wú)色組分，在用顯色劑時(shí)，顯色劑噴灑要均勻，量要適度。紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出效果就越好。展開(kāi)分離后，化合物在薄層板上的位置用比移值(Rf值)來(lái)表示?；衔锇唿c(diǎn)中心至原點(diǎn)的距離與溶劑前沿至原點(diǎn)的距離的比值就是該化合物的Rf值。注意事項(xiàng)鋪板用的勻漿不宜過(guò)稠或過(guò)?。哼^(guò)稠，板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過(guò)稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙勻漿配比般是硅膠G:水

5、=1：23，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時(shí)間，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過(guò)拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來(lái)判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄，點(diǎn)樣易過(guò)載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對(duì)薄層鑒別的影響不是很，影響最大的是展開(kāi)劑的配制和展開(kāi)系統(tǒng)的飽和。點(diǎn)樣盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點(diǎn)樣管。樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開(kāi)的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無(wú)水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或

6、放入干燥器里晾干。展開(kāi)劑配制選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開(kāi)劑。絕對(duì)不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開(kāi)缸，振搖展開(kāi)缸來(lái)配制展開(kāi)劑?；旌喜痪鶆蚝蜎](méi)有分液的展開(kāi)劑，會(huì)造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管，移液管應(yīng)符合計(jì)量認(rèn)證要求，盡管時(shí)候這不是必須的。展開(kāi)系統(tǒng)的飽和一般使用的是雙槽的展開(kāi)缸，一槽用來(lái)放展開(kāi)劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開(kāi)的板放入兩槽間的平臺(tái)，斜架著，蓋上展開(kāi)缸的蓋子。讓展開(kāi)劑的蒸氣充滿(mǎn)展開(kāi)缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時(shí)間在半小時(shí)左右。展開(kāi)時(shí)難免要打開(kāi)蓋子把薄層板放入展開(kāi)劑中，不過(guò)對(duì)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡量輕、快。 溫濕度的控制溫濕度對(duì)薄層影響都很大。不凍結(jié)的提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度