醫(yī)學(xué)專題—單個(gè)核細(xì)胞課件

1、醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞第十四章第十四章 免疫免疫(miny)(miny)細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測技術(shù)細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測技術(shù)第一頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞第二頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞(xbo)(xbo)的分離的分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞(xbo)(xbo)分離分離 淋巴細(xì)胞的分離淋巴細(xì)胞的分離 T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離 T T細(xì)胞亞群的分離細(xì)胞亞群的分離 第三頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞(xbo)(xbo)分離分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞（外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral mononuc

2、lear cells, peripheral mononuclear cells, PMNCPMNC）包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（monocytemonocyte）。）。 FicollFicoll分離液法主要分離液法主要(zhyo)(zhyo)用于分離外周血中的單個(gè)核用于分離外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。細(xì)胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。 第四頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞(xbo)分選和基本原理分選和基本原理不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞表面不同細(xì)胞表面(biomin)(biomin)生物學(xué)特性不同生物學(xué)特性不同不

3、同細(xì)胞表面分化抗原不同不同細(xì)胞表面分化抗原不同第五頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞不同不同(b tn)細(xì)胞密度不同細(xì)胞密度不同(b tn)人的紅細(xì)胞密度人的紅細(xì)胞密度(md)(md)為為1.093 粒細(xì)胞密度為粒細(xì)胞密度為1.092 單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）的密度單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）的密度為為1.076-1.090 第六頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞不同不同(b tn(b tn) )細(xì)胞密度不同細(xì)胞密度不同(b tn(b tn) )第七頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞用用1.0771.0770.0010.001的分層液可將細(xì)胞的分層液可將細(xì)胞(xbo)(xbo)分離

4、分離 第八頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞密度梯度離心密度梯度離心(lxn)(lxn)(Ficoll)(Ficoll)離心離心(lxn)(lxn)第九頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞淋巴細(xì)胞分離淋巴細(xì)胞分離(fnl)（去單核細(xì)胞）（去單核細(xì)胞）貼壁粘附貼壁粘附(zhn f)(zhn f)法法 吸附柱過濾法吸附柱過濾法 磁鐵吸引法磁鐵吸引法 Percoll Percoll 分離液法分離液法 （連續(xù)密度梯度離心）（連續(xù)密度梯度離心）第十頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞 E E花環(huán)沉降花環(huán)沉降(chnjing)(chnjing)法法 尼龍毛柱分離法尼龍毛柱分離法 T T細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xb

5、o)和和B B細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)的分離的分離T T細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)亞群的分離亞群的分離 親和板結(jié)合分離法親和板結(jié)合分離法 磁性微球分離法磁性微球分離法 熒光激活細(xì)胞分離儀分離法熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 第十一頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞表面細(xì)胞表面(biomin)分化抗原（分化抗原（CD抗原）抗原）適用于適用于T T、B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離(fnl)(fnl)已知已知CDCD抗原細(xì)胞亞群的分離抗原細(xì)胞亞群的分離未知未知CDCD抗原細(xì)胞亞群的分離抗原細(xì)胞亞群的分離（陰性分選）（陰性分選）第十二頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞第十三頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)

6、核細(xì)胞磁珠大小可以磁珠大小可以(ky)選擇選擇第十四頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞大小免疫磁珠分離大小免疫磁珠分離(fnl)細(xì)胞的特點(diǎn)比較細(xì)胞的特點(diǎn)比較 比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目大磁珠大磁珠小磁珠小磁珠對細(xì)胞的影響對細(xì)胞的影響對細(xì)胞造成機(jī)械壓力，影響對細(xì)胞造成機(jī)械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)。后培養(yǎng)。對細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)對細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)。胞的后續(xù)培養(yǎng)。對流式細(xì)胞儀的影響對流式細(xì)胞儀的影響阻塞流式細(xì)胞儀的噴嘴，影阻塞流式細(xì)胞儀的噴嘴，影響散射光。響散射光?？芍苯由狭魇郊?xì)胞儀檢測，可直接上流式細(xì)胞儀檢測，不影響散射光。不影響散射光。分離條件要

7、求分離條件要求技術(shù)簡單，分離可在試管中技術(shù)簡單，分離可在試管中完成。完成。需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞。需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞。 收率收率得率高。得率高。得率不高。得率不高。純度純度純度低。純度低。純度高。純度高。分離時(shí)間分離時(shí)間分離速度快。分離速度快。分離速度慢。分離速度慢。分離成本分離成本成本低。成本低。需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞，需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞，需要一次性的分離柱，不能需要一次性的分離柱，不能在普通試管進(jìn)行。在普通試管進(jìn)行。第十五頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞第十六頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞第十七頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞免疫免疫(miny)磁珠法細(xì)胞分選過程磁

8、珠法細(xì)胞分選過程第十八頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞免免疫疫磁磁珠珠細(xì)細(xì)胞胞分分選選裝裝置置第十九頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞全自動細(xì)胞全自動細(xì)胞(xbo)分選系統(tǒng)分選系統(tǒng)第二十頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞熒光熒光(ynggung)激活細(xì)胞分離儀分離法激活細(xì)胞分離儀分離法 第二十一頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞流式細(xì)胞分析儀流式細(xì)胞分析儀第二十二頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞 淋巴細(xì)胞標(biāo)志淋巴細(xì)胞標(biāo)志(biozh)(biozh)及亞群分類及亞群分類 常用常用(chn(chn yn yn) )于鑒定和檢測淋巴細(xì)胞于鑒定和檢測淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志是簇表面標(biāo)志是簇分化抗原（分化抗

9、原（Cluster Cluster of differentiationof differentiation，CDCD）。 第二十三頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞T T細(xì)胞表面細(xì)胞表面(biomin)(biomin)標(biāo)志及其亞群標(biāo)志及其亞群 CD3+CD4+CD8-CD3+CD4+CD8-輔助性輔助性T T細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo) （help T cell,Thhelp T cell,Th） CD3+CD4-CD8+CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性T T細(xì)胞（細(xì)胞（cytotoxic T cell,Tc cytotoxic T cell,Tc or CTLor CTL） CD4

10、+CD25+CD4+CD25+調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T T細(xì)胞細(xì)胞 （regulatory T cell,Tr or Tregregulatory T cell,Tr or Treg）第二十四頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞B B細(xì)胞表面細(xì)胞表面(biomin)(biomin)標(biāo)志標(biāo)志 SmIgSmIg、FcFc受體、補(bǔ)體受體、受體、補(bǔ)體受體、EBEB病毒受體，部分病毒受體，部分CDCD分分子子(fnz)(fnz)是是B B細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，其中以細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，其中以SmIgSmIg為為B B細(xì)胞所特有，是鑒定細(xì)胞所特有，是鑒定B B細(xì)胞可靠的指標(biāo)。細(xì)胞可靠的指標(biāo)。 CD19/CD5CD19/

11、CD5分子：可將分子：可將B B細(xì)胞區(qū)分為細(xì)胞區(qū)分為B1B1細(xì)胞和細(xì)胞和B2B2細(xì)胞，細(xì)胞，B1B1細(xì)胞為細(xì)胞為CD19CD19和和CD5CD5雙陽性，而雙陽性，而B2B2細(xì)胞僅為細(xì)胞僅為CD19CD19陽陽性，性，B2B2細(xì)胞為通常所指的細(xì)胞為通常所指的B B細(xì)胞。細(xì)胞。 第二十五頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞NKNK細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)表面標(biāo)志表面標(biāo)志 人類人類NKNK細(xì)胞表面細(xì)胞表面(biomin)(biomin)標(biāo)志主要以標(biāo)志主要以CD16CD16、CD56CD56來認(rèn)定，臨床上將來認(rèn)定，臨床上將CD3-CD3-CD56+CD16+CD56+CD16+淋巴細(xì)胞認(rèn)定為淋巴細(xì)胞

12、認(rèn)定為NKNK細(xì)胞。細(xì)胞。 第二十六頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞T細(xì)胞細(xì)胞(xbo)及及NK細(xì)胞細(xì)胞(xbo)第二十七頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞抗原抗原(kngyun)提呈類細(xì)胞提呈類細(xì)胞第二十八頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞(xbo)表面標(biāo)志的檢測表面標(biāo)志的檢測 抗體致敏細(xì)胞抗體致敏細(xì)胞(xbo)(xbo)花環(huán)法花環(huán)法 免疫細(xì)胞化學(xué)法免疫細(xì)胞化學(xué)法 免疫熒光法免疫熒光法 流式細(xì)胞分析法流式細(xì)胞分析法 第二十九頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志(biozh)(biozh)檢測的臨床意義檢測的臨床意義 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測是評價(jià)免疫功能的重淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測是評價(jià)免疫功能的重要要(zhngyo)(zhngyo)指標(biāo)。指標(biāo)。 對對CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T細(xì)胞的測定，有助于免疫缺陷細(xì)胞的測定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反應(yīng)的監(jiān)疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反應(yīng)的監(jiān)測。測。 第三十頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞臨床臨床(ln chun)常見疾病中的常見疾病中的T 淋巴細(xì)胞的變化淋巴細(xì)胞的變化 第三十一頁，共三十二頁。醫(yī)學(xué)專題單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)容(nirng)總結(jié)第十四章。T細(xì)胞和B細(xì)胞的分離。不同細(xì)胞密度不同。