細胞生物學實驗教案

1、e細胞生物學實驗授課教案課程細胞生物學實驗班級11級3、4、5班學期2012-2013-2課時2教師何飛上課日期課程類型實 驗課程名稱（章、節(jié)）細胞生物學實驗實驗一 細胞大小測定和生物繪圖法教學目的、要求1. 掌握用測微尺測定細胞大小的原理和方法。2. 掌握生物繪圖的基本方法。教學重點1.測微尺測定細胞大小的原理和方法。2.生物繪圖的基本方法。教學難點主要教具設(shè)備材料1. 實驗材料：口腔黏膜上皮細胞，洋蔥內(nèi)表皮，西紅柿，芹菜，韭菜，紅辣椒2. 實驗用品：普通光學顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、消毒牙簽、燒杯、吸管、0.9%生理鹽水、0.1%亞甲基蘭、蒸餾水、吸水紙，HB及2H或3H繪圖鉛筆、橡皮

2、、直尺、繪圖紙、鉛筆刀、各種細胞標本玻片。思考題人口腔上皮細胞、洋蔥表皮細胞差異課后記教學內(nèi)容備注（一）測微尺的原理測微尺分物鏡測微尺（簡稱物微尺或臺微尺）和目鏡測微尺（簡稱目微尺），兩尺配合使用，可以測量細胞大小。目微尺是一個可以放在目鏡內(nèi)的特制玻璃圓片，圓片中央刻有一條直線，此線分為若干格。物微尺為一載玻片中央封固的小尺，長1mm，被等分為100格，長為0.01mm（10um）。當測量細胞大小時，不能用物微尺直接測量細胞，而只能使用目微尺。因目微尺測量的細胞是經(jīng)物鏡放大后的像，而它每格所代表的實際長度隨物鏡的放大率而變，在測量時需要先用物微尺來測定，求出某一放大率時目微尺每格所代表的實際長

3、度，然后再用以測定細胞大小。將物微尺放在顯微鏡的載物臺上，小心轉(zhuǎn)動目鏡測微尺，移動物微尺使兩尺平行，起點線重合，然后找出另一處兩尺刻度重合處，記錄起點線到重合線之間的各尺的刻度數(shù)（格數(shù)），按下式計算，在該放大系統(tǒng)下目微尺每格所代表的實際長度：物測微尺格數(shù)目微尺每格所代表的實際長度= ×10um 目測微尺格數(shù)例如：目微尺是100倍，其對應的物微尺使80格，則目微尺每格所代表的實際長度為80/100=8um。測量某一細胞時，如果目微尺測得其橫徑為5倍，則此細胞橫徑為8×5=40um。（二）生物繪圖的基本要求1. 具有高度的科學性，不得有科學性錯誤。形態(tài)結(jié)構(gòu)要準確，比例要正確，要

4、求真實感，立體感，精美而美觀。2. 圖面要力求整潔，鉛筆要保持尖銳，盡量少用橡皮。3. 繪圖大小要適宜，位置略偏左，右邊留著注圖。4. 繪圖的線條要光滑、勻稱，點點要大小一致。5. 繪圖要完善，字體用正楷，大小要均勻，不能潦草。注圖線用直尺畫出，間隔要均勻，且一般多向右邊引出，圖注部分接近時可用折線，但注圖線之間不能交叉，圖注要盡量排列整齊。 6. 繪圖完成后在繪圖紙上方要寫明實驗名稱、班級、姓名、時間，在圖的下方注明圖名及放大倍數(shù)。細胞生物學實驗授課教案課程細胞生物學實驗班級11級3、4、5班學期2012-2013-2課時2教師何飛上課日期課程類型實 驗課程名稱（章、節(jié)）細胞生物學實驗實驗二

5、 細胞中過氧化物酶的顯示教學目的、要求1. 觀察過氧化物酶的分布2. 掌握過氧化物酶顯示方法的原理及操作步驟教學重點過氧化物酶顯示方法教學難點主要教具設(shè)備材料1. 材料：洋蔥根尖2. 藥品：0.1%鉬酸胺，1%聯(lián)苯胺，生理鹽水（0.7%-0.9%）0.1%鉬酸胺：取0.1g鉬酸胺溶于100ml雙蒸水中。1%聯(lián)苯胺：取1g聯(lián)苯胺溶于100ml雙蒸水中。 聯(lián)苯胺混合液：聯(lián)苯胺（研磨）0.2g溶于100ml蒸餾水，過濾，于濾液中滴加3% H2O22滴，儲存于棕色瓶中。3.儀器用品：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、解剖刀片思考題課后記教學內(nèi)容備注1. 取新鮮洋蔥根尖于載玻片上壓片。2. 加1滴0.1%鉬酸胺，

6、置5分鐘。3. 加1%聯(lián)苯胺溶液1滴，待其出現(xiàn)藍色。4. 用生理鹽水沖洗1次。5. 加蓋玻片，觀察。細胞生物學實驗授課教案課程細胞生物學實驗班級11級3、4、5班學期2012-2013-2課時2教師何飛上課日期課程類型實 驗課程名稱（章、節(jié)）細胞生物學實驗實驗三 細胞內(nèi)糖類的顯示教學目的、要求1. 掌握多糖鑒定的PAS法的原理與技術(shù)，2. 觀察細胞內(nèi)多糖的分布。教學重點線粒體的超活染色技術(shù)教學難點主要教具設(shè)備材料1器材顯微鏡、剪刀、鑷子、解剖針、染色缸、載玻片、蓋玻片、吸水紙、恒溫水浴箱、小燒杯（10ml）2材料馬鈴薯塊莖3試劑及其配制Schiff試劑、0.5%過碘酸溶液、70%乙醇、pH4.

7、2磷酸緩沖液、淀粉酶思考題簡述PAS法的反應原理，繪圖描述細胞內(nèi)多糖的分布。課后記教學內(nèi)容備注切取馬鈴薯塊莖，放入過碘酸溶液中，10min后用70%乙醇漂洗一下。將薄片放入Schiff試劑中2025min。取出薄片放入70%的乙醇中浸1min。用70%乙醇中沖洗（將薄片放在載玻片上，用吸管吸乙醇滴片）。加上蓋玻片鏡檢。對照薄片可于切下后，以pH4.2磷酸鹽緩沖液配制的淀粉酶消化40min，再進入染液。結(jié)果：塊莖組織細胞內(nèi)可見到紫紅色或深紅色淀粉顆粒，對照無色或色淡。細胞生物學實驗授課教案課程細胞生物學實驗班級11級3、4、5班學期2012-2013-2課時2教師何飛上課日期課程類型實 驗課程名

8、稱（章、節(jié)）細胞生物學實驗實驗四 細胞Feulgen反應教學目的、要求1. 了解孚爾根反應的原理。2. 學習DNA的孚爾根染色方法及其操作步驟。3. 觀察染色結(jié)果。了解細胞中DNA的分布。1.教學重點DNA的孚爾根染色方法教學難點主要教具設(shè)備材料1. 儀器設(shè)備：普通光學顯微鏡、冰箱、烘箱、水浴鍋、染色缸、100ml小燒杯、載玻片、蓋玻片若干、吸水紙若干、1L棕色試劑瓶。2. 實驗材料：洋蔥根尖或蠶豆根尖切片、人血涂片。3. 試劑：1mol/L HCl：82.5ml濃鹽酸稀釋于1000ml蒸餾水中。Schiffs試劑配制：100ml蒸餾水煮沸，加入0.5g堿性品紅，攪拌溶解，溶液為紅色。待溶液冷

9、卻到50，過濾，加入10ml 1mol/L HCl,搖動；繼續(xù)冷卻至25，加1.0g偏重亞硫酸鈉，搖勻。室溫，暗處保存24h,直到溶液變?yōu)榈S色或近于無色。此時，品紅已轉(zhuǎn)化為無色品紅衍生物，這一溶液稱為Schiffs試劑。如果急用，加幾?；钚蕴?，搖勻，過濾。漂洗液配制：此溶液用時新鮮配制。配制漂洗液與配制Schiffs試劑所用偏重亞硫酸鈉必須一致。偏重亞硫酸鈉 5ml1mol/L HCl 5ml蒸餾水 90ml5%三氯乙酸：5g三氯乙酸溶解定容于100ml蒸餾水中。0.5固綠酒精溶液：0.5g固綠粉末溶于100ml95%酒精中。思考題1. 繪圖表示蟾蜍或鵪鶉血細胞中DNA的原位分布情況。2.

10、簡述Feulgen反應的原理及關(guān)鍵步驟。說明Feulgen反應中設(shè)立對照組的必要性課后記教學內(nèi)容備注實驗原理：核酸是最重要的生物大分子之一，它和蛋白質(zhì)一起構(gòu)成生命的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。核酸的最主要的生物學功能是它直接參與生物遺傳信息的傳遞過程.在真核細胞中DNA主要分布在細胞核中,并與蛋白質(zhì)結(jié)合核蛋白,構(gòu)成染色質(zhì)(體)的主要成分.在線粒體和葉綠體中也有少量DNA存在。根據(jù)核酸三種成分的不同特性,可用不同方法加以顯示。核酸的堿基具有共軛雙鍵,具有吸收紫外光的性質(zhì),其吸收高在260波長處,因此,可有紫外吸收法對核酸進行定量測定。核酸的戊糖部分經(jīng)稀酸水解后生成醛，可與Schiff氏試劑生成特異性的反應.這

11、就是顯示DNA的傳統(tǒng)細胞化學方法Feulgen反應。Feulgen反應的機理:用稀酸水解DNA,首先破壞糖鍵,然后破壞糖和嘌呤堿之間的苷鍵,從而暴露出脫氧核糖化合物,通過磷酸鍵被連結(jié)在核糖主鍵中,穩(wěn)定地保持著呋喃糖的形式,并在脫氧核糖的一端(C)性成游離的醛殘基,像醛一樣可以和Schiff氏試劑(無色品紅亞硫酸)結(jié)合,形成紫紅色化合物,所以只有DNA的部位,才能呈現(xiàn)紫紅色陽性反應。如果稀酸水解DNA繼續(xù)進行,則會使蛋白質(zhì)和核酸進一步被去除。所以過度水解會使Schiff氏試劑的染色深度下降,甚至使反應呈陰性。實驗框圖：固定酸水解染色水洗鏡檢1.固定:血涂片 室溫干燥正常反應片 對照片 90三氯醋

12、酸15min 蒸餾水略洗 2.稀酸水解:1mol/L鹽酸 冷3 min 1mol/L鹽酸 60水浴5-12 min 1mol/L鹽酸 冷略洗3.染色: Schiff氏試劑 暗盒避光30 min亞硫酸水I,II,III 各3 min4.水洗:流水沖洗 2 min 蒸餾水 略洗 鏡檢5.Feulgen反應的結(jié)果：由于DNA主要分布在細胞核，所以經(jīng)Schiff氏試劑反應著色后，細胞核呈現(xiàn)深紫紅色，而細胞的其它部分無色。如用固綠復染，則細胞質(zhì)和核仁呈現(xiàn)淺綠色。6.Feulgen反應應注意的問題：做對照實驗：為了檢驗Feulgen反應的陽性的可靠程度，最好用DNA酶消化細胞材料，取得Feulgen陰性反

13、應作為對照。如果沒有DNA酶，也可以用5%三氯醋酸抽提核酸作為陰性反應對照。稀酸水解的時間: Feulgen反應的一個關(guān)鍵步驟是水解DNA，使其釋放出游離的醛殘基，但水解時間要適宜。若水解時間不夠,嘌呤鹼脫落不下來，反應就變?nèi)酰环粗?，若水解時間過長，則可使DNA和蛋白質(zhì)過度降解，使反應變?nèi)?，甚至呈陰性反應?稀酸水解的時間一般為5-15 min，隨動植物種類以及固定劑的不同而異。 Schiff氏試劑的質(zhì)量: Schiff氏試劑的好壞直接影響著DNA的呈色反應，所以應選用質(zhì)量好的堿性品紅來配制Schiff氏試劑，并注意避光保存，防止氧化變紅失效。細胞生物學實驗授課教案課程細胞生物學實驗班級11級

14、3、4、5班學期2012-2013-2課時2教師何飛上課日期課程類型實 驗課程名稱（章、節(jié)）細胞生物學實驗實驗五 細胞融合教學目的、要求1.了解PEG 誘導細胞融合的基本原理。2. 通過PEG 誘導的雞紅細胞之間或雞紅細胞與大鼠紅細胞之間的融合實驗，初步掌握細胞融合技術(shù)。教學重點PEG 誘導細胞融合教學難點主要教具設(shè)備材料(一) 材料:新鮮雞血，大鼠若干只。（二）器材: 離心機、顯微鏡、天平、水浴鍋、血球計數(shù)板、滴管、離心管、容量瓶、廣口瓶、細口瓶、燒杯、注射器、蓋玻片、載玻片。（三）試劑1. Alsever 溶液：葡萄糖2.05g，檸檬酸鈉0.80g，NaCl 0.42g，溶于100ml雙蒸

15、水中。2. 0.85生理鹽水。3. GKN 溶液：NaCl 8g，KCl 0.40g，Na2HP04·2H2O 1.77g，NaH2P04.H2O0.69g，葡萄糖2g，酚紅0.01g，溶于1000ml 雙蒸水中。4. 1%詹納斯綠B 溶液（原液）：稱取50mg 詹納斯綠B 溶于5ml Ringer 氏液，稍加微熱(3040)，使之溶解，用濾紙過濾后，即為1原液。5. 詹納斯綠B 溶液（應用液）：取1原液1ml 加入49ml Ringer 溶液, 混勻即可?，F(xiàn)用現(xiàn)配。6. 50PEG 溶液：稱取一定量PEG(WM：4000)放入燒杯，沸水浴加熱，使之熔化，待冷卻至50時，加入等體積預

16、熱至50的GKN 溶液，混勻，置37備用。7.Ringer 氏液 氯化鈉 0.85g 氯化鉀 0.25g 氯化鈣 0.03g 蒸餾水 100ml思考題簡述PAS法的反應原理，繪圖描述細胞內(nèi)多糖的分布。課后記教學內(nèi)容備注細胞融合(cellfusion)或細胞雜交(cellhybridization):是指真核細胞通過介導和培養(yǎng)，兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程。細胞融合包括質(zhì)膜的連接與融合，胞質(zhì)合并，細胞核、細胞器和酶等互成混合體系。細胞融合技術(shù)廣泛應用于細胞生物學、遺傳學、病毒學、腫瘤學的研究。例如，細胞周期調(diào)控的研究，基因互補分析、檢測病毒，胞對病毒敏感因素的分析、腫瘤細胞惡性分

17、析等等。單克隆抗體技術(shù)就是通過細胞融合技術(shù)發(fā)展起來的，對生命科學的研究及醫(yī)學方面的應用產(chǎn)生了重大影響。在人工條件下，只有在某些誘導物（如仙臺病毒、聚乙二醇等）的誘導下，使親本細胞膜發(fā)生一定的變化，才能使兩個或多個或更多的細胞融合。細胞融合過程，首先是在誘導物的作用下出現(xiàn)細胞凝集現(xiàn)象。然后，在細胞粘連處發(fā)生融合，而成為多核細胞。最后，經(jīng)有絲分裂，細胞核進行融合，遂形成新的雜種細胞。除了同種類細胞間可以融合,種間遠緣細胞也能融合,細胞與組織不同,不排斥異類、異種細胞,動物細胞如此，植物細胞也是如此?；蛐拖嗤募毎诤铣傻碾s交細胞稱為同核體(homokaryon)；來自不同基因型的雜交細胞則稱為異

18、核體(heterokaryon)。細胞融合后的多核細胞大多只能存活一段時間（約十幾日）就相繼死亡，而只有雙核的異核體才能存活下來。存活下來的異核體經(jīng)有絲分裂，染色體合并在一個細胞核內(nèi)，形成雜種細胞(hybrid cell)。誘導細胞融合的方法誘導細胞融合的方法誘導細胞融合的主要方法有： 1.病毒誘導融合：有許多種類的病毒能介導細胞融合，最常用的是滅活的仙臺病毒（HVJ），為RNA病毒。病毒誘導細胞融合的過程有：首先是細胞表面吸附許多病毒粒子，接著細胞發(fā)生凝集，幾分鐘至幾十分鐘后，病毒粒子從細胞表面消失，而就在這個部位鄰接的細胞的細胞膜融合，胞漿相互交流，最后形成融合細胞。病毒被膜中目前發(fā)現(xiàn)了兩

19、種糖蛋白。較大的一種具有粘附細胞和凝血的作用；較小的一種可介導病毒同宿主細胞融合,也可誘導細胞與細胞融合，稱為融合蛋白(fusionprotein)。人工利用病毒誘導細胞融合即是利用病毒的這一特性,使用時先用紫外線將病毒滅活,稀釋到一定濃度后加入到細胞懸液中誘導細胞融合。病毒介導細胞融合方法在使用前需要病毒的繁殖與滅活，如滅活不完全易對實驗人員造成傷害。2.化學融合劑誘導融合：化學融合劑主要有高級脂肪酸衍生物、脂質(zhì)體、鈣離子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白質(zhì)和多肽，其中最常用的是聚乙二醇（PEG）。PEG用于細胞融合至少有兩方面的作用：可促使細胞凝集；破壞互相接觸處的細胞膜的磷脂雙分子層，從而

20、使相互接觸的細胞膜之間發(fā)生融合，進而細胞質(zhì)溝通，形成一個大的雙核或多核融合細胞。3.電融合：是指細胞在電場中極化成偶極子，并沿著電力線排列成串，然后用高強度、短時程的電脈沖擊穿細胞膜而導致細胞融合。本實驗采用雞紅細胞和大鼠紅細胞為研究對象，在融合劑聚乙二醇(PEG)的作用下，促使雞-雞紅細胞、雞-鼠紅細胞等發(fā)生融合。實驗操作1. 紅細胞的制備(1) 雞血紅細胞的制備注射器內(nèi)先吸入 2ml Alsever 溶液，從雞翼下靜脈取2ml 雞血，注入離心管，再加入6ml Alsever 溶液，使之成為1：4 懸液。(2) 取lml 雞血懸液，加入4ml 0.85生理鹽水，混勻平衡后，800rmin離心

21、3min，棄去上清液，再按上述條件離心2 次。最后，棄去上清液，加GKN液4ml，離心1 次。(3) 棄去上清液，加GKN 液(體積比1：9)，制成10細胞懸液。(4) 大鼠血紅細胞的制備左手抓住大鼠，將大鼠頭部向下，右手持尖頭鑷子，輕輕將鑷子插入大鼠眼眶內(nèi)，然后將眼球向外拉出，此時流出的血液置于預先盛有10ml Alsever 溶液的燒杯中，操作順利的話，可以得到610ml 大鼠血。然后按上述雞血紅細胞制備的方法制成10細胞懸液。2. 細胞計數(shù)取以上懸液以血細胞計數(shù)器計數(shù)，若細胞密度過大，用GKN溶液稀釋至(34)×107 個ml。3. 溫育取以上細胞懸液 lml 于離心管，放入3

22、7(39左右更佳)水浴鍋中預熱。同時將50PEG 液放入水浴鍋中預熱。4. 融合（1）待溫度恒定后，在lml 細胞懸液中慢慢逐滴加入0.5ml 50PEG 溶液(慢慢沿離心管壁流下融合劑)，且邊加邊搖勻，然后放入水浴鍋中。（2）細胞融合一段時間(2030min)后，加入GKN 溶液至8ml，靜止于水浴鍋中20 min 左右。（3）取出離心管，1500rpm/min的轉(zhuǎn)速離心5分鐘，使細胞完全沉降。棄去上清液，加GKN 溶液，再離心1 次。5. 染色棄去上清液，加入少量 GKN 溶液，混勻，取少量懸液于載玻片上，加入Janus green 染液小半滴，用牙簽攪勻，3min 后蓋上蓋玻片，觀察細胞

23、融合情況。6.實驗設(shè)計實驗共分為三種融合方式進行，即雞紅細胞雞紅細胞、大鼠紅細胞大鼠紅細胞、雞紅細胞大鼠紅細胞融合，每位同學可選12 融合方式進行實驗。實驗步驟1 實驗時取0.2ml雞血保存液于EP管中。1500rpm離心10min 棄去上清，可見血細胞沉淀。2.用手輕彈管底，使沉淀松散，加入無血清1640培養(yǎng)液0.2ml制成懸液。然后放入38水浴中預熱10min。3.吸取預熱在38水浴鍋中的50%PEG 0.2ml在38水浴鍋中于1min內(nèi)沿離心管壁逐滴加入離心管中，邊加邊搖動離心管，使之與細胞混勻，38水浴中保溫。4.保溫1520min 后輕輕混勻。取細胞液一滴制成臨時制片，并加入少量Gi

24、emsa染色，用牙簽混勻，3min后，顯微鏡下觀察細胞融合情況。（注意：1.細胞液不能多2.顯微鏡觀察只用40×觀察）結(jié)果1. 在顯微鏡下，觀察細胞融合情況，計算融合率。2. 融合率=視野內(nèi)發(fā)生融合的細胞核總數(shù)視野內(nèi)所有細胞核總數(shù)×100注意事項1影響細胞融合的因素很多，其中對PEG要求更嚴格。實驗時最好選擇分子量在15006000（視細胞種類不同來定，也可參考文獻）；PEG 的濃度以50%為好。2. 細胞融合對溫度很敏感，過高過低的溫度均不利于融合。實驗最佳溫度應控制在3739范圍內(nèi)。3. PH 也是影響細胞融合成功與否的關(guān)鍵因素之一。所配的試劑溶液PH 值應控制在7.0

25、7.2。4. 為了便于觀察到細胞融合的形態(tài)，需要對細胞進行染色。除Janus green染液外，也可選擇HE 染色或姬姆薩染液。細胞生物學實驗授課教案課程細胞生物學實驗班級11級3、4、5班學期2012-2013-2課時2教師何飛上課日期課程類型實 驗課程名稱（章、節(jié)）細胞生物學實驗實驗六 動物細胞培養(yǎng)教學目的、要求熟練掌握細胞的傳代培養(yǎng)法。教學重點教學難點主要教具設(shè)備材料藥品：培養(yǎng)基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清或胎牛血清，0.25胰蛋白酶，Hanks液。儀器：C02培養(yǎng)箱，倒置：顯微鏡，超凈臺。思考題課后記教學內(nèi)容備注實驗原理：傳代培養(yǎng)是組織培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一。也是幾乎所有細胞

26、生物學實驗的基礎(chǔ)。當細胞在培養(yǎng)瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶，細胞才能繼續(xù)生長。這一過程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細胞供實驗所需。傳代要在嚴格的無菌條件下進行，每一步都需要認真仔細的無菌操作。【實驗步驟】1人無菌室之前用肥皂洗手，用75酒精擦拭消毒雙手。2倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37下預熱。 3超凈臺臺面應整潔，用0.1新潔爾滅溶液擦凈。 4打開超凈臺的紫外燈照射臺面20 min左右，關(guān)閉超凈臺的紫外燈，打開抽風機清潔空氣，除去臭氧。5點燃酒精燈；取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮頭；過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi)。 6

27、將培養(yǎng)用液瓶口用75酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。7倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用23 mL Hanks液洗去殘留的舊培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下。8每個大培養(yǎng)瓶加入1 mL胰酶，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察，當細胞收回突起變圓時立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。9加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(710 mL大瓶，35 mL小瓶)制成細胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn)，以利于CO2氣體的進入，將培養(yǎng)瓶放回CO2

28、培養(yǎng)箱。 10對懸浮培養(yǎng)細胞，步驟7-9不做?？蓪⒓毎麘乙哼M行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。 細胞生物學實驗授課教案課程細胞生物學實驗班級11級3、4、5班學期2012-2013-2課時2教師何飛上課日期課程類型實 驗課程名稱（章、節(jié)）細胞生物學實驗實驗七 細胞膜通透性的觀察和細胞活力測定教學目的、要求1、觀察紅細胞的溶血現(xiàn)象；2、掌握細胞膜的選擇通透性原理。3、學習臺盼藍排斥實驗的原理和方法教學重點臺盼藍排斥實驗的原理和方法教學難點主要教具設(shè)備材料器材：試管，試管架試劑：血紅細胞、0.32M葡萄糖、0.17M硝酸銀、0.32M甘油、0.32M硫酸鈉、0.32M乙醇、0.17M草酸胺、0.4%臺盼藍染液思考題課后記教學內(nèi)容備注一、1.觀察 10%的血紅細胞懸液，可見該懸液為一種不透明的紅色液體2.觀察溶血現(xiàn)象 取一支試管，加入0.4ml血紅細胞懸液，再加入4ml蒸餾水，混勻后注意觀察溶液顏色的變化，可見溶液由不透明的紅色變成透明的紅色液體（可將試管貼靠在書上，隔著試管看書中的字，如發(fā)現(xiàn)溶血則文字可被看清）。3.觀察血紅細胞對不同物質(zhì)的通透性二、1. 將待染色細胞稀釋至所需濃度。（方法及濃度范圍與細胞計數(shù)相同） 2. 每0.1ml細胞懸液約加新鮮配置的染液一小滴，室溫下染35min 。3. 染