202X版高考生物總復(fù)習(xí)考點(diǎn)加強(qiáng)課7課件中圖版

1、重點(diǎn)題型重點(diǎn)題型1目標(biāo)微生物的篩選與鑒定目標(biāo)微生物的篩選與鑒定1.分離微生物的原理與措施分離微生物的原理與措施(1)原理：自然環(huán)境中的微生物是混雜在一起的，因此分離獲得純培養(yǎng)物應(yīng)首先采用原理：自然環(huán)境中的微生物是混雜在一起的，因此分離獲得純培養(yǎng)物應(yīng)首先采用的方法是將單個(gè)的微生物與其他微生物分離，再給該微生物提供合適的營(yíng)養(yǎng)和條件的方法是將單個(gè)的微生物與其他微生物分離，再給該微生物提供合適的營(yíng)養(yǎng)和條件，使其生長(zhǎng)成為可見的群體。，使其生長(zhǎng)成為可見的群體。(2)常用措施常用措施接種過程中盡量使微生物分散開來，如平板劃線法、稀釋涂布平板法。接種過程中盡量使微生物分散開來，如平板劃線法、稀釋涂布平板法。運(yùn)

2、用選擇培養(yǎng)基的作用特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中添加某種特定的物質(zhì)，抑制不需要的微運(yùn)用選擇培養(yǎng)基的作用特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中添加某種特定的物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需微生物的生長(zhǎng)。生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需微生物的生長(zhǎng)。2.選擇培養(yǎng)基四種常見制備方法或?qū)嵗x擇培養(yǎng)基四種常見制備方法或?qū)嵗纠C】【例證】 (2017全國(guó)卷全國(guó)卷，37)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和和NH3，供植物吸收，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}：和利用?；卮鹣铝袉栴}：(1)有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生。能 分 解 尿 素 的 細(xì) 菌

3、 不 能 以 尿 素 的 分 解 產(chǎn) 物能 分 解 尿 素 的 細(xì) 菌 不 能 以 尿 素 的 分 解 產(chǎn) 物 C O2作 為 碳 源 ， 原 因 是作 為 碳 源 ， 原 因 是_，但 可 用 葡 萄 糖 作 為 碳 源 ， 進(jìn) 入 細(xì) 菌 體 內(nèi) 的 葡 萄 糖 的 主 要 作 用 是但 可 用 葡 萄 糖 作 為 碳 源 ， 進(jìn) 入 細(xì) 菌 體 內(nèi) 的 葡 萄 糖 的 主 要 作 用 是_(答出兩點(diǎn)即可答出兩點(diǎn)即可)。(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇(填填“尿素尿素”“”“NH4NO3”或或“尿素尿素NH4NO3”)作

4、為氮源，不選擇其他兩組的原因是作為氮源，不選擇其他兩組的原因是_。(3)用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和和Na2HPO4，其作用有，其作用有_(答出兩點(diǎn)即可答出兩點(diǎn)即可)。 解析解析(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。能分解尿素的只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。能分解尿素的細(xì)菌是一種分解者，屬于異養(yǎng)型生物，不能以尿素的分解產(chǎn)物細(xì)菌是一種分解者，屬于異養(yǎng)型生物，不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源。能分作為碳源。能分解尿素的細(xì)菌可以以葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是：一方解尿素的細(xì)菌可以以葡萄糖

5、作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是：一方面可氧化分解為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，另一方面其代謝中間產(chǎn)物可為多種有機(jī)物面可氧化分解為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，另一方面其代謝中間產(chǎn)物可為多種有機(jī)物的合成提供原料。的合成提供原料。(2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇以尿素作為唯一氮源的選為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，而其他兩組都含有含氮物質(zhì)擇培養(yǎng)基，而其他兩組都含有含氮物質(zhì)NH4NO3，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用的細(xì)菌都能利用NH4NO3不能起到篩選作用。不能起到篩選作用。 (3)用

6、來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和和Na2HPO4，其作用：，其作用：KH2PO4和和Na2HPO4構(gòu)成緩沖液，可維持培養(yǎng)基的構(gòu)成緩沖液，可維持培養(yǎng)基的pH相對(duì)穩(wěn)定；相對(duì)穩(wěn)定；KH2PO4和和Na2HPO4能為微生能為微生物生長(zhǎng)提供無機(jī)鹽離子。物生長(zhǎng)提供無機(jī)鹽離子。 答案答案(1)脲酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用脲酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來合成有機(jī)物為細(xì)來合成有機(jī)物為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料胞生命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料(2)尿素其他兩組都含有尿素其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細(xì)

7、菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用，能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3，不能起，不能起到篩選作用到篩選作用(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無機(jī)鹽離子，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過程中為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無機(jī)鹽離子，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過程中pH穩(wěn)定穩(wěn)定 (2019天津市調(diào)研天津市調(diào)研)下面是篩選抗鏈霉素大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)步驟及相關(guān)圖解。下面是篩選抗鏈霉素大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)步驟及相關(guān)圖解。實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)步驟：把大量對(duì)鏈霉素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培養(yǎng)基把大量對(duì)鏈霉素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培養(yǎng)基1的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。待其長(zhǎng)出密集的小菌落后，用影印法接種到不含鏈霉素的培養(yǎng)基待

8、其長(zhǎng)出密集的小菌落后，用影印法接種到不含鏈霉素的培養(yǎng)基2上，隨即再影印上，隨即再影印到含有鏈霉素的培養(yǎng)基到含有鏈霉素的培養(yǎng)基3上，進(jìn)行培養(yǎng)。上，進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)基在培養(yǎng)基3上出現(xiàn)了個(gè)別抗鏈霉素的菌落，將其挑選出。上出現(xiàn)了個(gè)別抗鏈霉素的菌落，將其挑選出。請(qǐng)回答：請(qǐng)回答：(1)配制培養(yǎng)基時(shí)除了滿足基本的營(yíng)養(yǎng)條件外，還需滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、配制培養(yǎng)基時(shí)除了滿足基本的營(yíng)養(yǎng)條件外，還需滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、的要求。的要求。(2)從功能上看，含有鏈霉素的培養(yǎng)基屬于從功能上看，含有鏈霉素的培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。若在培養(yǎng)基中加入伊紅和美培養(yǎng)基。若在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)，則培養(yǎng)皿中長(zhǎng)出的菌落顏色

9、為藍(lán)，則培養(yǎng)皿中長(zhǎng)出的菌落顏色為。由圖可知，。由圖可知，1號(hào)培養(yǎng)基接種的方法為號(hào)培養(yǎng)基接種的方法為_。 (3)對(duì)對(duì)2和和3進(jìn)行比較，在進(jìn)行比較，在2上找到與上找到與3上相應(yīng)的菌落，挑取其中一個(gè)菌落接種到上相應(yīng)的菌落，挑取其中一個(gè)菌落接種到 (填填“含鏈霉素含鏈霉素”或或“不含鏈霉素不含鏈霉素”)的培養(yǎng)基上，如果有較多的菌落出現(xiàn)，則說明該抗性的培養(yǎng)基上，如果有較多的菌落出現(xiàn)，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之(填填“前前”或或“后后”)。(4)3中的菌落比中的菌落比1、2中的菌落少很多，這說明了基因突變具有中的菌落少很多，這說明了基因突變具有的特點(diǎn)。的特點(diǎn)。

10、 解析解析(1)配制培養(yǎng)基時(shí)在提供幾種基本營(yíng)養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，還需滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)配制培養(yǎng)基時(shí)在提供幾種基本營(yíng)養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，還需滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。(2)鏈霉素是抗生素，對(duì)大腸桿菌具有選擇作用鏈霉素是抗生素，對(duì)大腸桿菌具有選擇作用。在伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基上。在伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基上.大腸桿菌菌落顏色為黑色。由題圖可知，大腸桿菌菌落顏色為黑色。由題圖可知，1號(hào)培養(yǎng)基接種號(hào)培養(yǎng)基接種的方法為稀釋涂布平板法。的方法為稀釋涂布平板法。(3)培養(yǎng)基培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基和培養(yǎng)基3上相同的菌落，是具有相同性狀的上相同的菌落，是具有相同性狀的大腸桿菌形成的，將培

11、養(yǎng)基大腸桿菌形成的，將培養(yǎng)基2中一個(gè)相應(yīng)菌落接種到含鏈霉素的培養(yǎng)基上，若出現(xiàn)較中一個(gè)相應(yīng)菌落接種到含鏈霉素的培養(yǎng)基上，若出現(xiàn)較多的菌落，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之前。多的菌落，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之前。(4)抗鏈霉素性狀是抗鏈霉素性狀是大腸桿菌基因突變后獲得的性狀大腸桿菌基因突變后獲得的性狀.3號(hào)培養(yǎng)皿中的菌落比號(hào)培養(yǎng)皿中的菌落比1號(hào)、號(hào)、2號(hào)中的菌落少很多，號(hào)中的菌落少很多，這說明了基因突變頻率很低。這說明了基因突變頻率很低。 答案答案(1)pH氧氣氧氣 (2)選擇黑色稀釋涂布平板法選擇黑色稀釋涂布平板法(3)含鏈霉素前含鏈霉素前 (4)頻率低頻率低/低頻

12、性低頻性影印法接種的具體過程是：將待測(cè)的濃縮菌懸液涂在合適的平板上，等其長(zhǎng)好影印法接種的具體過程是：將待測(cè)的濃縮菌懸液涂在合適的平板上，等其長(zhǎng)好后作為母平板后作為母平板(每個(gè)平板上的菌落控制在每個(gè)平板上的菌落控制在30300個(gè)個(gè))；用一小塊滅菌的絲絨固定；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構(gòu)成印章在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構(gòu)成印章(即接種工具即接種工具)；然后把長(zhǎng)有菌落的；然后把長(zhǎng)有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基的平板上輕輕印一下，經(jīng)培養(yǎng)后，選擇培養(yǎng)基平板上

13、長(zhǎng)出的菌落與母平板上的的平板上輕輕印一下，經(jīng)培養(yǎng)后，選擇培養(yǎng)基平板上長(zhǎng)出的菌落與母平板上的菌落位置對(duì)應(yīng)，比較影印平板與母平板上菌落生長(zhǎng)情況，即可從相應(yīng)位置的母菌落位置對(duì)應(yīng)，比較影印平板與母平板上菌落生長(zhǎng)情況，即可從相應(yīng)位置的母平板上選出待測(cè)的突變型菌落。影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自平板上選出待測(cè)的突變型菌落。影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發(fā)的、與相應(yīng)的環(huán)境因素?zé)o關(guān)而設(shè)計(jì)的接種方法，目前已廣泛應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)缺陷發(fā)的、與相應(yīng)的環(huán)境因素?zé)o關(guān)而設(shè)計(jì)的接種方法，目前已廣泛應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)缺陷型微生物的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中。型微生物的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中。 重點(diǎn)題型

14、重點(diǎn)題型2微生物的分離與計(jì)數(shù)微生物的分離與計(jì)數(shù)微生物計(jì)數(shù)的方法專項(xiàng)歸納微生物計(jì)數(shù)的方法專項(xiàng)歸納1.間接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法(也叫活菌計(jì)數(shù)法也叫活菌計(jì)數(shù)法)常用的是稀釋涂布平板法。常用的是稀釋涂布平板法。(1)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少個(gè)活菌。個(gè)活菌。(2)操作：操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與

15、準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀倍稀釋，選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取釋，選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布于整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)，計(jì)算菌落數(shù)。為使結(jié)涂布器將菌液涂布于整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)，計(jì)算菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度的樣液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布、培果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度的樣液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)。養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)。 為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30300個(gè)的平

16、板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)個(gè)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。計(jì)算公式：每克樣品中的細(xì)菌數(shù)計(jì)算公式：每克樣品中的細(xì)菌數(shù)(C/V)M，其中，其中C代表某一稀釋度下平板上生代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。代表稀釋倍數(shù)。 提醒提醒此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌

17、落。一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(1)原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量，但不能區(qū)分細(xì)菌的死活。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特生物的數(shù)量，但不能區(qū)分細(xì)菌的死活。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特定面積定面積(1 mm2)和高和高(0.1 mm)的計(jì)數(shù)室，在的計(jì)數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成的面積里又被劃分成25個(gè)個(gè)(或或16個(gè)個(gè))中中格，每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成格，每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成16個(gè)個(gè)(或或25個(gè)個(gè))小格，但計(jì)數(shù)室

18、都是由小格，但計(jì)數(shù)室都是由400個(gè)小格組成的。個(gè)小格組成的。(2)操作：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，稍操作：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，稍等片刻，待細(xì)菌全部沉降到計(jì)數(shù)室底部再在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)等片刻，待細(xì)菌全部沉降到計(jì)數(shù)室底部再在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)45個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。(3)計(jì)算公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)每小格平均細(xì)菌數(shù)計(jì)算公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)每小格平均細(xì)菌數(shù)40010 00

19、0稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)。 3.濾膜法濾膜法以測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例，將已知體積的水過濾后，將濾膜放于伊紅以測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例，將已知體積的水過濾后，將濾膜放于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，可根據(jù)培養(yǎng)基美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量?！纠C】【例證】 (2018經(jīng)典高考經(jīng)典高考)酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培

20、養(yǎng)，這樣既可減少污染又的來源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。如可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。如圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列問題：圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列問題：(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的養(yǎng)基的，及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行，及時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行滅菌。滅菌。(2)取步驟取步驟中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無菌培養(yǎng)皿中，在步驟中不同

21、梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無菌培養(yǎng)皿中，在步驟中將溫度中將溫度約約(在在25 、50 或或80 中選擇中選擇)的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。培養(yǎng)。 (3)挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟挑取分離平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有。a.為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌b.劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落c.挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取

22、多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量d.可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株(4)步驟步驟中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和供供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1 000倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，用，用2516型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上色細(xì)胞的個(gè)數(shù)色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于應(yīng)不少于，才能達(dá)到每毫升，才能達(dá)到每毫升3109

23、個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。 解析解析(1)配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱取各組分，之后溶解定容，再調(diào)節(jié)配制培養(yǎng)基時(shí)，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱取各組分，之后溶解定容，再調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的pH，一般情況下，采用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。，一般情況下，采用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。(2)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌后，需將溫度降至行高壓蒸汽滅菌后，需將溫度降至50 左右后倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。左右后倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。(3)在對(duì)酵母菌進(jìn)行劃線純化時(shí)，為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅在對(duì)酵母菌進(jìn)行劃線純化時(shí)，為保證無菌操作，接種針、接

24、種環(huán)使用前都必須滅菌；且在劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落；本實(shí)驗(yàn)是為了獲菌；且在劃線時(shí)應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落；本實(shí)驗(yàn)是為了獲得能以工業(yè)廢甲醇作為碳源的酵母，故在實(shí)驗(yàn)過程中可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲得能以工業(yè)廢甲醇作為碳源的酵母，故在實(shí)驗(yàn)過程中可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇耐受株。醇的濃度，獲得甲醇耐受株。(4)酵母菌是兼性厭氧型真菌，有氧條件下大量繁殖。酵母菌是兼性厭氧型真菌，有氧條件下大量繁殖。酵母菌擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣供應(yīng)。酵母菌擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，需保證充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣供應(yīng)。“用等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色用等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色”，即計(jì)數(shù)

25、室中培養(yǎng)液體積實(shí)際只有，即計(jì)數(shù)室中培養(yǎng)液體積實(shí)際只有0.120.05 mm3，設(shè)，設(shè)5個(gè)中方格中無色個(gè)中方格中無色(活細(xì)胞不活細(xì)胞不被臺(tái)盼藍(lán)染色被臺(tái)盼藍(lán)染色)的細(xì)胞數(shù)目為的細(xì)胞數(shù)目為x個(gè)，則個(gè)，則3109x/5251 0001 0000.05，解得，解得x30。 答案答案(1)pH高壓蒸汽高壓蒸汽(濕熱濕熱)(2)50 (3)a、b、d(4)氧氣無氧氣無30 1.(2018山東煙臺(tái)一模山東煙臺(tái)一模)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離和培養(yǎng)等工作。回答下列問題：細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離和培養(yǎng)

26、等工作?；卮鹣铝袉栴}：(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中細(xì)菌含量。為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中細(xì)菌含量。為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，合格，可在涂布接種前，；然后，將；然后，將1 mL水樣稀釋水樣稀釋1 000倍，倍，在在3個(gè)平板上用涂布法分別接入個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為別為39、38和和37，據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為，據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過該小組采用平板劃線法分

27、離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過滅菌，滅菌，為了將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落，在第二次及以后的劃線時(shí)，一定要為了將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落，在第二次及以后的劃線時(shí)，一定要。示意圖。示意圖A和和B中，中，表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。通表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。通常，對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù)常，對(duì)獲得的純菌種可以依據(jù)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定和對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定和分類。分類。(3)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振

28、蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高接觸，提高的利用率。的利用率。解析解析(1)為了確定培養(yǎng)基的滅菌是否合格，可以隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)為了確定培養(yǎng)基的滅菌是否合格，可以隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落生成。由題意知一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落生成。由題意知1 mL水樣中的菌落數(shù)是水樣中的菌落數(shù)是(393837)30.11 0003.81

29、05，每升水樣中的活菌數(shù)為，每升水樣中的活菌數(shù)為3.81051033.8108。(2)接種環(huán)用灼燒法進(jìn)行滅菌。在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端接種環(huán)用灼燒法進(jìn)行滅菌。在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣做的目的是：通過劃線次數(shù)的增加，將聚集的菌體逐漸稀釋分散，開始劃線，這樣做的目的是：通過劃線次數(shù)的增加，將聚集的菌體逐漸稀釋分散，使每次劃線時(shí)菌體的數(shù)目逐漸減少，以便獲得由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的單個(gè)菌落。圖使每次劃線時(shí)菌體的數(shù)目逐漸減少，以便獲得由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的單個(gè)菌落。圖A是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果，圖是用平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果，圖B表示的是用稀釋涂布平板法接種培表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。可以依據(jù)菌落的形狀、大小等特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定和分類養(yǎng)后得到的結(jié)果?？梢砸罁?jù)菌落的形狀、大小等特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定和分類。(3)振蕩培養(yǎng)可以增加液體培養(yǎng)基的氧氣含量，促進(jìn)好氧型微生物的生長(zhǎng)；同時(shí)還振蕩培養(yǎng)可以增加液體培養(yǎng)基的氧氣含量，促進(jìn)好氧型微生物的生長(zhǎng)；同時(shí)還能使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。能使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。 答案答案(1)隨機(jī)取