葒葉心通軟膠囊對大鼠的長期毒性研究

1、葒葉心通軟膠囊對大鼠的長期毒性研究                    作者：何迅，李勇軍，周雯，王愛民，蘭燕宇，王永林【摘要】  目的： 觀察葒葉心通軟膠囊對大鼠的長期毒性。方法： 160只SD大鼠，隨機(jī)分為高、中、低劑量組及空白對照組，雌雄各半，每日灌胃1次，連續(xù)給藥26周,觀察大鼠的一般狀況、體重、攝食量和給藥13、26周及停藥后4周大鼠的血液學(xué)、血液生化學(xué)、凝血功能、臟器系數(shù)、解剖學(xué)及病

2、理組織學(xué)改變的情況。 結(jié)果： 葒葉心通軟膠囊高劑量組雌性大鼠給藥13周總膽紅素（TBIL）、給藥26周肌酐（CREA）和TBIL、給藥26周凝血酯原時(shí)間（PT）及高劑量組雄性大鼠給藥26周Cl-濃度與對照組比較稍有差異，停藥4周后即恢復(fù)正常，組織病檢查無異常。其余各劑量組各項(xiàng)指標(biāo)與對照組比較差異均無顯著性。結(jié)論： 葒葉心通軟膠囊在臨床劑量范圍內(nèi)毒性小，使用安全。 【關(guān)鍵詞】  毒性試驗(yàn)； 紅蓼； 大鼠，Sprague-Dawley; 葒葉心通軟膠囊； 長期毒性Abstract Objective: To study the long-term toxicity of Hongyexi

3、ntong soft capsules to rats.Methods： One hundred and sixty SD rats were randomly divided into four groups （40 in each group）, and orally given the medicine with doses of 50, 25, or 12.5 g/kg of crude drug, or with bean oil of 0.5CMC-Na （for control group） daily for 26 weeks.The physical status （body

4、 weight，growth rate and appetite）， hematological parameters, blood biochemistry, blood cotting, organ index, and tissue pathological changes of rats were checked in the 13th week,and 26th week of the administration and in four weeks after the stop of the administration. Results： All of the parameter

5、s tested did not differ from those of control group, except that blood level of total bilirubin （TBIL） of female rats in high dose group in the 13th week, blood creatinine level, blood TBIL level, and prothrombin time of male rats in high dose group in the 26th week were significantly higher than th

6、ose of control group （P<0.05）, and that blood Cl-level of male rats in high dose group in the 26th week was lower than that of control group （P<0.05）. All the differences disappeared in 4 weeks after the drug withdrawal. No tissue pathological change was found. Conclusion： Hongyexintong soft c

7、apsules are safe in its clinical use with the recommended dosages.Key words  toxicity tests; Polygonum orientale; rats,Sprague-Dawley; Hongyexintong soft capsules； long-term toxicity    冠心病心絞痛屬于中醫(yī)的胸痹心痛的范疇，為臨床常見病、多發(fā)病，主要病機(jī)為心脈痹阻，即心脈運(yùn)化失常，氣血運(yùn)行受阻，致使氣結(jié)血凝而發(fā)生胸悶、心痛等癥，故治宜活血化瘀、通脈止痛為主14。新藥葒葉心

8、通軟膠囊是由葒草、山楂葉等活血、散血、止痛為主的藥味組成，是根據(jù)民間驗(yàn)方，經(jīng)提取工藝精制而成的復(fù)方制劑，具有活血化瘀、通脈止痛的功能5,6。臨床擬用于冠心病心絞痛心血瘀阻證，癥見胸悶、胸部刺痛、固定不移、心悸不寧、唇舌暗紫、脈細(xì)澀等冠心病心絞痛類疾病。為觀察其長期用藥可能出現(xiàn)的慢性毒性反應(yīng)，2006年511月，根據(jù)中藥新藥長期毒性實(shí)驗(yàn)方法和指導(dǎo)原則，觀察了大鼠連續(xù)灌胃給藥26周及停藥恢復(fù)4周的毒性反應(yīng)情況，為臨床應(yīng)用葒葉心通軟膠囊的安全性提供理論依據(jù)。1  材料與方法1.1  藥物、動物、主要儀器和試劑葒葉心通軟膠囊，內(nèi)容物為棕褐色膏狀物，每粒重0.45 g（含生藥5 g）

9、，成人每日服用量為4.05 g（相當(dāng)于生藥45 g），即成人日用量為0.75 g生藥/kg。批號20040525，由貴州益佰制藥股份有限公司提供。級實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠160只（雌雄各半），體重7385 g，合格證號：SCXK（黔）2002-0001，由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。試驗(yàn)動物進(jìn)入清潔實(shí)驗(yàn)室后雌雄分籠，每籠5只，飼養(yǎng)1周，觀察動物活動、進(jìn)食、大小便均無異常后開始試驗(yàn)。動物室光照充足，通風(fēng)和空調(diào)設(shè)備良好，室溫1825 ，相對濕度50%70%，實(shí)驗(yàn)室按常規(guī)定期消毒。CELL-DYN1700全自動全血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（美國），ABBOTT-AEROSET 2000型全自動生化分析儀（美國），SYS

10、MEX CA7000全自動血凝儀（日本），奧林巴斯顯微鏡（日本），METTLERAE240型天平（日本）。CK檢測試劑盒，BUN檢測試劑盒，CREA檢測試劑盒，TG檢測試劑盒，CHOL檢測試劑盒，TBIL檢測試劑盒，ALP檢測試劑盒，均為上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)。1.3  觀察指標(biāo)及數(shù)據(jù)處理給藥期和恢復(fù)期每天均進(jìn)行詳細(xì)觀察，記錄試驗(yàn)動物的外觀體征和行為活動情況、精神狀況、進(jìn)食、大小便及口、鼻、眼異常物和被毛等情況有無異常。每周觀察1次體重和進(jìn)食量，并按體重變化調(diào)整給藥量。給藥13周、26周及停藥4周后處死動物取血，檢測血液學(xué)指標(biāo)RBC、HGB、HCT、RETIC、WBC、PL

11、T等，血液生化學(xué)指標(biāo)AST、ALT、ALP、-GT、BUN、CREA、TP、ALB、Glu、TBIL、CHOL、TG、CK、Na+、K+、Cl-濃度等，凝血指標(biāo)PT、APTT、TT等。試驗(yàn)動物處死后臟器系數(shù)，包括心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢、甲狀腺等臟器或組織，同時(shí)肉眼觀察各主要臟器的解剖學(xué)改變。取高劑量組和對照組動物的腦、脊髓、腦垂體、胸腺、甲狀腺、食管、唾液腺、胃、小腸、回腸、結(jié)腸、大腸、肝臟、胰腺、腎臟、腎上腺、脾臟、心臟、氣管、肺臟、主動脈、睪丸、附睪、卵巢、子宮、前列腺、膀胱、視神經(jīng)、骨髓、淋巴結(jié)等臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。1   &

12、#160;     上述指標(biāo)均用SPSS 13.0軟件進(jìn)行方差分析、非參數(shù)檢驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2  結(jié)果2.1  對動物一般情況的影響在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)未發(fā)現(xiàn)動物的行為活動、飲食、呼吸、大小便和被毛色澤等情況有任何異常，未見嘔吐、流涎、流淚、呼吸困難等癥狀，無一動物死亡。2.2  對動物體重、進(jìn)食量的影響各組動物給藥后，生長發(fā)育良好，體重增長，進(jìn)食量正常，與對照組比較差異無顯著性（P0.05）。見圖1圖4。2.3  對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響血液學(xué)檢查結(jié)果表明，給藥期及停藥期3個(gè)劑量組血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果與對照組比

13、較差異無顯著性（P>0.05）。2.4  對大鼠血液生化指標(biāo)的影響曲線血液生化指標(biāo)檢查結(jié)果表明，葒葉心通軟膠囊高劑量組給藥13周雌性大鼠TBIL，給藥26周CREA、TBIL，與對照組比較明顯降低（P<0.05）；雄性大鼠給藥26周Cl-濃度與對照組比較明顯增高（P<0.05）；其余各組各項(xiàng)指標(biāo)均未見異常，恢復(fù)期各項(xiàng)指標(biāo)均正常，與對照組相比較差異無顯著性（P>0.05）。2.5  對大鼠凝血系統(tǒng)的影響給藥期26周雌性高劑量組凝血指標(biāo)PT有所升高，對照組（9.69±0.74）s，高劑量組（11.06±1.28）s，與對照組比較有統(tǒng)計(jì)

14、學(xué)意義（P<0.05），恢復(fù)期對照組（9.92±1.45）s、高劑量組（9.54±0.76）s，與對照組相比較差異無顯著性（P>0.05），其余各項(xiàng)指標(biāo)均未見異常。2.6  對大鼠臟器系數(shù)和病理組織學(xué)的影響各給藥組臟器系數(shù)與對照組比較差異無顯著性（P>0.05）。各主要臟器表面光滑，無粘連，色澤正常，未見充血、腫脹、出血、壞死，胃腸無擴(kuò)張，腸壁無水腫、出血、潰瘍等異常現(xiàn)象。病理組織學(xué)檢查各劑量組組織結(jié)構(gòu)與對照組比較均無退變、壞死、炎癥反應(yīng)或異常增生變化，停藥4周的各項(xiàng)檢查也未見遲發(fā)性毒性反應(yīng)。3  討論3.1  葒葉心通軟膠囊

15、的成人推薦用量為4.05 g/d（即生藥0.75 g/kg）。急性毒性試驗(yàn)表明，本品毒性較低（小鼠的最大給生藥量為206.4 g/kg，相當(dāng)于臨床日用量的275倍；大鼠的最大給生藥量為103.2 g/kg，相當(dāng)于臨床日用量的138倍），根據(jù)中藥新藥長期毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則，長期毒性的高劑量組應(yīng)不低于推薦臨床人用有效劑量的50倍，中劑量組不低于藥效學(xué)的高劑量組，故長期毒性的高劑量組設(shè)計(jì)為生藥50.0 g/kg，相當(dāng)于臨床用量的66.6倍），中劑量為高劑量的1/2倍（相當(dāng)于臨床用量的33.3倍），低劑量為高劑量的1/4倍（相當(dāng)于臨床用量的16.6倍）。3.2  葒葉心通軟膠囊來源于貴州黔

16、東南州的民間驗(yàn)方，用于胸痛、胸悶、氣短、中風(fēng)偏癱（嘴角歪斜）、風(fēng)濕疼痛等疾病的。對本方的臨床應(yīng)用、組方及藥材資源進(jìn)行了長期大量的調(diào)查研究，并在此基礎(chǔ)上采用提取分離技術(shù)，將其制備成軟膠囊制劑。本實(shí)驗(yàn)以3個(gè)劑量連續(xù)給大鼠灌胃26周，進(jìn)行長期毒性試驗(yàn)。結(jié)果表明本品各劑量組動物生長狀態(tài)良好，體重增長，攝食量正常，血液學(xué)指標(biāo)無異常反應(yīng)，血液生化和凝血指標(biāo)變化均在正常值范圍內(nèi)，體內(nèi)各主要臟器未見藥物引起的病改變，恢復(fù)期各項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)正常，未見遲發(fā)性毒性反應(yīng)。綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示葒葉心通軟膠囊在臨床劑量范圍內(nèi)毒性小，使用安全?！尽?#160; 1王建湘, 王行寬.中醫(yī)藥治療冠心病心絞痛的研究進(jìn)展J.湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 1999（9）:14-17. 2羅雪挺, 胡有志, 馮德勛.麝香保心丸治療冠心病心絞痛J.血栓與止血學(xué), 2007（5）:212-215.3牟艷玲,