降脂寧肝膠囊對D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損傷的保護作用

1、降脂寧肝膠囊對D-氨基半乳糖致小鼠急性肝損傷的保護作用 作者：薛川松 楊欽河 劉淑娟 楊環(huán)文 張玉佩 謝芳 歐健【摘要】 目的觀察降脂寧肝膠囊對D-氨基半乳糖(D-Gal)致小鼠急性肝損傷的保護作用。方法將60只NIH小鼠隨機分為6組：模型組，正常對照組，聯(lián)苯雙酯陽性對照組，降脂寧肝膠囊高、中、低劑量組。用藥組小鼠分別灌胃給藥, 而正常對照組和模型組灌服等體積生理鹽水20 ml/(kgd），連續(xù)6 d。于末次藥1 h后，除正常對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射10D-Gal生理鹽水溶液(1 000 mg/kg)，24 h后采血和取肝組織，檢測血清ALT、AST及肝臟MDA水平，并觀察其肝組織病理

2、變化。結(jié)果降脂寧肝膠囊高、中劑量組與模型組比較，均能顯著降低血清ALT、AST及肝臟MDA水平（P0.05，P0.01或P0.001），明顯地改善肝臟的病理變化,并呈明顯的劑量-效應關(guān)系。結(jié)論降脂寧肝膠囊對急性肝損傷模型小鼠有顯著的護肝作用。 【關(guān)鍵詞】 降脂寧肝膠囊； D-氨基半乳糖； 急性肝損傷； 小鼠Abstract：ObjectiveTo observe the effect of Jiangzhi Ninggan capsule on acute hepatic injury induced by D-galactosamine(D-Gal) in mice. MethodsSixt

3、y mice were divided into six groups at random: model group, control group, Bifendate group (positive control group), Jiangzhi Ninggan Capsule groups (high dose,middle dose,low dose). The mice in treatment groups were administered medicine respectively via gavage, while the others in control and mode

4、l groups were treated with the same dose of nomal saline. After six days, all of the mice except those in the control group were treated with intraperitoneal injection of 10% D-Gal (1 000 mg/kg).twenty-four hour later, the mice were killed and the blood sample and liver tissue were taken. Liver path

5、ological changes were observed and the activities of serum ALT，AST, and the content of liver MDA were detected. ResultsCompared with the model group, the effect on levels of ALT，AST in blood and the content of MDA in liver tissue of Jiangzhi Ninggan Capsule groups(high dose、middle dose) were reduced

6、 significantly (respectively, P0.05; P0.01; P0.001), and the liver pathological changes were lightened obviously in dose.ConclusionJiangzhi Ninggan capsule has protective acute hepatic injury induced by D-galactosamine.Key words：Jiangzhi Ninggan capsule; D-galactosamine; Acute liver injury; Mice 降脂寧

7、肝膠囊由澤瀉、蒼術(shù)、三七、厚樸、山楂、柴胡、茵陳等中藥組成，具有清熱利濕、疏肝理氣、活血化淤等功效，用于各種原因引起的脂肪肝，臨床療效確切1。為了進一步探討該方藥的作用機制，本研究觀察了降脂寧肝膠囊對D-氨基半乳糖所致急性肝損傷模型小鼠肝功能及肝臟MDA水平和病理變化的影響。1 器材1.1 動物 NIH小鼠60只，體重1822 g，雌雄各半，由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，實驗動物合格證號：廣東省技術(shù)委員會粵檢證字2001A008；動物飼養(yǎng)于廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心，實驗動物環(huán)境設(shè)施合格證號：廣東省科學技術(shù)委員會粵檢證字2001C003。1.2 藥品 降脂寧肝膠囊浸膏粉，由廣州中醫(yī)藥大學新

8、藥開發(fā)研究中心提供，批號：20010611，臨用前用乳缽研磨，以蒸餾水按所需濃度配制成水溶液。冰箱保存，用時提前取出，恢復至接近室溫時，搖勻，備用。聯(lián)苯雙酯滴丸，北京協(xié)和藥廠產(chǎn)品，批號：20010613，配制成阿拉伯膠混懸液備用。D-氨基半乳糖，上海試劑二廠產(chǎn)品，批號：20011007。臨用前配成10% DGal生理鹽水溶液。1.3 試劑 丙二醛（MDA）試劑盒，批號：20020828，南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；ALT試劑盒，批號：20011201；AST試劑盒，批號：20011101，均由衛(wèi)生部臨床診斷試劑實驗中心（上海）提供。1.4 儀器 752紫外-可見光分光光度計。2 方法1 2.2

9、 急性肝損傷模型的復制 除正常對照組外，其余各組于第6天給藥后1 h，每只小鼠均經(jīng)腹腔注射 10D-Gal生理鹽水溶液（1 000 mg/kg ），正常對照組腹腔注射等容積生理鹽水。禁食不禁水, 24h后采集血和肝臟標本，作相關(guān)檢測。2.3 動物處理及樣品檢測 腹腔注射 D-Gal后24 h，首先眼眶取血，離心分離血清，測定ALT，AST含量；處死小鼠取部分肝組織制勻漿，測MDA含量，另取部分肝臟作病理觀察。2.4 統(tǒng)計學處理方法 計量資料用s表示， 各組間比較采用單因素方差分析，P0.05為差異有顯著性意義。采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行分析。3 結(jié)果 降脂寧肝膠囊不同劑量對小鼠D-Gal

10、肝損傷模型肝臟病理變化有明顯的改善作用，對肝臟氣球樣變、嗜酸性變、嗜酸性小體的出現(xiàn)均有較好抑制作用，能明顯減輕肝臟壞死等級和炎癥程度，其中高劑量組作用與陽性對照藥的作用接近。與正常對照組相比，模型組小鼠血中ALT，AST水平及肝臟MDA水平均顯著升高（P0.001）。降脂寧肝膠囊不同劑量組與模型組比較，高、中劑量組均能顯著降低上述有關(guān)指標（P0.05，P0.01或P0.001），不同劑量組之間呈較好的劑量-效應關(guān)系，高劑量組的上述3項指標與聯(lián)苯雙酯組比較無統(tǒng)計學意義（P0.05）。見表1。表1 降脂寧肝膠囊對小鼠血清ALT、AST及肝臟MDA的影響（略）與正常組比較，#P0.001；與模型組比

11、較，*P0.05，*P0.01，*P0.001；與聯(lián)苯雙酯組比較，P0.05， P0.01；n=104 討論 血清轉(zhuǎn)氨酶是肝細胞損害的敏感指標，其中最常用的是ALT與AST。MDA是自由基攻擊生物膜引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應產(chǎn)物，組織中的含量可反映脂質(zhì)過氧化程度，間接地反映出細胞受自由基攻擊和損傷的程度3。本實驗模型組小鼠血清ALT與AST水平、肝臟MDA含量均顯著高于正常對照組（P0.001），表明D-Gal破壞了肝臟的抗氧化系統(tǒng)，對肝細胞造成了損害。降脂寧肝膠囊本為脂肪肝而設(shè)，因其具有疏肝理氣，清熱利濕，活血化淤等功效，臨床用于治療脂肪肝療效肯定。而肝損傷作為各種肝臟病最終的病理演變，必然有其相

12、應的病基礎(chǔ)，這即是中醫(yī)的“異病同治”治法能夠起效的原因。我們的實驗研究表明，在急性肝損傷模型小鼠肝臟中MDA的含量顯著增高。王軍等4的研究表明，高脂飲食可以增加大鼠肝臟內(nèi)MDA的含量，周俊英等5 則在對酒精性肝病發(fā)病機理研究時則發(fā)現(xiàn)普弗細胞(KC) 熒光標記率與肝勻漿MDA 呈正相關(guān)?？梢姛o論是酒精性脂肪肝或是非酒精性脂肪肝，MDA在肝臟中均有不同程度的升高，與我們的急性肝損傷模型的實驗結(jié)果相一致。降脂寧肝膠囊能夠顯著降低急性肝損傷模型小鼠肝臟MDA含量及血清ALT，AST水平，改善肝組織病理變化，可能與其能夠增加肝細胞抗自由基攻擊的能力，穩(wěn)定細胞膜結(jié)構(gòu)，從而起到保護肝臟的作用有關(guān)，這也可能是降脂寧肝膠囊能夠用于治療各種脂肪肝，并取得較好臨床療效的藥理學基礎(chǔ)，其詳細的作用機制尚需作進一步的研究和探討?！尽?1 楊欽河,陳孝銀,徐云生. 降脂寧肝膠囊治療脂肪肝53例J. 新中醫(yī),2003, 35(4):53.2 陳 奇.中藥藥理研究方法學M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994:493.3 Larsen M, Webb G，Kennington S, et al. Mannitol in cardioplegia as an oxygen free radical scanveng