實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌的芽孢染色法

1、實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌的芽孢染色法實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌的芽孢染色法1一、實(shí)驗(yàn)的目的要求一、實(shí)驗(yàn)的目的要求2v學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法v初步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征初步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理芽孢又芽孢又稱(chēng)內(nèi)生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形狀、芽孢在孢囊的位置、稱(chēng)內(nèi)生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形狀、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。芽孢壁芽孢壁厚，透性低，不易著色，一般染色法只能使菌體著色而厚，透性低，不易著色，一般染色法只能使菌體著色而芽孢不芽孢不著色（著色（芽孢呈芽孢呈無(wú)色透明狀），而一旦染上色后又難以脫色。

2、無(wú)色透明狀），而一旦染上色后又難以脫色。芽孢染色法芽孢染色法根據(jù)根據(jù)芽孢特點(diǎn)芽孢特點(diǎn)設(shè)計(jì)，除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加設(shè)計(jì)，除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱，以促進(jìn)熱，以促進(jìn)芽孢著色芽孢著色。當(dāng)。當(dāng)染芽孢時(shí)染芽孢時(shí)，菌體也會(huì)著色，然后水洗，菌體也會(huì)著色，然后水洗，芽孢，芽孢染上染上的顏色難以滲出，而菌體會(huì)脫色。然后用對(duì)比度強(qiáng)的染料對(duì)菌體的顏色難以滲出，而菌體會(huì)脫色。然后用對(duì)比度強(qiáng)的染料對(duì)菌體復(fù)染，使菌體復(fù)染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，出芽孢，便于觀察。便于觀察。細(xì)菌芽孢的基本構(gòu)造細(xì)菌芽孢的基本構(gòu)造4孢外壁孢外壁芽孢衣

3、芽孢衣皮層皮層芽孢壁芽孢壁芽孢質(zhì)膜芽孢質(zhì)膜芽孢質(zhì)芽孢質(zhì)芽孢核區(qū)芽孢核區(qū)芽孢具有多層厚而芽孢具有多層厚而致密的胞膜，由內(nèi)向致密的胞膜，由內(nèi)向外依次為核心、內(nèi)膜、外依次為核心、內(nèi)膜、芽孢壁、皮質(zhì)、外膜、芽孢壁、皮質(zhì)、外膜、芽孢殼和芽孢外衣芽孢殼和芽孢外衣 .細(xì)菌芽孢的基本特性細(xì)菌芽孢的基本特性5v形成芽孢需要一定的外界條件，這些條件因菌種而異。形成芽孢需要一定的外界條件，這些條件因菌種而異。炭疽芽孢桿菌在有氧炭疽芽孢桿菌在有氧(O(O2 2) )條件下才能形成芽孢，而破條件下才能形成芽孢，而破傷風(fēng)芽孢桿菌則在無(wú)氧條件下形成芽孢。通常細(xì)菌在傷風(fēng)芽孢桿菌則在無(wú)氧條件下形成芽孢。通常細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)不足時(shí)形成

4、芽孢，但蘇云金芽孢桿菌是例外。營(yíng)養(yǎng)不足時(shí)形成芽孢，但蘇云金芽孢桿菌是例外。細(xì)菌芽孢的基本特性細(xì)菌芽孢的基本特性6v芽孢對(duì)惡劣環(huán)境條件有很強(qiáng)的抵抗能力，尤其耐高溫。芽孢對(duì)惡劣環(huán)境條件有很強(qiáng)的抵抗能力，尤其耐高溫。有的芽孢可耐有的芽孢可耐100100沸水煮沸數(shù)小時(shí)。在一定條件下，沸水煮沸數(shù)小時(shí)。在一定條件下，芽孢保持活力數(shù)年至數(shù)十年之久。高溫滅菌的判斷標(biāo)芽孢保持活力數(shù)年至數(shù)十年之久。高溫滅菌的判斷標(biāo)準(zhǔn)就是細(xì)菌的芽孢是否被殺滅。準(zhǔn)就是細(xì)菌的芽孢是否被殺滅。細(xì)菌芽孢的基本特性細(xì)菌芽孢的基本特性7v芽孢在適宜條件下，營(yíng)養(yǎng)物如葡萄糖、乳酸和水分，芽孢在適宜條件下，營(yíng)養(yǎng)物如葡萄糖、乳酸和水分，會(huì)發(fā)芽形成菌體

5、，但細(xì)菌的數(shù)量并未增加，所以芽孢會(huì)發(fā)芽形成菌體，但細(xì)菌的數(shù)量并未增加，所以芽孢不是一種繁殖方式。不是一種繁殖方式。芽孢抵抗力強(qiáng)的原因芽孢抵抗力強(qiáng)的原因8v1.1.芽孢含水量少，蛋白質(zhì)受熱后不易變性；芽孢含水量少，蛋白質(zhì)受熱后不易變性；v2.2.芽孢具有多層致密的厚膜，理化因素不易透入；芽孢具有多層致密的厚膜，理化因素不易透入；v3.3.芽孢中含有一種特有的化學(xué)組分吡啶二羧酸芽孢中含有一種特有的化學(xué)組分吡啶二羧酸（DPADPA），），DPADPA與鈣結(jié)合生成的鈣鹽能提高芽孢中各與鈣結(jié)合生成的鈣鹽能提高芽孢中各種酶的熱穩(wěn)定性。種酶的熱穩(wěn)定性。三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材1.菌種：枯草芽孢桿菌、梭狀芽孢桿菌。2.染色劑： 5%孔雀綠水溶液、0.5%番紅水溶液3.儀器、材料：二甲苯、香柏油、蒸餾水、95%乙醇、顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙、吸水紙。四、實(shí)驗(yàn)方法（四、實(shí)驗(yàn)方法（SchaefferFulton氏染色法）氏染色法）1.制片：常規(guī)方法涂片、干燥、固定。2.染色：(1) 涂片上滴加35滴5%孔雀綠水溶液。(2)用試管夾夾住載玻片一端，微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時(shí)，計(jì)時(shí)5min。加熱過(guò)程中切勿使染料蒸干，及時(shí)補(bǔ)加染液。待玻片冷卻后，用自來(lái)水沖洗至孔雀綠不再褪色為止。(3)0.5%堿性番紅復(fù)染2min，水洗。(4) 制片干燥后油鏡觀察。芽孢呈綠色，菌體紅色五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告