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文檔簡介

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上1.1 果酒和果醋的制作一、實驗原理酶1酒精發(fā)酵的原理:酶 酵母菌進行有氧呼吸大量繁殖,表達式為:C6H12O6+O2CO2+H2O+能量 酵母菌進行無氧呼吸產生酒精和二氧化碳,表達式為:C6H12O6C2H5OH+CO2+能量 酵母菌的營養(yǎng)代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型。在有氧時,酵母菌大量繁殖,但是不起到發(fā)酵效果;在無氧時,繁殖速度減慢,但是此時可以進行發(fā)酵。在利用酵母菌發(fā)酵時最好是先通入足夠的無菌空氣在有氧環(huán)境下一段時間使其繁殖,再隔絕氧氣進行發(fā)酵。20左右最適合酵母菌繁殖,酒精發(fā)酵的最佳溫度是在1825,pH最好是弱酸性。酶2醋酸發(fā)酵的原理: 醋酸菌是好氧型細菌,當

2、缺少糖源時和有氧條件下,可將乙醇(酒精)氧化成醋酸。表達式為:C2H5OH+O2CH3COOH+H2O;當氧氣、糖源都充足時,醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。醋酸菌生長的最佳溫度是在30351.2 腐乳的制作一、 實驗原理1參與豆腐發(fā)酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多種,其中起主要作用的是毛霉。2毛霉是一種絲狀真菌,營養(yǎng)代謝類型為異養(yǎng)需氧型,最適生長溫度為15-18,常見于土壤、水果、蔬菜、谷物上,具有發(fā)達的白色菌絲。3.毛酶等微生物產生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可將脂肪分解成甘油和脂肪酸。二、實驗步驟分層加鹽,并隨層加高而增加鹽量,在瓶口表面鋪鹽厚些,以防

3、止雜菌從瓶口進入。約腌制8 d。 注:加鹽可以析出豆腐中的水分,有利于腐乳成型;鹽能夠抑制微生物的生長,并且可以調味。用鹽腌制時,注意鹽都用量。鹽的濃度過低,不足以抑制微生物生長,可能導致豆腐腐敗變質;鹽的濃度過高,會影響腐乳的口味。酒精含量越高,對蛋白酶的抑制作用也越大,使腐乳成熟期延長;酒精含量過低,蛋白酶的活性高,加快蛋白質的水解,雜菌繁殖快,豆腐易腐敗,難以成塊。 三、注意事項1.釀造腐乳的主要生產工序是將豆腐進行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。前期發(fā)酵所發(fā)生的主要變化是毛霉在豆腐(白坯)上的生長。發(fā)酵的溫度為1518 ,此溫度不適于細菌、酵母菌和曲霉的生長,而適于毛霉慢慢生長

4、。毛霉生長大約5 d后使白坯變成毛坯。前期發(fā)酵的作用,一是使豆腐表面有一層菌膜包住,形成腐乳的“體”;二是毛霉分泌以蛋白酶為主的各種酶,有利于豆腐所含有的蛋白質水解為各種氨基酸。后期發(fā)酵主要是酶與微生物協(xié)同參與生化反應的過程。1.3 制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量一、實驗原理1. 制作泡菜所用微生物是乳酸桿菌其代謝類型是異養(yǎng)厭氧型。在無氧條件下,將糖分解為乳酸,分裂方式是二分裂。反應式為:C6H12O62C3H6O3+能量含抗生素牛奶不能生產酸奶的原因是抗生素能殺死細菌和放線菌。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產酸奶。2. 亞硝酸鹽為白色粉末,易溶于水,在食品生產中用

5、作食品添加劑。亞硝酸鹽含量膳食中的亞硝酸鹽一般不會危害人體健康,國家規(guī)定肉制品中不超過30mg/kg,醬腌菜中不超過20mg/kg,嬰兒奶粉中不超過2mg/kg。亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外,但在適宜pH 、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質亞硝胺。3. 一般在腌制 10 天后亞硝酸鹽含量開始降低,故在10天之后食用最好發(fā)酵時間(d)4. 測定亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下,亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后,與 N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料,與已知濃度的標準顯色液目測比較,估算泡菜中亞硝酸鹽含量。2.1 微生物的實驗室培養(yǎng)一、基礎知識1. 培養(yǎng)基:人們按照微生物對

6、營養(yǎng)物質的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質,是進行微生物培養(yǎng)的物質基礎。(1)培養(yǎng)基的分類:·培養(yǎng)基按照物理性質可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂(是從紅藻中提取的一種多糖,在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑)后,制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長,可以形成肉眼可見的菌落。根據菌落的特征可以判斷是哪一種菌。液體培養(yǎng)基應用于工業(yè)或生活生產,固體培養(yǎng)基應用于微生物的分離和鑒定,半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運動及菌種保藏等。·按照成分培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學物質配制而成,其中成分的種類比

7、例明確,常用于微生物的分離鑒定。天然培養(yǎng)基是用化學成分不明的天然物質配制而成,常用于實際工業(yè)生產。·按照培養(yǎng)基的用途,可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學物質,以抑制不需要的微生物生長,促進所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng)基是根據微生物的特點,在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品配制而成的,用以鑒別不同類別的微生物。(2)培養(yǎng)基的成分:培養(yǎng)基的化學成分包括水、無機鹽、碳源、氮源、生長因子等。·碳源:能為微生物的代謝提供碳元素的物質。如CO2、NaHCO3等無機碳源;糖類、石油、花生粉餅等有機碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機碳源。單質碳不能作為碳

8、源。·氮源:能為微生物的代謝提供氮元素的物質。如N2、NH3、NO3-、NH4+(無機氮源)蛋白質、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有機氮源)等。只有固氮微生物才能利用N2。·培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對PH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求。例如,培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素,培養(yǎng)霉菌時須將培養(yǎng)基的pH調至酸性,培養(yǎng)細菌是需要將pH調至中性或微堿性,培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件2. 無菌技術a. 獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵,要注意以下幾個方面: 對實驗操作的空間、操作者的衣著和手,進行清潔和消毒。 將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行

9、滅菌。 為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。 實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。b. 無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外,還有什么目的?答:無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。c. 消毒與滅菌的區(qū)別 消毒指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(對于一些不耐高溫的液體)還有化學藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、紫外線消毒。 滅菌則是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物,包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高

10、壓蒸汽滅菌。d 常用器具的滅菌方法: 接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法; 玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱; 培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。 表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫外燈。比較項理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強烈全部微生物能 微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。 平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體

11、,這就是菌落。 稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。 用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是:使聚集在一起的微生物分散成單個細胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落,以便于純化菌種。2.2 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)尿素:是一種重要的農業(yè)氮肥,尿素并不能直接被農作物吸收。只有當土壤中的細菌將尿素分解成氨之后,才能被植物利用。土壤中的細菌之所以能分解尿素,是因為他們能合成脲酶。尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的2.3 分解纖維素的微生物的分離一、纖維素與纖維素酶纖維素:一種由葡萄糖首尾相連

12、而成的高分子化合物,是地球上含量最豐富的多糖類物質。(1)棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產物,木材、作物秸稈等也富含纖維素。(2)纖維素酶是一種復合酶,一般認為它至少包括三種組分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖,為微生物的生長提供營養(yǎng)。二、纖維素分解菌的篩選(1)篩選方法:剛果紅染色法。能夠通過顏色反應直接對微生物進行篩選。(2)剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅是一種染料,它可以與像纖維素這樣的多糖物質形成紅色復合物,但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。當我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入

13、剛果紅時,剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅纖維素的復合物就無法形成,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣,我們就可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。3.1 菊花的組織培養(yǎng)一、植物細胞工程具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細胞,都具有發(fā)育成完整個體的能力,即每個生物細胞都具有全能性。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不表現(xiàn)出來,這是因為在特定的時間和空間條件下,通過基因的選擇性表達,構成不同組織和器官。植物組織培養(yǎng)技術的應用:實現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖;培育脫毒作物;制作人工種子;培育作物新品種以及細胞產物的工廠化生產等。二、植物組織培養(yǎng)的基本

14、過程細胞分化:在生物個體發(fā)育過程中,細胞在形態(tài)、結構和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。愈傷組織:離體的植物組織或細胞,在培養(yǎng)了一段時間以后,會通過細胞分裂,形成愈傷組織,愈傷組織的細胞排列疏松而無規(guī)則,是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。脫分化:由高度分化的植物組織或細胞產生愈傷組織的過程,稱為植物細胞的脫分化,或者叫做去分化。再分化:脫分化產生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng),又可以重新分化成根或芽等器官,這個過程叫做再分化。·細胞分化是一種持久性的變化,它有什么生理意義?答:使多細胞生物體中細胞結構和功能趨向專門化,有利于提高各種生理功能的效率。·比較根尖分生組織和愈傷組織

15、的異同組織類型細胞來源細胞形態(tài)細胞結構細胞排列細胞去向根尖分生組織受精卵正方形無液泡緊密分化成多種細胞組織愈傷組織高度分化細胞無定形高度液泡化疏松再分化成新個體相同點都通過有絲分裂進行細胞增殖三、影響植物組織培養(yǎng)的條件(1)材料:不同的植物組織,培養(yǎng)的難易程度差別很大。植物材料的選擇直接關系到試驗的成敗。植物的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實驗結果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側枝作材料。一般來說,容易進行無性繁殖的植物容易進行組織培養(yǎng)。選取生長旺盛嫩枝進行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好,容易誘導脫分化和再分化。(2)營養(yǎng):離體的植物組織和細胞,對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相

16、對特殊,需要配制適宜的培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基,其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg,微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co,有機物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。(3)激素:植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素。在生長素存在的情況下,細胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強趨勢。在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細胞分裂素等植物激素,其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結果。使用順序實驗結果先生長素,后細胞分裂素有利于分裂但不分化先細胞分裂素,后生長素細胞既分裂也分化同時使用分化頻率提高生長素 細胞分裂素比值與結果比值高時促根分化,抑芽形

17、成比值低時促芽分化,抑根形成比值適中促進愈傷組織生長(4)環(huán)境條件:PH、溫度、光等環(huán)境條件。 不同的植物對各種條件的要求往往不同。進行菊花的組織培養(yǎng),一般將pH控制在5.8左右,溫度控制在1822,并且每日用日光燈照射12h. 四、操作流程外植體的消毒外植體:用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時,要取生長旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉,用軟刷輕輕刷洗,刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分,放入體積分數(shù)為70%的酒精中搖動23次,持續(xù)67s,立即將外植體取出,在無菌水中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分,放入質量分數(shù)為0.1%

18、的氯化汞溶液中12min。取出后,在無菌水中至少清洗3次,漂洗消毒液。注意:對外植體進行表面消毒時,就要考慮藥劑的消毒效果,又要考慮植物的耐受能力。3.2 月季的花藥培養(yǎng)一、基礎知識(1)被子植物的花粉發(fā)育被子植物的雄蕊通常包含花絲、花藥兩部分?;ㄋ帪槟覡罱Y構,內部含有許多花粉。花粉是由花粉母細胞經過減數(shù)分裂而形成的,因此,花粉是單倍體的生殖細胞。(2)被子植物花粉的發(fā)育要經歷小孢子四分體時期、單核期和雙核期等階段。四分體時期:4個由小孢子母細胞經減數(shù)分裂得到的單倍體細胞連在一起。單核期:四分體的4個單倍體細胞彼此分離,形成4個具有單細胞核的花粉粒。這時的細胞含濃厚的原生質,核位于細胞的中央(

19、單核居中期)。隨著細胞不斷長大,細胞核由中央移向細胞一側(單核靠邊期)。雙核期:小孢子分裂成1個生殖細胞核和1個花粉管細胞核,進而形成兩個細胞,一個是生殖細胞,一個是營養(yǎng)細胞,這個過程是有絲分裂,形成的是兩細胞型花粉粒。生殖細胞將再進行一次有絲分裂,形成兩個精子,形成三細胞型花粉粒。一個營養(yǎng)細胞和兩個生殖細胞具有相同的染色體數(shù)目和基因型,都是單倍體。注意: 成熟的花粉粒有兩類,一類是二核花粉粒,其花粉粒中只含花粉管細胞核和生殖細胞核,二核花粉粒的精子是在花粉管中形成的;另一類是三核花粉粒,花粉在成熟前,生殖細胞就進行一次有絲分裂,形成兩個精子,此花粉粒中含有兩個精子核和一個花粉管核(營養(yǎng)核)

20、花粉發(fā)育過程中的四分體和動物細胞減數(shù)分裂的四分體不同?;ǚ郯l(fā)育過程中的四分體是花粉母細胞經減數(shù)分裂形成的4個連在一起的單倍體細胞;而動物細胞減數(shù)分裂過程中的四分體是聯(lián)會配對后的一對同源染色體,由于含有四條染色單體而稱為四分體。 同一生殖細胞形成的兩個精子,其基因組成完全相同。(3)產生花粉植株的兩種途徑通過花藥培養(yǎng)產生花粉植株(即單倍體植株)一般有兩種途徑,一種是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植物,另一種是花粉在誘導培養(yǎng)基上先形成愈傷組織,再將其誘導分化成植株。這兩種途徑之間并沒有絕對的界限,主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。注意: 無論哪種產生方式,都要先誘導生芽,再誘導生根 胚狀體:植物

21、體細胞組織培養(yǎng)過程中,誘導產生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚非常類似的結構,其發(fā)育也與受精卵發(fā)育成的胚類似,有胚芽、胚根、胚軸等完整結構,就像一粒種子,又稱為細胞胚。(3)影響花藥培養(yǎng)的因素誘導花粉能否成功及誘導成功率的高低,受多種因素影響,其中材料的選擇與培養(yǎng)基的組成是主要的影響因素·親本的生理狀況:花粉早期是的花藥比后期的更容易產生花粉植株,選擇月季的初花期。·合適的花粉發(fā)育時期:一般來說,在單核期,細胞核由中央移向細胞一側的時期,花藥培養(yǎng)成功率最高·花蕾:選擇完全未開放的花蕾·親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以及接種密度等對誘導成功率都有一定影響二、

22、實驗操作(1)材料的選?。哼x擇花藥時,一般要通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育時期的最常用的方法是醋酸洋紅法。但是,某些植物的花粉細胞核不易著色,需采用焙花青-鉻礬法,這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色(2)材料的消毒(3)接種和培養(yǎng):滅菌后的花蕾,要在無菌條件下除去萼片和花瓣,并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時,要盡量不損傷花藥(否則接種后容易從受傷部位長生愈傷組織),同時還要徹底去除花絲,因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成,通常每瓶接種花藥710個,培養(yǎng)溫度控制在25左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照。6.1 植物芳香油的提取一、基礎知識1

23、天然香料的來源:植物、動物不同植物的根、莖、葉、花、果實、種子都可以提取芳香油。2. 芳香油的性質:揮發(fā)性強,成分復雜,以萜類化合物及其衍生物為主。3. 芳香油的提取方法:蒸餾、壓榨、萃取等。(1)水蒸氣蒸餾法: 原理:水蒸汽可將揮發(fā)性較強的芳香油攜帶出來形成油水混合物,冷卻后水油分層。 方法:水中蒸餾:原料放在沸水中加熱蒸餾。水上蒸餾:原料隔放在沸水上加熱蒸餾。水汽蒸餾:利用外來高溫水蒸氣加熱蒸餾。不足:有些原料不適宜于水中蒸餾,如柑橘、檸檬等易焦糊,有效成分容易水解。(2)壓榨法:通過機械壓縮力將液相物從液固兩相混合物中分離出來的一種簡單操作。(3)萃取法:原理:芳香油易溶于有機溶劑,溶劑揮發(fā)后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。方法:原料浸泡在溶劑中得到浸泡液有機溶劑揮發(fā)芳香油。不足:有機溶劑中的雜質影響芳香油的品質6.2 胡蘿卜素的提取一、基礎知識1. 胡蘿卜素 性質:橘黃色結晶,化學性質比較穩(wěn)定,不溶于水,微溶于乙醇,易溶于石油醚等有機溶劑。依據碳碳雙鍵的數(shù)目劃分為、 三類。其中最主要的組成成分為-胡蘿卜素。 作用:a.治療夜盲癥、幼兒生長發(fā)育不良、干皮癥等疾??;b.常用

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