細(xì)菌真菌放線(xiàn)菌培養(yǎng)基配方

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上。一細(xì)菌培養(yǎng)基：肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種廣泛用于培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基,肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.藥品比例：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，瓊脂1520g，水1000mL，PH7.47.62.實(shí)驗(yàn)器材：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、鏈霉素、1mol/LNaOH、lmol/LHCl、KNO3、NaCl、K2HPO43H2O、MgSO47H2O、FeSO47H2O、4.5mL無(wú)菌水6管，10%酚液，49.5mL無(wú)菌水(帶玻璃珠)1瓶。土壤樣品、試管、培養(yǎng)皿、移液管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、天平、稱(chēng)量

2、紙、牛角匙、pH試紙、棉花、報(bào)紙、記號(hào)筆、線(xiàn)繩、紗布、酒清燈。電爐、高壓蒸氣滅菌鍋、超凈工作臺(tái).3.配置方法（1）稱(chēng)藥品：按實(shí)際用量計(jì)算后，按配方稱(chēng)取各種藥品放入大燒杯中。牛肉膏可放在小燒杯中稱(chēng)量，用熱水溶解后倒入大燒杯。蛋白胨極易吸潮，故稱(chēng)量時(shí)要迅速。（2）加熱溶解：在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱，并用玻棒攪拌，待藥品完全溶解后再補(bǔ)充水分至所需量。若配制固體培養(yǎng)基，則將稱(chēng)好的瓊脂放入己溶解的藥品中，再加熱融化，此過(guò)程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，最后補(bǔ)足所失的水分。（3）調(diào)pH：檢測(cè)培養(yǎng)基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH

3、試紙檢測(cè)，直至達(dá)到所需pH范圍。若偏堿，則用lmol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前。應(yīng)注意pH值不要調(diào)過(guò)頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。（4）過(guò)濾：液體培養(yǎng)基可用濾紙過(guò)濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過(guò)濾，以利培養(yǎng)的觀察。但是供一般使用的培養(yǎng)基，這步可省略。（5）分裝：按實(shí)驗(yàn)要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶?jī)?nèi)。分裝時(shí)可用漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上而造成污染。分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的l/5，滅菌后制成斜面。分裝入三角瓶?jī)?nèi)以不超過(guò)其容積的一半為宜。半固體培養(yǎng)基以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。（6）加棉塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉

4、)制作的棉塞。棉塞的形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利通氣的作用。要使棉塞總長(zhǎng)約3/5塞入試管口或瓶口內(nèi)，以防棉塞脫落。有些微生物需要更好的通氣，則可用8層紗布制成通氣塞。有時(shí)也可用試管帽或塑料塞代替棉塞。（7）包扎：加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報(bào)紙，以防滅菌時(shí)冷凝水沾濕棉塞。若培養(yǎng)基分裝于試管中，則應(yīng)以5支或7支在一起，再于棉塞外包一層牛皮紙，用繩扎好。然后用記號(hào)筆注明、培養(yǎng)基名稱(chēng)、組別、日期。（8）滅菌：將上述培養(yǎng)基于121.3濕熱滅菌20min。如因特殊情況不能及時(shí)滅菌，則應(yīng)故人冰箱內(nèi)暫存。（9）擺斜面：滅菌后，如制斜面，則需趁熱將

5、試管口端擱在一根長(zhǎng)木條上，并調(diào)整斜度，便斜面的長(zhǎng)度不超過(guò)試管總長(zhǎng)的1/2。（10）無(wú)菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37溫箱中培養(yǎng)2448h，無(wú)菌生長(zhǎng)即可使用，或貯存于冰箱或清潔的櫥內(nèi)，備用。二.放線(xiàn)菌培養(yǎng)基:高氏合成一號(hào)培養(yǎng)基是一種用于培養(yǎng)放線(xiàn)菌的合成培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中的可溶性淀粉作為碳源和能源，KNO3作為氮源，K2HP04、MgSO4和FeS04作為無(wú)機(jī)鹽等高氏合成一號(hào)培養(yǎng)基1.藥品比例：可溶性淀粉20gNaCI05gKNO31gK2HPO43H2O05gMgSO47H2O05gFeSO47H2O001g瓊脂1525g水1000mlpH7.47.62.實(shí)驗(yàn)器材：試管，錐形瓶，燒杯，量筒，玻璃棒，

6、培養(yǎng)基分裝器，天平，高壓蒸汽滅菌器，PH試紙，棉花，牛皮紙，麻繩，紗布3.配制方法：（1）、稱(chēng)量和溶化按配方先稱(chēng)取可溶性淀粉，放入小燒杯中，并用少量冷水將淀粉調(diào)成糊狀，再加入少于所需水量的沸水中，繼續(xù)加熱，使可溶性淀粉完全溶化。然后再稱(chēng)取其他各成分，并依次溶化，對(duì)微量成分FeSO47H2O可先配成高濃度的貯備液，按比例換算后再加入。待所有試劑完全溶解后，補(bǔ)充水分到所需的總體積。配制固體培養(yǎng)基時(shí)，將稱(chēng)好的瓊脂放入已溶的試劑中，在加熱融化，最后補(bǔ)充所損失的水分。（2）、調(diào)pH用試紙測(cè)培養(yǎng)基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中加入1mol/LNaOH,邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH,直至pH

7、達(dá)7.6。反之，用1mol/LHCI進(jìn)行調(diào)節(jié)。（3）、分裝和加塞將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)，在試管口或錐形瓶口上塞上棉塞。（4）、包扎加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，其外再用一根麻繩扎好。用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱(chēng)、組別、配制日期。（5）、滅菌將上述培養(yǎng)基以1210C,20min,0.103MPa高壓蒸汽滅菌。（6）、擱置斜面將滅菌的試管培養(yǎng)基冷卻至500C左右，將試管口端擱在玻璃棒上。斜面的斜度要適當(dāng)，使斜面的長(zhǎng)度約為管長(zhǎng)1/3。（7）、無(wú)菌檢查將滅菌培養(yǎng)基放入370C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2428h，以檢查滅菌是否徹底。三真菌培養(yǎng)基：馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基（馬丁氏培養(yǎng)基）馬鈴薯糖瓊脂

8、培養(yǎng)基1.藥品比例K2HPO41g，MgSO47H2O0.5g，蛋白胨5g，葡萄糖l0g，瓊脂1520g，水1000mL，自然pH此培養(yǎng)液1000ml加1%孟加拉紅水溶液33ml。臨用時(shí)每100ml培養(yǎng)基中加1%鏈霉素液03ml。（孟加拉紅和鏈霉素主要是細(xì)菌和放線(xiàn)菌的抑制劑，對(duì)真菌無(wú)抑制作用，因而真菌在這種培養(yǎng)基上可以得到優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，從而達(dá)到分離真菌的目的）2.實(shí)驗(yàn)器材KH2PO4，MgSO4?7H2O，蛋白胨，葡萄糖，瓊脂，孟加拉紅，鏈霉素；試管，三角燒瓶，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋3.配制方法（1）稱(chēng)量和溶解：先計(jì)算后稱(chēng)量，按用量稱(chēng)取各成分，并將其溶解在少于所

9、需的水中。待各成分完全溶解后，補(bǔ)充水分到所需體積。再將孟加拉紅配成1%的水溶液，在1000mL培養(yǎng)液中加入以上孟加拉紅溶液3.3mL，混勻后，加入瓊脂加熱融化，方法同牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制。（2）分裝、包扎、滅菌及無(wú)菌檢查同牛肉膏蛋白膝培養(yǎng)基配制。（3）鏈霉素的加入：鏈霉素受熱容易分解，所以臨用時(shí)，將培養(yǎng)基融化后待溫度降至45左右時(shí)才能加入?？上葘㈡溍顾嘏涑?%的溶液(配好的鏈霉素溶液保存于-20)，在100mL培養(yǎng)基中加1%鏈霉素0.3mL，使每毫升培養(yǎng)基中合鏈霉素30g。四滅菌采用高壓蒸氣滅菌法進(jìn)行滅菌，步驟如下：1首先將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。切勿

10、忘記加水，同時(shí)水量不可過(guò)少，以防滅菌鍋燒干而引起炸裂事故。2放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸氣流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與鍋壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。3加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)。再以?xún)蓛蓪?duì)稱(chēng)的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。4用電爐或煤氣加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸氣壓力增加到逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用0.1Mpa，121.5，20min滅菌。滅菌的主要因素是溫度而不是壓力。

11、因此鍋內(nèi)冷空氣必須完全排盡后，才能關(guān)上排氣閥，維持所需壓力。5滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源或關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至“0”時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。壓力一定要降到“0”時(shí)，才能打開(kāi)排氣閥，開(kāi)蓋取物。否則就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染，甚至灼傷操作者。6將取出的滅菌培養(yǎng)基，需擺斜面的則擺成斜面，然后放入37溫箱培養(yǎng)24h，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(zhǎng)，即可待用。五土壤微生物的分離1取土壤：取表層以下510cm處的土樣，放入無(wú)菌的袋中備用，或放在4冰箱中暫存。2制備稀釋液(要無(wú)菌操

12、作)(1)制備土壤懸液：稱(chēng)土樣0.5g，迅速倒入帶玻璃珠的49.5mL無(wú)菌水瓶中(玻璃珠用量以充滿(mǎn)瓶底力最好)，振蕩510min，使土樣充分打散，即成為10-2的土壤懸液。(2)稀釋?zhuān)河脽o(wú)菌移液管吸10-2的土壤懸液0.5mL，放入4.5mL無(wú)菌水中即為10-3稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成10-310-8的稀釋液。注意：操作時(shí)管尖不能接觸液面，每一個(gè)稀釋度換用一支移液管，每次吸入土液后，要將移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以減少稀釋中的誤差。六混菌法測(cè)定菌落數(shù)的方法(1)細(xì)菌：取10-7、10-6兩管稀釋液各1mL，分別接人相應(yīng)標(biāo)號(hào)的平皿中，每個(gè)稀釋度接兩個(gè)平皿。然后取冷

13、卻至50的牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基，分別倒入以上培養(yǎng)皿中(裝量以鋪滿(mǎn)皿底高1.52mm為宜)，迅速輕輕搖動(dòng)平皿，使菌液與培養(yǎng)基充分混勻，但不沾濕皿的邊緣，待瓊脂凝固即成細(xì)菌平板。倒平板時(shí)要注意無(wú)菌操作。（2）放線(xiàn)菌：取10-5、10-4兩管稀釋液，在每管中加入10%酚液56滴，搖勻，靜置片刻，然后分別從兩管中吸出1mL加入相應(yīng)標(biāo)號(hào)的平皿中，選用高氏1號(hào)培養(yǎng)基，用與細(xì)菌相同的方法倒入平皿中，便可制成放線(xiàn)菌平板。（3）真菌：取10-2、10-3兩管稀釋各1mL，分別接入相應(yīng)標(biāo)號(hào)的平皿中，每個(gè)稀釋度接兩個(gè)平皿。在融化的馬鈴薯培養(yǎng)基中，每100mL加入滅菌的乳酸1mL，輕輕搖勻，然后用與細(xì)菌相同的方法倒入平皿

14、中，便可制成真菌的平板。4培養(yǎng)：將接種好的細(xì)菌、放線(xiàn)菌、真菌平板倒置，即皿蓋朝下放置，于2830中恒溫培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)12d，放線(xiàn)菌培養(yǎng)57d，真菌培養(yǎng)35d。觀察生長(zhǎng)的菌落，用于進(jìn)一步純化分離或直接轉(zhuǎn)接斜面。七.（一）平板制作及劃線(xiàn)分離方法。1倒平板：按無(wú)菌操作要求，在火焰旁操作。2劃線(xiàn)分離：使用接種環(huán)，從待純化的菌落或待分離的斜面菌種只沾取少量菌樣，在相應(yīng)培養(yǎng)基平板中劃線(xiàn)分離，劃線(xiàn)的方法多樣，目的是獲得單個(gè)菌落。3培養(yǎng)：方法同“土壤稀釋分離”。（二）斜面接種和穿刺接種1斜面接種（1）取新鮮固體斜面培養(yǎng)基，分別做好標(biāo)記（寫(xiě)上菌名、接種日期、接種人等），然后用無(wú)菌操作方法，把待接菌種接入以上新鮮

15、培養(yǎng)基斜面上。（2）接種的方法是，用接種環(huán)沾取少量待接菌種，然后在新鮮斜面上“之”字形劃線(xiàn)，方向是從下部開(kāi)始，一直劃至上部（圖34A）。注意劃線(xiàn)要輕，不可把培養(yǎng)基劃破。（3）接種后30恒溫培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)48h，放線(xiàn)菌、霉菌培養(yǎng)至孢子成熟方可取出保存。2穿刺接種（1）取兩支新鮮半固體牛肉膏蛋白胨柱狀培養(yǎng)基，做好標(biāo)記（寫(xiě)上菌名）、接種日期，接種人等）。（2）接種的方法是，用接種針沾取少量待接菌種，然后從柱狀培養(yǎng)基的中心穿入其底部（但不要穿透），然后沿原刺入路線(xiàn)抽出接種針，注意接種針不要移動(dòng)。（3）接種后30恒溫培養(yǎng)，24h后觀察，比較兩種菌的生長(zhǎng)結(jié)果。八、注意事項(xiàng)1稱(chēng)藥品用的牛角匙不要混用，稱(chēng)完藥品應(yīng)及時(shí)蓋緊瓶蓋。2調(diào)pH時(shí)要小心操作，避免回調(diào)。3不同培養(yǎng)基各有配制特點(diǎn)，要注意具體操作。4一般土壤中，細(xì)菌最多，放線(xiàn)菌及真菌次之，而酵母菌主要見(jiàn)于果園及菜園土壤中，故從土壤中分離細(xì)菌時(shí)，要取較高的稀釋度，否則菌落連成一片不能計(jì)數(shù)。5在土壤稀釋