成釉細(xì)胞瘤和角化囊腫細(xì)胞生長特點(diǎn)的研究

1、成釉細(xì)胞瘤和角化囊腫細(xì)胞生長特點(diǎn)的研究【摘要】目的觀察、比較成釉細(xì)胞瘤和角化囊腫細(xì)胞的生長特點(diǎn)，探討角化囊腫復(fù)發(fā)的原因。方法原代體外培養(yǎng)成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞、牙源性角化囊腫、根端囊腫及口腔粘膜的上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，倒置光相差顯微鏡觀察。結(jié)果成釉細(xì)胞瘤上皮細(xì)胞生長較快，細(xì)胞生長暈周圍不規(guī)則，大細(xì)胞生長暈周圍有許多衛(wèi)星樣小生長暈，成纖維細(xì)胞呈網(wǎng)格狀。角化囊腫與其他囊腫和正常粘膜的上皮細(xì)胞相同，生長緩慢，細(xì)胞生長暈周圍規(guī)則，由呈漩渦狀生長的成纖維細(xì)胞圍繞。結(jié)論成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞生長活躍，而角化囊腫細(xì)胞的生長特點(diǎn)與其他囊腫和粘膜相似，提示成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞的浸潤性生長特點(diǎn)，推測角化囊腫復(fù)發(fā)的主要因素不是因為其具有

2、腫瘤的生長特點(diǎn)?！娟P(guān)鍵詞】上皮細(xì)胞 組織培養(yǎng) 成釉細(xì)胞瘤 角化囊腫 Growth behavior of cells of ameloblastoma and odontogenic keratocystZHAO Ningxia，YU Shifeng，WANG Weihua，et al.School of Stomatology,Beijing Medical University, Beijing 100081【Abstract】ObjectiveTo compare the growth behavior of epithelium and fibroblast from amelobla

3、stoma and keratocyst and to discuss the recurrence reason for the keratocyst.MethodsEpithelial cells and fibroblast from ameloblastoma, keratocyst, dentigerous cyst, radicular cyst and oral mucosa were cultured and observed by phase-contrast microscope. ResultsThe epithelial cells of ameloblastoma g

4、rew faster, with an irregular area around the cell mass and some small satellite-shaped cell mass. The epithelial cells of all the cysts and mucosa grew slower with the cell masses surrounded by fibroblasts which grew in whirl manner with a round and smooth periphery. ConclusionThe cells from the am

5、eloblastoma grow faster and more active,and those from the keratocysts grow like the other cysts and the normal mucosa. It is speculated that the ameloblastoma grows in an aggressive manner and it is possible that the recurrence of the keratocyst isnt primarily resulted from its growth behavior as a

6、 tumor.【Key words】Epithelial cells Tissue culture Ameloblastoma Keratocyst epithelium成釉細(xì)胞瘤是比較常見的牙源性腫瘤，雖然生長緩慢，屬良性腫瘤，但易呈局部浸潤性生長，手術(shù)不徹底常易復(fù)發(fā)。牙源性角化囊腫也具有較大的復(fù)發(fā)傾向，關(guān)于其原因卻意見不一。上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法，國外早在六七十年代即已開展，目前成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，隨著各種材料的出現(xiàn)也日趨成熟，但國內(nèi)這方面的研究仍然是需要填補(bǔ)的空白。我們通過原代培養(yǎng)的方法，觀察、比較牙源性角化囊腫和成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞不同的生長特點(diǎn)，并對角化囊腫復(fù)發(fā)的原因進(jìn)行探討。材料與

7、方法1.材料 ：根端囊腫3例，含牙囊腫2例，口腔粘膜2例，牙源性角化囊腫2例，成釉細(xì)胞瘤3例。2.方法：（1）取材， D-Hanks液（含青霉素、鏈霉素各1106U/L）中浸泡3次，每次20 min。（2）將組織塊分切成1mm1mm1mm大小，種于培養(yǎng)皿上，置37培養(yǎng)箱34小時。（3）沿培養(yǎng)皿壁緩慢加入DMEM培養(yǎng)液（含胎牛血清10，青霉素、鏈霉素各1105U/L）。（4）置37、5%CO2孵箱內(nèi)，更換DMEM培養(yǎng)液2次/周，Olympus倒置光相差顯微鏡觀察。結(jié)果1一般生長特點(diǎn)：各囊腫及頰粘膜的組織塊周圍，2天左右首先有梭形的成纖維細(xì)胞呈散射樣爬出。含牙囊腫、角化囊腫和頰粘膜分別在23天、3

8、4天和78天左右，上皮細(xì)胞從組織塊中爬出，圍繞組織塊周圍，形成膜狀的鋪路石樣結(jié)構(gòu)，最外層由先爬出的成纖維細(xì)胞包繞。隨后1周內(nèi)，上皮細(xì)胞生長較快，之后成纖維細(xì)胞增多，上皮細(xì)胞出現(xiàn)復(fù)層，生長速度減慢。根端囊腫無上皮細(xì)胞爬出。 成釉細(xì)胞瘤在種植后16小時，培養(yǎng)液內(nèi)即可有大量的細(xì)胞懸浮，24小時左右成釉細(xì)胞瘤上皮細(xì)胞貼壁生長，有的圍繞組織塊周圍，有的散在于組織塊間，形成結(jié)構(gòu)松散的鱗狀細(xì)胞團(tuán)。以后2周內(nèi)生長較快，成纖維細(xì)胞較少，第3周成纖維細(xì)胞增多，瘤細(xì)胞生長減慢(表1)。表1成釉細(xì)胞瘤、各囊腫及頰粘膜的生長特點(diǎn)項目上皮細(xì)胞出現(xiàn)時間上皮生長迅速期成纖維細(xì)胞生長迅速期成釉細(xì)胞瘤24小時貼壁后2周第3周角化

9、囊腫34天貼壁后1周第2天含牙囊腫23天貼壁后1周第2天根端囊腫無無第45天頰粘膜78天貼壁后1周第2天2. 上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 成釉細(xì)胞瘤的上皮細(xì)胞大而松散，呈膜狀生長的細(xì)胞生長暈周邊不規(guī)則，有一些突起伸出。不同的細(xì)胞生長暈之間，有些細(xì)胞漿延展而互相連接，呈手拉手樣；有些細(xì)胞生長暈周圍出現(xiàn)小衛(wèi)星樣生長暈，并且逐漸增大。牙源性角化囊腫和含牙囊腫的上皮細(xì)胞大而緊密，而頰粘膜的上皮細(xì)胞小，其細(xì)胞生長暈周圍由成纖維細(xì)胞圍繞，均十分規(guī)則（1、2）。1成釉細(xì)胞瘤上皮細(xì)胞生長暈周圍有衛(wèi)星樣小生長暈。倒置光相差顯微鏡(300)2角化囊腫上皮細(xì)胞生長暈周圍規(guī)則，由纖維細(xì)胞圍繞。倒置光相差顯微鏡(300)3.

10、 成纖維細(xì)胞的生長特點(diǎn)：成釉細(xì)胞瘤的成纖維細(xì)胞出現(xiàn)較遲，且生長緩慢，呈網(wǎng)格狀。角化囊腫和含牙囊腫的成纖維細(xì)胞出現(xiàn)較早，生長快而多，頰粘膜居中，這幾種成纖維細(xì)胞均呈漩渦狀。 討論本研究采用原代培養(yǎng)，方法簡捷明了，而且與體內(nèi)細(xì)胞性狀更接近。1979年Yang等1將成釉細(xì)胞瘤組織塊置于膠原凝膠中進(jìn)行三維培養(yǎng)觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在凝膠中長出許多與組織塊結(jié)構(gòu)相似的瘤樣結(jié)構(gòu)，但關(guān)于其浸潤性生長的特點(diǎn)未作報道。本研究中，成釉細(xì)胞瘤細(xì)胞在培養(yǎng)16 小時后，培養(yǎng)液中有大量的瘤細(xì)胞游出，24 小時后有細(xì)胞貼壁生長，較其他上皮細(xì)胞出現(xiàn)早，說明其不僅具有活躍的增殖能力，且瘤細(xì)胞向周圍游走的能力也較強(qiáng)。另外，細(xì)胞團(tuán)周邊不規(guī)則

11、，有突起和衛(wèi)星樣細(xì)胞團(tuán)，更提示細(xì)胞具有主動生長的特點(diǎn)。由于牙源性角化囊腫有較高的復(fù)發(fā)率，Ahlfors等2認(rèn)為牙源性角化囊腫是良性的囊性腫物，Partridge和Towers3則認(rèn)為其具有腫瘤的生物學(xué)行為，Stenman等4通過體外培養(yǎng)的方法，發(fā)現(xiàn)含牙囊腫無上皮細(xì)胞生長，而成釉細(xì)胞瘤和角化囊腫有，認(rèn)為角化囊腫不僅是單純的囊腫，而更具腫物的生長特點(diǎn)。本研究中2例含牙囊腫均有上皮細(xì)胞生長，且較角化囊腫出現(xiàn)早。另外，角化囊腫的上皮細(xì)胞團(tuán)與頰粘膜基本相似，周圍平滑規(guī)則，與松散的成釉細(xì)胞瘤、向周圍突出生長和在周圍形成衛(wèi)星樣細(xì)胞團(tuán)的結(jié)構(gòu)明顯不同。故角化囊腫與成釉細(xì)胞瘤的差別更大，而與頰粘膜基本相似。所以，

12、角化囊腫易復(fù)發(fā)，并不是因為具有腫瘤的生物學(xué)特點(diǎn)。Hume等5培養(yǎng)的93例牙源性囊腫中，91%的含牙囊腫和58%的角化囊腫有上皮細(xì)胞長出，也為此提供了證據(jù)。從各實驗組的成纖維細(xì)胞生長特點(diǎn)觀察，成釉細(xì)胞瘤的成纖維細(xì)胞少而生長較遲，對上皮細(xì)胞的局限力小，因而較早就有大量的上皮細(xì)胞游出。而各囊腫的成纖維細(xì)胞生長快而多，且呈漩渦狀緊密圍繞于上皮細(xì)胞團(tuán)周圍，所以對上皮細(xì)胞游出有較強(qiáng)的局限力，另外對囊腔內(nèi)的膨脹壓力也具有較強(qiáng)的對抗力。頰粘膜的成纖維細(xì)胞，無論是生長速度還是數(shù)量都居于成釉細(xì)胞瘤和囊腫之間。High和Robinson6在膠原凝膠中培養(yǎng)各種牙源性囊腫的成纖維細(xì)胞，含牙囊腫的凝膠收縮速度較慢，說明各

13、囊腫壁的成纖維細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)存在差異，因此其對抗囊腔內(nèi)的膨脹壓的能力不同。另外各實驗組的成纖維細(xì)胞具有不同的生長特點(diǎn)，也說明其上皮與結(jié)締組織之間存在相互誘導(dǎo)、相互調(diào)節(jié)的作用。本研究證明，角化囊腫與浸潤性生長的成釉細(xì)胞瘤不同，不具有腫瘤的生長特點(diǎn)。根據(jù)角化囊腫的成纖維細(xì)胞具有較強(qiáng)的對抗能力，推測其膨脹性生長的能力較強(qiáng)，其復(fù)發(fā)傾向可能主要是由于較強(qiáng)的膨脹性生長，使病變較大，手術(shù)不易完全根除而致。國外曾報道，復(fù)發(fā)的角化囊腫大多范圍較大。經(jīng)過治療縮小的角化囊腫，復(fù)發(fā)率則明顯降低。另外，由于上皮與結(jié)締組織之間存在相互誘導(dǎo)的作用，手術(shù)殘余的組織可能對周圍分化不成熟的幼稚細(xì)胞，如剩余牙板、粘膜的基底細(xì)胞等

14、誘導(dǎo)而復(fù)發(fā)。無論是囊腫過大，還是幼稚細(xì)胞誘導(dǎo)再生，或是剩余的子囊，主要是與手術(shù)不徹底有關(guān)。Forsell和Sainio7隨訪121例患者發(fā)現(xiàn)，手術(shù)破碎不能完全摘除的囊腫，50%以上復(fù)發(fā)。從臨床治療意義來看，角化囊腫雖然不必象成釉細(xì)胞瘤一樣做下頜骨截除，但單純的摘除術(shù)必然存在復(fù)發(fā)的危險，所以，除徹底刮治外，還應(yīng)在病變區(qū)與正常組織間做徹底清掃。國家自然科學(xué)基金資助課題（39330220）作者單位：趙寧俠于世鳳王衛(wèi)華龐淑珍（100081 北京醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院）參考文獻(xiàn)1Yang J, Richards J, Bowman P, et al. Sustained growth and three-d

15、imensional organization of primary mammary tumor epithelial cells embedded in collagen gels. Proc Natl Acad Sci U S A， 1979，76：3401-3405.2Ahlfors E, Larsson A, Sjogren S. The odontogenic keratocyst：a benign cystic tumor? J Oral Maxillofac Surg ，1984，42:10-19. 3Partridge M， Towers JF. The primordial

16、cyst (odontogenic keratocyst): its tumour-like characteristics and behaviour. Br J Oral Maxillofac Surg， 1987，25:271-279. 4Stenman G, Magnusson B, Lennartsson B,et al. In vitro growth characteristic of human odontogenic keratocysts and dentigerous cysts.J Oral Pathol, 1986，15:143-145.5Hume WJ, Moore JK, Main DM. Differences in in vitro growth of epithelium from inflammatory and developmental odontogenic cysts. Br J Oral Maxillofac Surg,1990,28:85-88.6High AS, Robinson PA. Differences in adhesion and collag