海帶多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防作用

1、海帶多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防作用         【摘要】  目的：探討海帶多糖（laminaria japonica polysaccharides，LJP）對(duì)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防作用。方法：SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥對(duì)照組、LJP低劑量、中劑量和高劑量組。12周后，頸動(dòng)脈取血，檢測(cè)血清TG 、TC、LDL-C、HDL-C及血清超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）水平。取血后分離主動(dòng)脈，作病理形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果：LJP能顯著降低血清TG 、TC、LDL-C及MDA水平

2、，增高HDL-C水平和SOD活力，并呈劑量依賴性。主動(dòng)脈HE染色病理觀察顯示，LJP給藥組主動(dòng)脈內(nèi)皮脂質(zhì)沉積較模型組少見。結(jié)論：LJP對(duì)高脂飼料誘導(dǎo)的大鼠動(dòng)脈粥樣硬化具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)血脂，抗氧化作用有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  海帶多糖 動(dòng)脈粥樣硬化 血脂 超氧化物歧化酶 丙二醛 大鼠Abstract   Objective: To investigate the preventive effect of laminaria japonica polysaccharides(LJP) on experimental atherosclerosis in r

3、at. Methods: Sixty male rats were randomly divided into six groups: normal control, model control, simvastatin, LJP low dose, middle dose and high dose groups. All the rats were administered for 12 weeks , blood samples were drawn from carotid arteries of rats, and the levels of TC , TG, HDL-C , LDL

4、-C ,SOD and MDA in serum were measured by biochemical method. After blood samples were collected , the aorta samples were separated from the bodies, and then they were HE stained for the pathologic observation. Results: Data of the study demonstrated that the levels of TC, TG, LDL-C and MDA were dec

5、reased remarkably and the levels of HDL-C and SOD were increased in LJP group, which showed a dose-dependent effect. The result of HE staining suggested that the lipid deposits on aortic endothelium in LJP group were less than those in model group. Conclusion: LJP has preventive effect on the experi

6、mental atherosclerosis among the high cholesterol-fed rats. The anti-atherogenic effect of LJP seems to be closely related to regulating plasma lipid profile , and anti-oxydation.Key words Atherosclerosis; Laminaria japonica polysaccharides; Lipid level;  Superoxide dismutase; Malondiadehyde; R

7、at動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）的發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，根據(jù)其形成的機(jī)制，結(jié)合病理學(xué)、藥理學(xué)和臨床研究表明1，AS的治療應(yīng)該是一種多途徑的綜合治療，具有調(diào)節(jié)血脂、抗氧化、抗炎、抗免疫、抗血栓形成和保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的藥物都應(yīng)有抗AS的作用。目前用于臨床抗AS作用療效高的西藥，一般不良反應(yīng)較多且價(jià)格昂貴，長(zhǎng)期使用患者不能耐受，因此開發(fā)來(lái)源廣泛、副作用較低的抗AS藥物成為熱門課題。海帶（laminaria japonica aresch）屬海帶目海帶科，是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高且種植廣泛的大型褐藻。褐藻細(xì)胞壁主要由巖藻糖硫酸酯構(gòu)成，同時(shí)還含有少量的半乳糖、木糖、甘露糖。近年來(lái)研究表明，海

8、帶多糖（laminaria japonica polysaccharides, LJP）具有抗凝血、調(diào)節(jié)血脂、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等多種生物學(xué)活性，但目前對(duì)其抗動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制探討較少。本實(shí)驗(yàn)制備大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型，同時(shí)預(yù)防性給予不同劑量LJP，以探討其抗動(dòng)脈粥樣硬化的可能機(jī)制。1   材料和方法1.1   藥品和試劑   LJP（常州神馬藥業(yè)有限公司，批號(hào)200508002，含量20%）；膽固醇，購(gòu)于上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：060222；膽酸鈉，購(gòu)于上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：060301；丙基硫氧嘧啶，上海復(fù)星朝

9、暉藥業(yè)有限公司產(chǎn)，批號(hào)：060126；辛伐他汀，杭州默沙東制藥有限公司產(chǎn)，批號(hào)：060113；超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）含量測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所）。1.2   實(shí)驗(yàn)動(dòng)物   SD大鼠，體重180200 g，SPF級(jí)，由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SYXK（蘇）2002-0022。1.3   動(dòng)物模型的建立及分組給藥  60只SD大鼠在實(shí)驗(yàn)室用普通飼料喂養(yǎng)1周后,按體重隨機(jī)分為6組，每組10只，分籠喂養(yǎng)同時(shí)預(yù)防性給藥。動(dòng)物分組：（1）正常對(duì)照組；（2）模型組；（3）LJP低劑量組（250 mg

10、·kg-1·d-1）；（4）LJP中劑量組（500 mg·kg-1·d-1）；（5）LJP高劑量組（1000 mg·kg-1·d-1）；（6）陽(yáng)性藥對(duì)照組（辛伐他汀2 mg·kg-1·d-1）。除正常對(duì)照組予普通飼料外，其它各組均予高脂飼料（由膽固醇2%、膽酸鈉0.5%、丙基硫氧嘧啶0.2%、豬油10%、白糖5%和基礎(chǔ)飼料82.3%組成）喂養(yǎng)。海帶多糖和辛伐他汀均用生理鹽水配成混懸液，采用靜脈滴注給藥，給藥量為1 ml/100g，對(duì)照組和模型組給予同體積生理鹽水灌胃。每周稱大鼠體重1次，以調(diào)整給藥劑量。開始給藥時(shí)，

11、高脂飼料喂養(yǎng)大鼠一次性腹腔注射VitD3 70萬(wàn)IUkg。1.4   血脂測(cè)定   SD大鼠持續(xù)給藥12 周后，經(jīng)頸動(dòng)脈取血3 ml，待血液自凝后，3000 rpm，15 min，取血清，采用日產(chǎn)日立7600-020型生化分析儀測(cè)定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。1.5   抗氧化指標(biāo)檢測(cè)   SD大鼠持續(xù)給藥12周后，取血清，采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清中總SOD活力，TBA法測(cè)定MDA含量。1.6   病理組織學(xué)觀察   從主動(dòng)脈弓起始部至腹主動(dòng)脈髂前分叉處取下

12、主動(dòng)脈, 用4%多聚甲醛液固定，制作石蠟切片后經(jīng)HE染色，觀察主動(dòng)脈病理組織學(xué)變化。17   統(tǒng)計(jì)學(xué)方法   采用Stata7.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組比較采用單因素方差分析，兩組比較用q檢驗(yàn)，P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。         2   結(jié)   果21   海帶多糖對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂水平的影響   見表1。給藥12周，海帶多糖中劑量組對(duì)血清TC和LDL-C有降低作用，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

13、義（P0.05）；低劑量組對(duì)各指標(biāo)亦有一定作用（P0.05）。22   海帶多糖對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清SOD、MDA的影響   見表2。與模型組相比，LJP低劑量雖能降低血清MDA含量，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；LJP各組血清SOD活力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。23   海帶多糖對(duì)高脂誘發(fā)的大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的組織學(xué)影響  見圖1。由圖1可見，正常組動(dòng)脈血管壁結(jié)構(gòu)清晰、內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)完整無(wú)脫落；模型對(duì)照組動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)膜下見大量脂質(zhì)沉積及膽固醇結(jié)晶，中膜萎縮；陽(yáng)性對(duì)照組內(nèi)膜結(jié)構(gòu)基本完整，未見明顯脂質(zhì)沉積及膽固

14、醇結(jié)晶；海帶多糖給藥組動(dòng)物血管內(nèi)膜較光滑，偶見內(nèi)皮細(xì)胞缺失，內(nèi)皮下見少量脂質(zhì)沉積及膽固醇結(jié)晶。3   討   論脂質(zhì)代謝紊亂或脂蛋白組成異常是AS發(fā)病的重要因素之一。觀察血清TC、TG、LDL-C和HDL-C的變化，是判斷AS發(fā)生和發(fā)展的重要指標(biāo)，也是判斷藥物是否具有抗AS的主要指標(biāo)。大量資料表明，血漿中過(guò)高水平的TC、TG及富含它們的LDL、VLDL能促進(jìn)AS的形成和發(fā)展，并與AS的病程發(fā)展呈正相關(guān)；而HDL與AS的病程發(fā)展則呈負(fù)相關(guān)46。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LJP高劑量預(yù)防性給藥能顯著降低血清TC、TG、LDL-C水平及升高血清HDL-C的水平，且對(duì)HD

15、L-C的升高作用明顯高于對(duì)LDL-C的降低作用，提示LJP調(diào)節(jié)血脂的作用可能主要是通過(guò)增加HDL-C水平、促進(jìn)游離膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)完成的，但目前具體機(jī)制還不明確，仍需進(jìn)一步研究。AS與許多因素相關(guān),其中與自由基的相關(guān)性越來(lái)越受到人們的重視。高血脂和AS均可引起自由基代謝紊亂,機(jī)體清除自由基的能力下降，產(chǎn)生大量自由基。過(guò)多的自由基通過(guò)介導(dǎo)LDL氧化、促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)多種蛋白質(zhì)磷酸化及轉(zhuǎn)錄因子活化而激活炎癥相關(guān)因子的表達(dá)，改變內(nèi)皮細(xì)胞的功能，使單核細(xì)胞向血管壁浸潤(rùn)并釋放炎性分子，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖、移行和發(fā)生炎性免疫反應(yīng)，引起動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)生和發(fā)展 7，8。SOD是體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)中重要的酶，可以

16、歧化氧離子，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為水和氧氣，有利于維持機(jī)體正常的生理功能免受自由基損傷，它對(duì)機(jī)體的氧化和抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，SOD活力的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力。而自由基對(duì)組織的損傷一般是從細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化開始，通過(guò)檢測(cè)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化代謝產(chǎn)物MDA，可以間接了解自由基對(duì)組織細(xì)胞的損傷。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)大鼠血清SOD、MDA的檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)：未給予LJP的模型組大鼠血清總SOD活力較對(duì)照組明顯降低，MDA明顯升高；而預(yù)防性給予LJP各組與模型組比較，SOD活力增加，MDA水平降低，提示LJP可以發(fā)揮其抗氧化能力，提高細(xì)胞清除自由基能力，減少了自由基對(duì)細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，首先在這一環(huán)節(jié)抑

17、制了AS的發(fā)生發(fā)展?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 楊永宗，主編.動(dòng)脈粥樣硬化性心血管病基礎(chǔ)與臨床M.北京：科學(xué)出版社，2004：17-20.張 偉，李 鋒，王玉琴，等.二苯乙烯苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂和炎癥因子的調(diào)節(jié)作用J. 中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2007，12(5):516-520.廖建民,沈子龍，張 瑾. 海帶多糖中不同組分降血脂及抗腫瘤作用的研究J. 中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2002 ,33 (1) :55-57.山麗梅, 趙艷玲, 張錦超,等.新化合物PPVP 在大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型上抗動(dòng)脈粥樣硬化分子機(jī)制的研究J. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2004，20（3）：255-258. 歐陽(yáng)靜萍, 王保華, 劉永明,等. 阿魏酸鈉對(duì)高脂血癥家兔動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響及其機(jī)制的研究J. 中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2002，18 (2) :207-210.Assmann G, Nofer JR.Atheroprotective effects of high-density lipoproteinsJ. Ann