淺論氟伐他汀對(duì)高血壓腎臟硬化大鼠腎臟細(xì)胞凋亡的影響

1、淺論氟伐他汀對(duì)高血壓腎臟硬化大鼠腎臟細(xì)胞凋亡的影響 作者：華云， 韓楓， 李愛梅， 夏春英， 張國(guó)輝【摘要】 目的： 探討羥甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑氟伐他汀對(duì)氧化亞氮缺乏性高血壓大鼠腎臟細(xì)胞凋亡的影響。方法： 給予左旋硝基精氨酸甲酯(Lnitroargininemethylester，LNAME)建立氧化亞氮缺乏性高血壓腎臟硬化大鼠模型，觀察氟伐他汀對(duì)高血壓腎臟硬化大鼠Fas、FasL、Bax和Bcl2蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果： 氟伐他汀使高血壓腎臟硬化大鼠凋亡蛋白Fas、FasL、Bax表達(dá)減少，抗凋亡蛋白Bcl2表達(dá)增加。結(jié)論： 氟伐他汀能夠改善高血壓腎臟硬化，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡水平可能是其

2、機(jī)制之一。 【關(guān)鍵詞】 高血壓腎臟硬化; 氟伐他汀; 細(xì)胞凋亡Abstract Objective: To assess the apoptosis occurring in the kidney of SD rats induced by Lnitroargininemethylester(LNAME)over time and investigate the effects of fluvastatin treatment. Methods： Male SD rats were administered by LNAME to form hypertensive nephropathy，t

3、hen the rats were administered by fluvastatin，at last the rats had their kidneys removed to measure protein expression of Fas，F(xiàn)asL，Bax and Bcl2 genes by Western blot. Pathologic measurement had been taken. Results: After fluvastatin treatment the protein expression of Fas, FasL and Bax were more dep

4、ressed and the protein expression of Bcl2 was higher. Conclusion：Fluvastatin prevented or retarded hypertensioninduced renal nephropathy via inhibition of renal nephropathy fibrosis，the apoptosis might be one of the mechanisms.Key words hypertensive nephropathy; fluvastatin; apoptosis近來，隨著我國(guó)人口的老齡化和人

5、們生活方式的改變,原發(fā)性高血壓的患病率逐年升高，高血壓所導(dǎo)致的終末期腎衰發(fā)生率呈上升趨勢(shì)，在終末期腎衰竭患者中，高血壓腎臟硬化占第二位1。氟伐他汀是一種新型的3羥基3甲基戊二酰輔酶A(HMGCoA)還原酶抑制劑，不僅具有降脂作用，還是有一定的腎保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)通過觀察大鼠腎臟凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的變化，以探討氟伐他汀對(duì)高血壓腎臟硬化大鼠腎臟細(xì)胞凋亡的影響。1 材料與方法1.1 材 料1.2 方 法 2 結(jié) 果2.1 各組大鼠收縮壓的變化LNAME灌胃后，造模大鼠2周血壓即升高，到第4周時(shí)形成穩(wěn)定的高血壓模型，4周時(shí)收縮壓140 mmHg,均達(dá)到高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)。8周時(shí)正常對(duì)照組收縮壓為(102.

6、66.48)mmHg，高血壓腎臟硬化組為(213.813.44)mmHg，氟伐他汀組為(216.611.44)mmHg，高血壓腎臟硬化組和氟伐他汀組相比，血壓的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。16周時(shí)正常對(duì)照組收縮壓為(106.77.26)mmHg，高血壓腎臟硬化組為(207.311.53)mmHg，氟伐他汀組為(199.311.61)mmHg,高血壓腎臟硬化組和氟伐他汀組相比，血壓的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，氟伐他汀對(duì)血壓沒有影響，見圖1。 2.2 腎臟病理變化與正常對(duì)照組相比，高血壓腎臟硬化組大鼠多數(shù)腎小球存在嚴(yán)重硬化，腎小球萎縮，囊腔縮小，球囊明顯粘連，重度系膜細(xì)胞增生，基底膜增厚

7、明顯，單個(gè)腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)增多，HE染色可見系膜旁及系膜區(qū)嗜紅物質(zhì)基質(zhì)沉積，見圖2。Masson染色可見腎小球內(nèi)有較強(qiáng)的基質(zhì)膠原陽性染色(藍(lán)色)，見圖3。高血壓腎臟硬化組的腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)、腎小球硬化評(píng)分與正常對(duì)照組比較顯著提高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。氟伐他汀組與高血壓腎臟硬化組相比較，兩項(xiàng)指標(biāo)明顯好轉(zhuǎn)，見表1。表1 各組腎小球硬化評(píng)分和腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)比較2.3 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)結(jié)果高血壓腎臟硬化組腎皮質(zhì)的Bax、Fas和FasL 蛋白表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組，Bcl2蛋白表達(dá)水平顯著低于正常對(duì)照組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而氟伐他汀組Bax、Fas和FasL蛋白

8、表達(dá)水平與高血壓腎臟硬化組比較顯著降低，Bcl2蛋白表達(dá)水平與高血壓腎臟硬化組比較顯著升高，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。見圖4、5和表2。表2 各組大鼠Bax、Bcl2、Fas和FasL蛋白灰度值表達(dá)與正常對(duì)照組比較，a：P0.05;與高血壓腎臟硬化組比較，b：P0.053 討 論細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增生共同調(diào)節(jié)腎臟各部分細(xì)胞總量的平衡，細(xì)胞凋亡可參與高血壓腎臟硬化的發(fā)生, 并在調(diào)節(jié)靶器官細(xì)胞數(shù)量方面發(fā)揮重要作用。高血壓可能作為一種觸發(fā)因素, 激活凋亡基因表達(dá), 從而誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞凋亡, 參與高血壓所致腎損害。本研究結(jié)果表明，高血壓腎臟硬化組的Fas、FasL和Bax蛋白水平明顯高于正常

9、對(duì)照組，而Bcl2蛋白水平低于正常對(duì)照組。目前認(rèn)為腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞的凋亡是高血壓腎臟硬化的重要機(jī)制之一，細(xì)胞凋亡是腎小球硬化時(shí)腎小球細(xì)胞清除的重要形式。高血壓時(shí)腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡增加與下列因素有關(guān)： 系膜細(xì)胞分泌的異常細(xì)胞外基質(zhì)。在人腎小球腎炎和大鼠腎小球硬化模型中，系膜細(xì)胞凋亡主要出現(xiàn)在細(xì)胞外基質(zhì)成分和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的時(shí)期，提示在進(jìn)行性腎小球硬化時(shí)，腎小球細(xì)胞凋亡可能受其周圍細(xì)胞外基質(zhì)的控制。 TGF1的增加。新近的研究發(fā)現(xiàn)TGF1對(duì)腎小球細(xì)胞是否發(fā)生凋亡也起重要調(diào)控作用，TGF1可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的腎小球足突細(xì)胞凋亡。氟伐他汀使用8周后Fas和FasL的蛋白水平明顯低于高血壓腎臟硬化組，并且促凋亡基因Ba

10、x蛋白水平顯著低于高血壓腎臟硬化組，而抗凋亡基因Bcl2的蛋白水平顯著高于高血壓腎臟硬化組。氟伐他汀可能通過減少腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞的凋亡，改善腎臟硬化。已有研究表明，他汀類藥物能夠抑制細(xì)胞凋亡，辛伐他汀對(duì)糖尿病腎病晚期細(xì)胞凋亡有一定的抑制作用。Mizuguchi等研究表明，阿伐他汀顯著抑制單側(cè)輸尿管梗阻模型大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡,促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞的再生。Usui等研究表明，他汀類藥物通過抑制法呢基焦磷酸(FPP)和攏牛兒基攏牛兒焦磷酸(GGPP)的產(chǎn)生，阻斷了由Ras介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞，從而引起腎臟細(xì)胞的凋亡減少。他汀減少了小G蛋白p21RhoB的異戊二烯化，從而減少了血管平滑肌細(xì)胞的凋亡，通過調(diào)

11、節(jié)信號(hào)途徑而減少了細(xì)胞的凋亡。我們認(rèn)為在高血壓腎臟硬化后期以腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡為主要表現(xiàn)時(shí)，他汀類藥物可通過降低TGF1的作用而達(dá)到抑制細(xì)胞凋亡的作用。Zhang等發(fā)現(xiàn)阿伐他汀治療大鼠異體移植腎臟時(shí)，可降低TGF1的表達(dá)。體外研究也表明他汀類藥物可降低TGF1的表達(dá)，可能是通過降低血管緊張素來下調(diào)其表達(dá)的。另一方面他汀類藥物可通過調(diào)節(jié)纖溶酶原減少細(xì)胞外基質(zhì)沉積而減少細(xì)胞凋亡。他汀可通過調(diào)節(jié)纖溶酶原系統(tǒng)的活性使失活的纖溶酶原再生。董一飛等研究表明，無論在mRNA水平還是蛋白水平，阿伐他汀都能明顯抑制膠原和纖溶酶原激活物抑制劑1的表達(dá)，表明阿伐他汀能影響系膜細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)合成和降解，改善大鼠系膜細(xì)胞

12、的細(xì)胞外基質(zhì)積聚。他汀通過減少細(xì)胞外基質(zhì)沉積，使受其控制的腎小球細(xì)胞凋亡受到抑制。因此，我們認(rèn)為氟伐他汀可能通過減少細(xì)胞外基質(zhì)沉積和降低TGF1的表達(dá)而抑制了腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞的凋亡，改善了高血壓腎臟硬化。【參考文獻(xiàn)】 1 高秀林.高血壓腎損害發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展J.北京醫(yī)學(xué)，2007，29(9):559-561. 鄭桂安，吳可貴，萬建新.他汀類藥物對(duì)腎臟疾病非降脂的保護(hù)作用J.高血壓雜志，2006，14(2)：91-93. Yang B,Johnson TS,Thomas GL,et al.Expression of apoptosisrelated genes and proteins in exp

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