酶解法制備葡萄糖酸鈣

1、酶法制備葡萄糖酸鈣酶法制備葡萄糖酸鈣 月餅小分隊(duì)：白朋綱月餅小分隊(duì)：白朋綱 楊夢(mèng)雪楊夢(mèng)雪 姜昌熊姜昌熊 張雪冰張雪冰鈣是體內(nèi)含量最大的無(wú)機(jī)物，為維持鈣是體內(nèi)含量最大的無(wú)機(jī)物，為維持人體神經(jīng)，肌肉，骨骼系統(tǒng)，細(xì)胞膜人體神經(jīng)，肌肉，骨骼系統(tǒng)，細(xì)胞膜和毛細(xì)血管通透性正常功能所必需。和毛細(xì)血管通透性正常功能所必需。 葡萄糖酸鈣在中國(guó)和許多國(guó)家的藥典里都有葡萄糖酸鈣在中國(guó)和許多國(guó)家的藥典里都有收藏，是一種我們比較熟悉的的藥物，葡萄收藏，是一種我們比較熟悉的的藥物，葡萄糖酸鈣常常被用來(lái)做補(bǔ)鈣劑。它有利于人體糖酸鈣常常被用來(lái)做補(bǔ)鈣劑。它有利于人體骨質(zhì)的形成，對(duì)青少年骨骼發(fā)育有促進(jìn)作用骨質(zhì)的形成，對(duì)青少年骨骼

2、發(fā)育有促進(jìn)作用,同時(shí)由于它是一種抗過(guò)敏溶解度高，生理活同時(shí)由于它是一種抗過(guò)敏溶解度高，生理活性大的鈣營(yíng)養(yǎng)藥，可以治療生理性缺鈣癥和性大的鈣營(yíng)養(yǎng)藥，可以治療生理性缺鈣癥和血鈣引起的手足抽搐、痙攣等癥，以及治療血鈣引起的手足抽搐、痙攣等癥，以及治療軟骨、佝僂等缺鈣癥。軟骨、佝僂等缺鈣癥。發(fā)酵法：營(yíng)養(yǎng)鹽和黑霉菌種子營(yíng)養(yǎng)液，發(fā)酵法：營(yíng)養(yǎng)鹽和黑霉菌種子營(yíng)養(yǎng)液，進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵液加石灰乳中和，過(guò)濾，進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵液加石灰乳中和，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，結(jié)晶得到粗品，經(jīng)精制濾液減壓濃縮，結(jié)晶得到粗品，經(jīng)精制得到葡萄糖酸鈣。得到葡萄糖酸鈣。（生產(chǎn)成本較高，純化工藝較復(fù)雜生產(chǎn)成本較高，純化工藝較復(fù)雜 ） 試驗(yàn)原理（1

3、 1）- -淀粉酶淀粉酶(EC (EC 3.2.1.1)3.2.1.1)又稱液化型又稱液化型淀粉酶，它作用于淀淀粉酶，它作用于淀粉時(shí)，隨機(jī)的從淀粉粉時(shí)，隨機(jī)的從淀粉分子內(nèi)部切開分子內(nèi)部切開-1,4-1,4糖苷鍵，使淀粉水解糖苷鍵，使淀粉水解成糊精和一些還原糖。成糊精和一些還原糖。（2 2）糖化酶（）糖化酶（EC 3.2.1.3EC 3.2.1.3）又）又稱葡萄糖淀粉酶，它作用于淀稱葡萄糖淀粉酶，它作用于淀粉時(shí)，從淀粉分子的非還原端粉時(shí)，從淀粉分子的非還原端開始逐個(gè)地水解開始逐個(gè)地水解-1,4-1,4糖苷鍵，糖苷鍵，生成葡萄糖和一些低聚糖，且生成葡萄糖和一些低聚糖，且糖化酶還有一定的水解糖化酶還

4、有一定的水解-1,6-1,6糖苷鍵和糖苷鍵和-1,3-1,3糖苷鍵的能力糖苷鍵的能力(C6H10O5)n +nH2OnC6H10O6-淀粉酶淀粉酶糖化酶糖化酶 試驗(yàn)原理（3 3）葡萄糖氧化酶（）葡萄糖氧化酶（EC 1.1.3.4EC 1.1.3.4）是）是一種糖蛋白，它能夠特異性的氧化一種糖蛋白，它能夠特異性的氧化- -D-D-葡萄糖生成中間產(chǎn)物葡萄糖生成中間產(chǎn)物D-D-葡萄糖酸葡萄糖酸- - - -內(nèi)酯和過(guò)氧化氫，并發(fā)生非酶促反應(yīng)內(nèi)酯和過(guò)氧化氫，并發(fā)生非酶促反應(yīng)水解為葡糖酸。水解為葡糖酸。（4 4）過(guò)氧化氫酶）過(guò)氧化氫酶（EC1.1.1.1.6EC1.1.1.1.6）它以過(guò)氧化氫作它以過(guò)氧化

5、氫作為專一的底物，為專一的底物，催化過(guò)氧化氫分催化過(guò)氧化氫分解為水和氧氣保解為水和氧氣保護(hù)酶受到過(guò)氧化護(hù)酶受到過(guò)氧化氫的毒害。氫的毒害。4C6H12O6+3O2+2H2O4C6H12O7+2H2O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶2C6H12O7+CaCO3Ca(C6H11O7)2+CO2+H2O2H2O22H2O+O2過(guò)氧化氫酶過(guò)氧化氫酶500ML燒杯燒杯， PH試紙?jiān)嚰垼?玻玻璃棒璃棒， 水浴水浴鍋鍋， 電爐電爐， 石棉網(wǎng)石棉網(wǎng)， 溫溫度計(jì)度計(jì)， 濾紙濾紙， 漏斗漏斗， 電子電子天平天平， 量筒量筒等常用試驗(yàn)用等常用試驗(yàn)用器材器材實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材淀粉，淀粉， a-淀粉淀粉酶酶， 糖化酶糖化酶 ，

6、葡萄糖氧化葡萄糖氧化酶酶 ， 過(guò)氧化過(guò)氧化氫酶氫酶 ， NaOH Na2CO3 ，CaCO3， CaCl2， 碘液碘液 ，活性，活性炭等等炭等等試驗(yàn)試劑試驗(yàn)試劑 操作步驟操作步驟一，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線一，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線配置配置5個(gè)梯度個(gè)梯度濃度的濃度的葡萄糖葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液各取各取1mL分裝分裝于五支試管中于五支試管中設(shè)置一個(gè)空白設(shè)置一個(gè)空白組組分別加入分別加入2mL DNS試劑試劑沸水浴中沸水浴中2min后取出后取出加加蒸餾水至蒸餾水至15mL測(cè)定吸光值，測(cè)定吸光值，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線 操作步驟操作步驟 45g淀粉淀粉+150ml水水?dāng)嚢钄嚢?Na2CO3調(diào)調(diào)節(jié)節(jié)pH=6-6.4 加

7、入加入a-淀粉淀粉酶，酶，72加加熱攪拌熱攪拌15min 再加熱至再加熱至9030min 淀粉糊化淀粉糊化加加熱熱到到沸騰沸騰10min，酶酶失活失活二，液化二，液化冷卻至冷卻至55-60加入糖加入糖化酶化酶調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)ph=4.5于于60-65恒恒溫水浴溫水浴糖化糖化3-4h加入活加入活性炭，性炭，在在80攪拌攪拌30min抽濾抽濾，得到透得到透明糖液明糖液測(cè)量葡測(cè)量葡萄糖含萄糖含量量三，糖化三，糖化 操作步驟操作步驟四，四，雙酶氧化雙酶氧化葡萄糖+CaCO3 (過(guò)量) 加過(guò)氧化氫酶和葡萄糖氧化酶35攪拌反應(yīng)，通過(guò)pH判斷反應(yīng)進(jìn)行的程度反應(yīng)結(jié)束，加活性炭脫色獲得葡萄糖酸鈣溶液 操作步驟操作步驟 試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果吸光值吸光值1.4142.6822.8912.9583