呆聰液對(duì)老齡大鼠癡呆模型淋巴細(xì)胞增殖的影響

1、呆聰液對(duì)老齡大鼠癡呆模型淋巴細(xì)胞增殖的影響作者：趙淑梅 岳啟安 王紅艷 王益光 閻樂(lè)法 李光宗 尤敏 管福來(lái) 宮英 作者單位：261042山東省濰坊市，濰坊醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室(趙淑梅，岳啟安，王紅艷，尤敏，管福來(lái)，宮英);生理學(xué)教研室(王益光);中醫(yī)學(xué)教研室(閻樂(lè)法);解剖學(xué)教研室(李光宗) 【摘要】 目的 探討中藥呆聰液對(duì)老齡鼠癡呆模型免疫功能的影響。 方法 選擇22月齡的老齡SD大鼠, 腦內(nèi)注射海人酸，選擇性破壞神經(jīng)元，制備學(xué)習(xí)和記憶功能障礙的老齡大鼠癡呆模型, 然后用不同劑量的中藥呆聰液給予治療1月，用3HTdR摻入DNA法觀察呆聰液對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果 低劑量呆聰液實(shí)驗(yàn)組可

2、提高癡呆動(dòng)物的淋巴細(xì)胞增殖能力, 與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，中劑量和大劑量實(shí)驗(yàn)組可顯著提高癡呆動(dòng)物的淋巴細(xì)胞增殖能力, 與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);但中劑量和大劑量實(shí)驗(yàn)組組間無(wú)顯著性差異。 結(jié)論 呆聰液可提高癡呆動(dòng)物模型的細(xì)胞免疫功能。【關(guān)鍵詞】 呆聰液,癡呆動(dòng)物模型,淋巴細(xì)胞增殖【Abstract】Objective To explore the effect of Daicong solution on immune function in aged rat dementia model. Methods 22month old rats whose ba

3、sal nuclei were destroyed by kainic acid were used as aged dementia model which had learning and memory disability. After treated with Daicong solution for one month, lymphocyte proliferation was tested by 3HTdR incorporation methods. Results Lymphocyte proliferation function in low dosage treated g

4、roup were significantly increased than those in model groups (P0.05);Lymphocyte proliferation function in middle and higher dosage groups were remarkably increased compared with model groups (P0.01). Conclusions Daicong solution could improve lymphocyte proliferation in aged rat dementia model.【Keyw

5、ords】 daicong solution; dementia animal model; lymphocyte proliferation老年癡呆癥的發(fā)病率逐漸上升，給社會(huì)和家庭生活帶來(lái)很大負(fù)擔(dān)，深入探討老年癡呆癥的發(fā)病機(jī)制及有效的預(yù)防和治療尤為重要。中藥呆聰液在臨床上治療老年癡呆癥已獲得顯著治療效果，為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)制,我們利用老齡鼠癡呆模型觀察了呆聰液對(duì)老齡大鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響, 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,22月齡的清潔級(jí)SD大鼠50只，雌雄混用，先在水迷宮中練習(xí)并記憶逃生的位置。隨機(jī)選擇10只，作為老齡正常對(duì)照

6、組。除老齡正常對(duì)照組外，其余大鼠均用3%戊巴比妥鈉腹腔注射(35 mg/kg)，麻醉后固定于腦立體定位儀上，參照大鼠腦定位圖譜，在鼠腦的雙側(cè)無(wú)名質(zhì)區(qū)域(相當(dāng)于人類Meynert基底神經(jīng)核)注入興奮性氨基酸毒素海人酸1 l(1 g/L)，選擇性破壞該區(qū)域的神經(jīng)元，制備癡呆動(dòng)物模型，以學(xué)習(xí)和記憶功能障礙明顯者為合格。1.2 主要藥物與試劑 (1)呆聰液由人參、生地、知母和黃芪等天然藥物組成, 經(jīng)濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科加工配制而成;(2)3HTdR: 北京中國(guó)原子能科學(xué)研究院提供, 1 Ci/ml包裝;(3) 植物血凝素(PHA): 廣州市醫(yī)藥工業(yè)研究所產(chǎn)品, 批號(hào)20032;(4) RPMI16

7、40營(yíng)養(yǎng)液, 美國(guó)產(chǎn)。1.3 主要儀器 FJ2101G雙道液體閃爍計(jì)數(shù)器，西安國(guó)營(yíng)二六二廠生產(chǎn)，日本產(chǎn)細(xì)胞計(jì)數(shù)器;國(guó)產(chǎn)細(xì)胞收集器和751紫外分光光度計(jì)。1.4 干預(yù)措施 40只老齡癡呆模型大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只。在各組動(dòng)物喂養(yǎng)飼料、飲用水及生活環(huán)境完全相同的情況下，呆聰液用藥組分別按5 g/(kg?d)(劑量組)、10 g/(kg?d)(劑量組)和20 g/(kg?d)(劑量組)生藥的水提液灌胃給藥，癡呆模型對(duì)照組和老齡正常對(duì)照組均用等量的生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥1月后，心臟取血進(jìn)行檢測(cè)。1.5 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)方法見參考文獻(xiàn)1。1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，采用方差檢驗(yàn)。

8、P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 呆聰液對(duì)老齡鼠癡呆模型淋巴細(xì)胞增殖的影響 老齡癡呆模型組摻入3HTdR的量無(wú)論空白對(duì)照還是PHA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)都顯著低于正常對(duì)照組(P0.01), 顯示癡呆模型組嚴(yán)重影響腦M受體合成2的同時(shí)還嚴(yán)重影響細(xì)胞免疫功能。 而劑量組大鼠的淋巴細(xì)胞增殖能力明顯提高 (P0.05)，劑量組大鼠的淋巴細(xì)胞增殖能力亦明顯提高(P0.01)，恢復(fù)到老齡大鼠的正常水平。劑量組與劑量組相比較，無(wú)顯著性差異。見表1。表1 呆聰液對(duì)老齡大鼠癡呆模型淋巴細(xì)胞增殖的影響3 討論老年性癡呆是以記憶障礙和智能減退為主要特征的慢性疾病。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道, 老年性癡呆病人腦內(nèi)乙酰膽

9、堿與癡呆的形成密切相關(guān), 它主要作用于分布在大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體等部位的M受體上2。因此，由Meynert 基底核發(fā)出的神經(jīng)元缺失則必伴有膽堿能功能的減退, 癡呆患者腦中膽堿能活性降低在老年性癡呆患者的記憶與認(rèn)知障礙中起著重要作用3。高血壓及糖尿病等各種原因?qū)е碌哪X血流量減少，可明顯增加癡呆的發(fā)病率4。中藥呆聰液對(duì)老齡鼠癡呆模型腦M受體和免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，細(xì)胞免疫與體液免疫和腦M受體對(duì)癡呆的發(fā)生關(guān)系極為密切, 結(jié)果又很相似, 即當(dāng)免疫功能出現(xiàn)極度低下時(shí), 其腦M受體的合成也顯著降低, 當(dāng)中藥呆聰液明顯提高淋巴細(xì)胞增殖水平時(shí), 其腦M受體也相應(yīng)恢復(fù)到正常水平5。但是，細(xì)胞免疫恢復(fù)的程

10、度隨呆聰液的劑量大小而出現(xiàn)顯著性差異(P 0.01), 即劑量 組可增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的增殖，與癡呆模型對(duì)照組相比較差異顯著(P0.05)。 因在老齡鼠癡呆模型基礎(chǔ)上用藥, 劑量 組的結(jié)果尚未恢復(fù)到正常對(duì)照組水平(P0.05),說(shuō)明在一定范圍內(nèi), 適當(dāng)增加用藥劑量, 其治療效果更顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明, 呆聰液顯著提高淋巴細(xì)胞的增殖水平。機(jī)體在生化反應(yīng)中產(chǎn)生的自由基對(duì)老年性癡呆患者腦組織進(jìn)行性退化具有重要作用6，文獻(xiàn)報(bào)道老齡大鼠腦組織和血漿中過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)和單胺氧化酶(MAO)等的含量明顯高于6月齡大鼠，而超氧化物歧化酶(SOD)及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)等明顯降低7。經(jīng)呆聰液治療后，可提高老齡大鼠血清SO

11、D活性，降低LPO含量，降低MAO和膽堿酯酶(CHE)的活性8，說(shuō)明呆聰液可用于治療老年性癡呆癥?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 趙淑梅，張?zhí)珖?guó)，岳啟安，等.豬胸腺免疫抑制提取物超濾組分2對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響J.中國(guó)生化制藥雜志，2003，24(3)：133134.2 朱振鐸, 劉瑞霞, 霍青, 等. 老年癡呆病的中醫(yī)臨床與實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展J. 山東中醫(yī)雜志, 1997，16(7)：334335.3 劉道寬. Alzheimers病的研究進(jìn)展點(diǎn)滴J. 中華神經(jīng)精神科雜志, 1995，28(4)：239240.4 劉慧英，葉翠飛，李斌，等. 老年人血管性癡呆的臨床特點(diǎn)分析J. 實(shí)用老年醫(yī)學(xué)，2005，19(5)：273274.5 岳啟安，趙淑梅，閻樂(lè)法，等. 呆聰液對(duì)老齡癡呆動(dòng)物模型腦M受體的影響J. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000, 20(11)：846847.6 趙偉康. 老年癡呆的實(shí)驗(yàn)研究J. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1992，12(7)：392393.7 黃玉芬，芐慧敏，郭海英，等. 開心散對(duì)老年大鼠記憶力和單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響J.