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文檔簡介
1、中 藥 藥 理 實 驗 指 導 云南中醫(yī)學院中藥學院中 藥 藥 理 實 驗 室第一章 作用于消化系統(tǒng)藥理實驗消化系統(tǒng)由消化道和與其相連的許多消化腺組成,消化道通過運動將消化道內容物得到混合并向消化道遠端推送,消化腺通過分泌消化液消化食物,使食物被分解為小分子物質有助于吸收。統(tǒng)消化系統(tǒng)藥物研究主要包括消化器官運動實驗、消化器官分泌實驗、抗?jié)?、抗肝損傷、利膽等藥理實驗方法。消化器官運動實驗方法分為離體消化道器官標本運動實驗和在體消化道器官運動實驗。離體器官標本運動實驗: 一般選用兔、豚鼠和大鼠的胃、腸、膽囊等器官的腸段或肌片,在恒溫及充氧的營養(yǎng)液中通過拉力傳感器與記錄儀連接,將藥物直接加入浴柄槽
2、內,描記胃腸平滑肌收縮振幅、收縮頻率、收縮張力的變化。在體器官運動實驗:胃排空,腸推進,壓敏傳感器測定囊內壓,貼壁傳感器測定胃、腸壁平滑肌或膽囊舒縮運動,以及生物電研究消化器官電生理變化等方法。消化器官分泌實驗主要通過插管或造瘺等方法收集胃液、腸液、胰液及膽汁,然后對上述消化液進行分析。胃酸測定可用酸堿滴定法或酸度計測定法,胃蛋白酶測定可用凝乳法、麥特 (Mett)毛細玻管法、hmon-Mimhy 改良法等, 糜蛋白酶測定可用分光光度法、合成多肽法等???jié)儗嶒炇窃诮嶒炐詽兡P偷幕A上,觀察藥物對胃黏膜損傷的保護作用。引起實驗性潰瘍的方法分為急性潰瘍與慢性潰瘍兩大類。急性潰瘍模型有: 幽
3、門結扎性潰瘍、應激性潰瘍(水浸、寒冷、失血性休克)、藥物誘發(fā)必型潰瘍 ( 非甾體類抗炎藥、組胺、利血平等) 、黏膜壞死物質型潰瘍(100%乙醇、0.6N HC、25%NC)等;慢性潰瘍模型有:醋酸燒灼性潰瘍,熱燒灼性潰瘍等,使用動物多為大鼠。同時還可測定胃組織中相關活性物質的含量,如前列腺素、氨基己糖、 CAMP、5- 羥色膠、組胺、胃黏膜血液量等物質,可對藥作用機制進行研究 。引起實驗性肝損傷的方法有:急性中毒性肝炎、肝壞死模型: 四氯化碳肝損傷模型、撲熱息痛肝損傷模型、D-半乳糖胺肝損傷模型等。脂肪肝、肝纖維化、肝硬化模型:乙硫氨酸脂肪肝模型、二甲基亞硝胺肝纖維化模型、四氯化碳反復給予肝硬
4、化模型等。阻塞性黃疸模型:一茶異硫氨酸醋或膽管結扎均可致膽汁郁積型黃疸模型。免疫性肝損傷模型:取異種或同種動物的肝提取物作為抗原免疫純系小鼠可制備該模型??蓹z測的指標有血清或肝臟AST 、AIT 活性,P-450 活性,肝糖原、血清總蛋白、白蛋白含量,血NH3、膽紅素濃度等。作為抗脂肪肝、肝硬化藥物,還可檢測肝臟膠原蛋白含量、凝血酶時間等,同時可進行病理組織學觀察。利膽實驗主要有正常大鼠的膽汁流量測定,離體膽囊肌片舒縮活動描記、整體動物的膽道內壓測定, 由細菌造成化膿性膽管炎后對模型動物的膽汁流量、膽汁成分含量、 od 氏括約肌張力等指標進行測定,對膽石標本進行膽固醇、鈣、膽紅素等成分的含量測
5、定等。涉及消化系統(tǒng)藥理實驗方法研究的常見中藥有理氣藥、溫里藥、補氣健脾藥。第一節(jié) 藥物對小鼠胃腸運動的影響一、藥物對小鼠胃排空的作用【目的】 學習小鼠胃排空的實驗方法。觀察胃動力藥及健脾行氣藥物對胃排空功能的影響?!驹怼课概趴帐侵肝竷仁趁佑晌概湃胧改c的過程。 進食后近端胃可通過迷走神經調節(jié)而出現受容性舒張,起到暫時容納與儲存食物的作用,然后通過緩慢持續(xù)地收縮,壓迫其內容物向胃竇方向移動,再依賴胃竇收縮及胃和十二指腸協(xié)調運動而排空。通過觀察胃動力藥嗎丁琳及健脾行氣藥枳術丸對小鼠定量灌服營養(yǎng)性半固體糊劑20分鐘后,胃全重和胃凈重之差的胃內殘留物重量,計算胃內殘留物占所灌半固體糊的重量百分比為
6、胃內殘留率,可了解藥物對胃排空運動的影響?!静牧稀縿游?小鼠,體重1822g。藥品:lmg/ml嗎丁琳混懸液、1g/ml枳術丸水煎劑。營養(yǎng)性半固體糊劑: 16g奶粉、8g葡萄糖、8g淀粉,攪拌均勻,加以蒸餾水至300ml攪拌均勻。主要器材:手術器械、電子天平、小燒杯、小鼠灌胃器。【方法】取小鼠 , 禁食不禁水18h 后,稱重, 編號,隨機分成三組。各組均按0.2 ml/10g體積灌胃給藥,空白對照組給予等容積蒸餾水,50 min后各組均ig給予營養(yǎng)性半固體糊 0.6 ml/只。20min后脫頸椎處死動物,剖開腹腔,結扎胃賁門和幽門后,取胃,用濾紙拭干后稱全重,然后沿胃大彎剪開胃體,洗去胃內容物
7、后拭干,稱凈重。以胃全重和胃凈重的差值為胃內殘留物重,胃內殘留物重占所灌半固體糊的重量百分比為胃內殘留率。胃中殘留率 (%)=胃中殘留物/所灌半固體糊X100%實驗結束后數據作全班統(tǒng)計,計算各組胃中殘留率的平均數 (X) 和標準差 (s), 以t檢驗統(tǒng)計法進行組間比較。【結果】將結果填入表 7-1-1 中。表 7-1-1 嗎丁啉對小鼠胃排空的影響組別 劑量 (g/kg) 動物數 (n) 胃中殘留率 (%)'空白對照組 嗎丁琳組枳術丸組【注意事項】實驗前小鼠必須嚴格禁食18h, 最好將小鼠置于能漏出糞便的代謝籠內。解剖分離胃體的部位應盡量仔細, 以胃內容物漏出影響實驗結果。如是觀察濃度較
8、大中藥煎劑的作用要注意藥物殘留也會影響實驗結果。胃內容物的性狀與化學成分均可影響胃排空和速度?!舅伎碱}】嗎丁琳的主要藥理作用有哪些 ? 其促進胃排空的作用機制是什么 ?從藥理學的角度解釋枳術丸組為什么常用于功能性消化不良的治療?二、藥物對小鼠小腸運動的影晌【目的】學習用炭未推進法測定動物小腸運動的實驗方法。觀察M受體阻斷藥阿托品和瀉下藥芒硝對小腸運動的影響。【原理】消化管內容物的移動速度與胃排出時間、小腸的運動及消化管內容物的流動性有關。小腸的運動受腸神經及外來神經的控制,當機械和化學的刺激作用于腸壁感受器時,可通過局部的壁內反射而引起小腸蠕動增加,而副交感神經興奮時可增強小腸運動,交感神經興
9、奮則產生抑制作用。利用口服炭末在腸道不被吸收的原理,以炭末作為指示劑,測定在一定時間內炭末在腸道的推進距離,可觀察M受體阻斷藥和瀉下藥對小腸推進的作用?!静牧稀縿游?: 小鼠,體重 1822g 。藥品 :用含有2%阿拉伯膠的水溶液制成12%活性炭末混懸液、生理鹽水、鹽酸阿托品、100%芒硝水溶液。主要器材 : 手術剪、眼科懾、直尺、注射器、灌胃針。【方法】取禁食不禁水20h 的小鼠, 隨機分組, 稱重,編號。各給藥組動物分別皮下注射阿托品(10/),灌胃給予200%芒硝水溶液(0.2/10),空白對照組給予等容積蒸餾水。灌胃體積均為0.2ml/10g,20 min后各組均灌胃給予10%的炭黑混
10、懸液0.6 ml/只。20min后脫頸椎處死動物,剖開腹腔,分離腸系膜,剪取上端至幽門 ,下端至回盲部的腸管,輕輕將小腸拉直,準確量取小鼠幽門至炭黑推進前沿的長度以及小鼠小腸總長,按下式計算推進百分率。炭黑推進百分率(炭未從幽門部到推進前沿的移動距離/小鼠小腸總長)×100%實驗結束后數據作全班統(tǒng)計 , 計算各組炭末推進百分率的平均數 (X) 和標準差 (s), 以t檢驗統(tǒng)計法進行組間比較。【結果】將結果填入表 7-2-1 中。表 7-2-l 阿托品、芒硝對小鼠小腸運動作用的影響組別 劑量 (g/kg) 動物數 (n)碳末移動距離() 小腸全長() 碳末推進率 (%)空白對照組鹽酸阿
11、托品組芒硝水溶液組【注意事項】給藥至處死動物的間隔以及處死至取出腸管的時間時間必須一致。剪取腸系膜、腸管以及拉直腸管時動作輕柔,不可用力牽拉。當因禁食不完全腸道內可能出現食物殘留或與藥物顏色難于分辨時,可剪破一點腸管, 擠出腸內容物,炭末為黑色顆粒狀,食物等殘留則為褐色軟糊狀,可加以區(qū)別。【思考題】中藥瀉下藥根據瀉下作用機制可分為幾類 ? 芒硝屬于哪一類 ?阿托品的藥理作用、臨床運用及不良反應是什么?三、藥物對家兔在體胃腸運動的影響【目的】學習在體胃腸運動的實驗方法。觀察膽堿酯酶抑制新斯的明對家兔胃腸運動的影響。【原理】胃以蠕動的形式對胃內食物進行機械性消化,再將食糜排入十二指腸,小腸通過分節(jié)
12、運動與蠕動使腸內容物得到充分混合并被推向腸的遠端。將腸運動換能器直接縫在胃壁或腸壁上,能把胃腸運動時平滑肌張力的變化和運動的頻度客觀地記錄下來?!静牧稀縿游?家兔,體重22.5 kg。藥品:新斯的明。試劑: 烏拉坦溶液、生理鹽水。主要器材:手術器械、胃腸運動換能器、生物機能實驗系統(tǒng)、家兔手術固定臺、注射器、紗布、縫合針線?!痉椒ā咳〗?8 h家兔,隨機分組, 稱重,編號。用烏拉坦按500mg/kg耳緣靜脈緩慢注入,麻醉后將兔背位固定于家兔手術固定臺,在兔右下腹回盲部作一34cm切口,止血后暴露回盲部45cm的回腸段,將胃腸運動換能器按與環(huán)行腸平行的方向固定于回腸。換能器的信號輸入端與BL42
13、0E生物機能實驗系統(tǒng)相連接。描記回腸收縮的胃腸運動換能器裝置固定后穩(wěn)定30分鐘,先記錄正常回腸收縮曲線,然后分別腹腔注射新斯的明(0.1/)和生理鹽水,觀察2小時內回腸收縮曲線的變化。比較收縮頻率和收縮幅度的變化,波動次數為收縮次數,上下波動的距離為收縮幅度?!窘Y果】將結果填入表 7-2-2 中。表 7-2-2 新斯的明對家兔在體胃腸運動的影響 收縮頻率(次/分) 收縮幅度(cm)組 別 劑 量 給藥前 給藥后 給藥前 給藥后生理鹽水組新斯的明組【注意事項】縫合固定胃腸運動換能器時不要過度損傷胃腸管。手術以鈍性分離為主,避免出血過多?!舅伎碱}】 在體實驗與離體實驗各有什么優(yōu)缺點、新斯的明的藥理
14、作用及臨床運用。第二節(jié) 藥物抗胃潰瘍作用的影響1、藥物對大鼠胃黏膜的保護作用【目的】學習造成大鼠急性胃潰瘍的實驗方法。觀察理氣藥木香及調和肝脾藥痛瀉要方對胃黏膜的保護作用。【原理】乙醇可通過減少胃黏膜中前列腺素、氨基已糖含量、降低胃黏膜血流量,減少胃黏膜跨膜電位差、破壞主細胞減少黏液分泌、引起胃黏膜微循環(huán)障礙等,從而破壞了胃黏膜屏障的完整性導致潰瘍。觀察藥物對乙醇所致急性胃黏膜損傷程度,可了解藥物對胃黏膜的保護作用。【材料】動物:大鼠 , 體重 200 250go藥品:0.4/木香丙酮提取物(用5倍量丙酮浸泡木香24h, 浸泡期間振搖數次,過濾,濾液揮盡丙酮后,將剩余物用適量阿拉伯樹膠及蒸鎦水
15、研磨,制成所需濃度的藥液 )、1.2g/ml 的痛瀉要方水煎液 (炒白術4Og 、炒白茍32 g、炒陳皮 19g 、防風29g ,水煎成100ml, 紗布過濾,濾液用適量阿拉伯樹膠混懸 即得)。試劑:無水乙醇、福爾馬林溶液、生理鹽水。主要器材:大鼠固定板、大鼠灌胃器注射器、手術剪器械、直尺。 【方法】取大鼠,禁食不禁水 24h 后隨機為三組, 稱重,編號。分別灌服5%阿拉伯的水溶液及受試藥物,1小時后每只大鼠灌服無水乙醇(1/100),再過1小時用CO2處死動物,形取胃,結扎賁門,由幽門注入1%的福爾馬林溶液液10,結扎幽門, 再將胃浸泡于1%福爾馬林溶液中10分鐘, 以固定胃內外層。沿胃大彎
16、剪開胃,用自來水輕輕沖洗去胃內容物,將胃平展在玻璃板上,用棉球輕輕拭去附掛于胃黏膜上的血絲, 觀察腺胃部的胃黏膜損傷程度,可見黏膜充血、水腫、縱行深褐色條索狀潰瘍,。將每只大鼠所有損傷長度的總和作為 該大鼠的潰瘍指數。也可用打分的半定量方式表示潰瘍指數:瘀血點為1分,線狀痕血長度小于lmm 者為2分, 12mm 者為3分 ,34mm 者為4分,大于5mm 者為 5 分,全胃分數的總和為該鼠的潰瘍指數,以下列公式計算潰瘍抑制百分率和潰瘍發(fā)生百分率。潰瘍抑制百分率(%)潰瘍=對照組潰瘍指數-給藥組潰瘍指數/對照組潰瘍指數X100%潰瘍發(fā)生百分率(%)潰瘍 =形成潰瘍動物數/實驗動物數X100%幽門
17、實驗結束后作全班數據統(tǒng)計,計算各組潰瘍抑制百分率和潰瘍發(fā)生率的平均數 ( X) 和標準差 (s), 以 t 檢驗統(tǒng)計法進行組間比較?!窘Y果】將結果填入表 7-1-1 中。表 7-1-1 木香、痛瀉要方對大鼠乙醇型粘膜損傷的影響組別 劑量(g/kg) 動物數 (n) 潰瘍指數 潰瘍抑制率 (%) 潰瘍發(fā)生率 (%)空白對照組 木香組痛瀉要方組【注意事項】胃黏膜損傷程度與乙醇濃度及灌服時間有關。注入胃內的福爾馬林溶液量要準確,以免影響實驗結果。【思考題】胃黏膜屏障保護藥有哪些?結合實驗結果分析木香、痛瀉要方理氣及調和肝脾的藥理機制。第二節(jié) 藥物對大鼠膽汁流量的影晌【目的】學習收集麻醉大鼠膽汁的實驗
18、方法。觀察利膽藥物對大鼠膽汁流量的影響?!驹怼磕懼筛渭毎掷m(xù)分泌,儲存于膽囊,在脂肪的吸收與消化過程中起重要作用,膽汁分泌與排泄障礙可引起消化系統(tǒng)癥狀,高濃度的膽鹽是強烈的致炎物質,形成早期的化學性炎癥,為細菌入侵引起急性感染提供有利條件。大鼠無膽囊,其肝臟分泌的膽汁經肝管、膽總管直接進入十二指腸。通過觀察利膽藥去氫膽酸及理氣藥青皮對膽汁流量變化的影響,能客觀地反應肝臟分泌膽汁的能力?!静牧稀縿游?大鼠,雄性,體重200g以上。藥品 :2%去氫膽酸納溶液、2g/m青皮水煎液。試劑 :10% 烏拉坦溶液、生理鹽水。主要器材:手術剪、眼科剪、眼科懾、膽汁引流管 ( 直徑1mm塑料管)、帶刻度的
19、小試管、大鼠手術固定板、注射器、紗布?!痉椒ā咳〗巢唤?2h 的大鼠, 隨機分組, 稱重,編號。以烏拉坦 (1g/kg)麻醉,仰位固定,開腹后在右上腹找到胃幽門部,以幽門部為標準,翻轉十二指腸,即可見到白色的十二指腸乳頭部,從乳頭部追蹤到膽總管,用眼科懾將覆蓋在表面的被膜剝離少許以暴露出膽總管, 結扎下端。然后在接近十二指腸開口處的膽總管,向肝臟方向剪"V" 形小口,將膽汁引流管插入膽總管,插入引流管后可見淡黃色液體順管流出即是膽汁,結扎固定,手術后用止血鉗夾閉腹腔,以生理鹽水濕潤的紗布覆蓋夾閉部位,穩(wěn)定10分鐘后,用帶有刻度的小試管收集膽汁30分鐘作為給藥前的膽汁流量
20、,之后給藥組與空白對照組由十二指腸分別給予2%去氫膽酸納1m/100g或同容量的生理鹽水,給藥后每 3分鐘收集膽汁1次,共 23 次,記錄膽汁流量,并計算給藥后膽汁流量增加百分率。膽汁流量增加百分率 (%)= (給藥后膽汁流量 -給藥前膽汁流量)/ 給藥前膽汁流量×100%實驗結束后作全班數據統(tǒng)計,計算各組膽汁流量增加百分率的平均數 ( X ) 和標準差(s), 以 t 檢驗統(tǒng)計法進行組間比較。中藥可選 2 g /m的青皮水煎液,灌服量為lm/100g。其他方法同上。 【結果】將結果填入表 7-3-1 中。表 7-3-l 去氫膽酸納對大鼠膽汁流量的影響組別 藥前膽汁流量 (m) 藥后
21、膽汁流量(m) 膽汁流量增加百分率() 30 60 90 30 60 90 空白對照組 去氫膽酸納組【注意事項】大鼠膽總管直徑僅 0.5mm1.Omm, 應選擇合適的插管。由于膽汁流量的差異較大 , 故常用自身前后比較的方法。由于體內雌激素水平會影響膽汁流量及膽汁中成分的比例,最好選用雄性大鼠。巴比妥類藥物可增加膽汁分泌和膽酸等物質的含量,故一般不用于該實驗的動物麻醉。膽總管切口應接近十二指腸壺腹部,插管頂端應接近肝臟。 【思考題】利膽藥的作用方式有哪一些 ? 分別有哪些代表藥物 ?理氣藥治療氣滯、氣逆的藥理學基礎是什么?第三章 中藥鎮(zhèn)痛作用的實驗方法 凡能選擇性地緩解或消除疼痛的藥物稱為鎮(zhèn)痛
22、藥(analgesics)。包括麻醉性鎮(zhèn)痛藥和非麻醉性鎮(zhèn)痛藥。 實驗資料證明,許多祛風濕藥,祛瘀止痛藥常具有不同程度的鎮(zhèn)痛作用。它們除在中藥復方中配伍應用外,其中延胡索、秦艽、牛膝、徐長卿、防己、蒼耳子、七葉蓮,白屈萊(山黃連)均已制成不同劑型用于頭痛、肌肉痛、關節(jié)痛、神經痛以及胃腸痙攣性疼痛。疼痛作為主觀的感受和體驗,是一種復雜的生理心理反應。動物實驗只能間接借助由于傷害性刺激引起的痛反應作為測量標準。篩選鎮(zhèn)痛藥的方法按刺激性質可分為四大類,即熱刺激法,電刺激法、機械刺激法和化學刺激法。初篩常用方法1 熱刺激法 利用一定的溫度刺激動物體表的某個部位,使產生疼痛反應。最常用的是小鼠熱板法和大鼠
23、輻射熱甩尾法。熱刺激法用于篩選作用較強的鎮(zhèn)痛藥較為適宜。 小鼠熱板法 原理 把小鼠放在事先加熱到55C的金屬盤(鐵皮,鋁、銅均可)上以舔后足作為“疼痛反應指標。觀察給藥前、后痛閾值的變化。 藥品 延胡索提取物 操作方法 小鼠分為3組:(空白、陽性、給藥組),給藥組小鼠灌胃延胡索0.1ml/10g,30min后將恒溫水浴調節(jié)至55±05C,金屬盤的底部接觸水面,加熱后作為熱刺激,用秒表記錄小鼠自投入熱板至出現舔后足的時間(s)作為該鼠的痛閩值。給藥前先測定每只小鼠的痛聞(共測二次,以平均值不超過30s者為合格)。給藥后每隔121h測定一次,連續(xù)數次,如痛閾值超過60s,即停止測試而按6
24、0s計(時間過久,易燙傷足部)。實驗結束,按所測之痛閾平均值計算痛閾提高百分率。 以時間為橫座標,痛閾提高百分率為縱座標,繪出鎮(zhèn)痛作用時程曲線,以分析藥物的作用強度、作用開始時間和持續(xù)時間。評價 本法簡便易行,痛感指標明確易觀察,對組織損傷最小,動物可反復利用,故為常用的方法之一。但對作用較弱的鎮(zhèn)痛藥不太敏感。注意點 動物體重對結果有影響,小鼠以20g左右為宜。 小鼠個體差異大,應挑選痛閾值在530s以內者為合格,不到s9或超過30s或喜跳躍者均剔除. 小鼠以雌性為好,雄性因陰囊受熱后易松弛,與“熱板接觸而致反應過敏。 室溫對實驗有影響,過低小鼠反應遲鈍,過高則敏感,易引起跳躍。思考題 延胡索
25、的鎮(zhèn)痛機理及主要成分是什么。第四章 作用于心血管系統(tǒng)藥理實驗心血管系統(tǒng)藥物研究主要包括強心、降壓、抗心律失常、抗心肌缺血等藥理實驗方法。強心實驗方法可分為離體心臟實驗法和在體心臟實驗法。離體心臟實驗法:經典方法有斯氏法和八木氏法灌流離體蛙心或蟾蜍心臟、Langendorff法灌流哺乳類動物離體心臟,近年來,離體乳頭肌實驗、離體心房肌實驗和體外心肌培養(yǎng)實驗方法更為常用。在體心臟實驗法:可用蛙、大鼠、兔、貓、犬的在體心臟同步觀察藥物對心肌收縮力、頻率、節(jié)律、血壓、心電圖等影響。血壓的測定有直接測壓法(插管法)和間接測壓法(大鼠尾動脈測壓法、犬頸動脈皮鞘法)。降壓藥的研究常分為三個步驟:首先觀察藥物
26、對正常麻醉動物的急性降壓作用:將動物麻醉后,直接測量其頸動脈或殷動脈的血壓。此法簡單,但由于與臨床實際有距離,所以僅用于初篩。慢性實驗治療法:用高血壓模型動物來觀察藥物的治療作用動物的高血壓模型有腎型、神經型、內分泌型和遺傳性等,血壓測定常采用間接測壓法。此法接近臨床實際情況,主要用于復試。降壓作用機制研究:通過上述實驗證明藥物有降壓作用后,近一步通過對中樞、神經節(jié)、遞質、受體、血管平精肌、水鹽代謝等方面試驗來分析藥物的作用環(huán)節(jié)。引起實驗性心律失常的方法有:藥物:烏頭堿、哇巴因、鈕鹽、鈣鹽、氯仿、腎上腺素等。電刺激法。結扎冠狀動脈法。藥物用上述模型進行初篩后,再進一步應用電生理方法和心肌培養(yǎng)技
27、術研究藥物作用的分子機制??剐募∪毖膶嶒灧椒ㄓ校盒呐K和冠脈血流測定。心肌氧代謝實驗。藥物誘發(fā)心肌缺血實驗:垂體后葉索、麥角堿、異丙腎上腺素或腎上腺素。冠狀動脈結扎弓I起心肌梗死實驗。心臟灌流實驗。涉及心血管系統(tǒng)藥理實驗方法研究的常見中藥有溫里藥、平肝息風藥、活血化瘀藥、補益藥和理氣藥。第一節(jié) 藥物對離體蛙心的作用目的學習斯氏(Straub)離體蛙心灌流法。觀察藥物對離體蛙心收縮強度、節(jié)律和心輸出量的影響。原理強心苷在一定劑量下能直接抑制心肌細胞膜上Na+-K+-ATP酶的活性,使細胞內游離鈣離子增多,產生正性肌力、負性頻率作用。此作用在心力衰竭心臟更明顯。動物:蛙。藥品:5洋地黃溶液(或0.
28、1毒毛旋花苷G溶液)、生附子水煎醇沉液lg/ml、制附子水煎醇沉液1g/ml、四逆湯水煎醇沉液1g/ml。試劑:任氏液、低鈣任氏液(其中CaCl2含量為一般任氏液的1/4)。主要器材:手術器械一套、蛙板、探針、八木氏蛙心插管、蛙心夾、鐵支架、雙凹夾、長柄木夾、小燒杯、滴管、棉線、生物信號采集系統(tǒng)(或多道生理記錄儀)、張力換能器。方法取蛙或蟾蜍1只,用探針毀腦及脊髓,仰臥位固定于蛙板上。正中間剪開胸部皮膚,然后開胸,剪開心包,暴露心臟。在主動脈分叉處下穿一線,打個松結,備結扎插管之用。于主動脈分叉稍上方的左主動脈上剪一“v”形小口,將盛有任氏液的蛙心套管插入主動脈,并通過主動脈球轉入左后方左心室
29、,然后將套管用線應結扎固定在套管小鉤上(離體蛙心制備見圖81一1)。將管內帶血的任氏液吸出,以防止血塊堵塞套管。心臟搏動時,可見液面隨著在管內上下波動。剪斷主動脈,提起心臟。于靜脈竇下方將其余血管一起結扎(勿傷及或結扎靜脈竇)。分離周圍組織使心臟離體,并用任氏液連續(xù)換洗直至無血色。將蛙心套管固定于鐵架臺,用蛙心夾在心舒期夾住心尖部,連接于機械張力換能器并與生物信號采集系統(tǒng)相連,待收縮穩(wěn)定后開動記錄儀。進入“蛙心灌流”界面,選擇適當的實驗參數,即可進行實驗。記錄正常的心臟活動曲線,然后按以下順序加藥或試劑,注意觀察圖形的變化:換入低鈣任氏液。當心臟收縮顯著減弱時,向套管內加入5洋地黃溶液(或0.
30、1毒毛旋花苷G溶液)0.2ml。中藥可用:生附子水煎醇沉液1g/ml、制附子水煎醇沉液1g/ml、四逆湯水煎醇沉液1g/ml,方法同上。結果剪貼或復制心臟的收縮曲線,再將具體分析平均值填人表5-1-1。表5-1-1藥物對離體蛙心收縮功能的作用心跳次數(次/min)振幅(mm)圖形比較情況正常低鈣任氏液強心苷溶液注意事項本實驗青蛙重量最好在50g以上。在整個實驗過程中應保持管套內液面高度不變,以保證心臟固定的負荷。在實驗過程中,基線的位置、放大倍數、描記速度應始終一致為防止血液凝固堵塞蛙心管口,可在任氏液中加入適量抗凝劑肝素??稍?000ml任氏液中加入2ml肝素注射液配制成肝素任氏液。思考題通
31、過本實驗可推測強心苷具有哪些藥理作用?第五章 溶血試驗 原理 某些中草藥注射劑,由于含有皂甙或物理,化學與生物等方面的原因,在注入血液后可產生溶血作用。也有些注射劑中含有少量鞣質等雜質,注入局部會引起脹痛,注入血液可產生血球凝聚,引起血液循環(huán)機能障礙等不良反應。因此,尤其是供靜脈注射用的中草藥注射劑,必須作溶血試驗。一般說來,肌肉注射劑由于劑量小,肌注后逐漸吸收,逐漸被血液稀釋,影響不大。 操作方法 (1)血球懸浮液的配制:取兔血(或羊,犬血)5lOml,加入潔凈干燥的小燒杯中,并用竹簽或玻棒攪拌除去纖維蛋白元。再加生理鹽水lOml,搖勻,離心、傾去上清液、如此反復幾次至上清液不呈紅色為止。量
32、取血球,加生理鹽水稀釋成2的混懸液供試驗用。 (2)測試方法,取試管6只,按下列順序加入各種溶液。試管編號1 2 3 4 5 6檢驗柄液(m1)0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0生理鹽水(m1)2.4 2.3 2.2 2.1 2.0 2.52%血球混懸液(ml)2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 第6管為對照管。將各管溶血輕輕搖勻,置37恒溫箱中(或25270室溫中),觀察并記錄12、1、2、3h的結果。如溶液變清并染紅色,即表示溶血。必要時,可用顯微鏡觀察紅血球是否破裂。如藥液0.3ml,在半小時內引起溶血者即不宜作注射用。最好是藥液0.3ml在3h內不引起溶血。 如有紅
33、細胞凝聚的現象,可按下法進一步判定,即凝聚物在試管振搖后又能均勻分散,或將凝聚物放在載玻片上,在蓋玻片邊緣滴加2滴生理鹽水,在顯微鏡下觀察,凝聚紅細胞能被沖散者為假凝聚,其制品可供臨床使用。若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚,其制品不宜供臨床使用。第6章 益母草對大鼠子宮平滑肌的影響益母草苦泄辛散,主入血分,善于活血祛瘀調經,為婦科經產要藥,又因其具有活血化瘀作用,臨床廣泛應用。現將其藥理作用及臨床應用介紹如下。用于治療婦科病益母草為治療婦科病的要藥。婦女產后子宮內胎盤或胎膜組織殘留,子宮復位不全,惡露不盡,子宮炎癥等皆屬于中醫(yī)的血瘀范疇。益母草辛苦微寒能活血祛瘀,是治療婦科因瘀而致
34、病的要藥。益母草的活血祛瘀作用能使子宮興奮并能加強其作用的有效成分是益母草堿。實驗研究發(fā)現益母草對子宮有明顯的收縮興奮作用,如益母草煎劑作用于動物離體子宮,無論有孕無孕,早孕晚孕,或是產后子宮,濃度在1:5001:1000時皆產生興奮作用,表現為子宮張力增強,收縮幅度增大,節(jié)律加快。臨床用益母草單方或復方治療婦產科諸瘀癥,作用及療效確切,婦女產后必服益母草煎膏已為常規(guī)。 動物:健康成年SD雌性大鼠,體重在200-240g之間,試劑與儀器(1)已烯雌酚注射液:廣州明興制藥廠生產,批號920426-2,2mg/支(1ml)(2)BL-420型4道生理記錄儀 藥品 益母草提取液 營養(yǎng)液 方法將健康成
35、年(SD)大鼠實驗前24小時皮下注射已烯雌酚0.2mg/100g,人工造成動情期以提高子宮平滑肌對藥物敏感性。實驗時頸椎脫臼處死大鼠,剖腹取出子宮,立刻置于盛洛氏液的玻璃皿中,輕輕剝離子宮上附著的脂肪組織與結締組織。剪取約3cm長之子宮,結扎陰道端并固定于“L”型通氣管小鉤上,置盛有洛氏液的麥氏槽內,浴槽內溫度保持在37±0.5,連續(xù)通入O2(約80個氣泡/分),另一端與肌力換通器相連,加予1g負荷,用生理記錄儀記錄子宮收縮活動時間常數DC,濾波(Hz)10次方,靈敏度1mv/cm,紙速0.5mm/s,待收縮平穩(wěn)后記錄一段正常收縮曲線(10分鐘),之后分別加入益母草提取液(由小劑量開
36、始),記錄加藥后每10分鐘的平均子宮收縮幅度,頻率及活動力(頻率×幅度),進行自身前后比較及變化率(給藥后-給藥前)/給藥前×100%的組間比較。結果 列表比較思考題益母草興奮子宮的成分及機理是什么?不同劑量對子宮的作用有何不同?藥理學實驗常用儀器及使用 BL-410微機型生物信號采集、處理系統(tǒng)計算機是一種現代化、高科技的自動信息分析、處理設備。利用計算機采集、處理生物信息,讓計算機進入藥理學實驗室是科學技術發(fā)展的必然?,F將對BL-410微機信號采集、處理系統(tǒng)(簡稱BL-410)作簡要介紹。一、計算機在藥理學實驗中的應用 (一)計算機應用的一般過程 通常人們把電子的、機械的
37、、以及磁性的各種部件所組成的計算機實體稱為“硬件”,如輸入設備、中央處理器(CPU)、內存儲器、外存儲器、輸出設備等。而把指揮計算機工作的各種程序和數據稱為“軟件”。在實際使用時,首先從輸入設備鍵盤、鼠標、磁盤等將程序及數據送入內存,再輸入讓程序運行的命令,這時中央處理器就按照內存中程序的安排,從中取出數據到運算器內進行運算、處理,并將結果送回內存中保存。同時將運行的結果按照要求通過輸出設備顯示、打印出來,也可以送到磁盤上儲存起來。由此可見,計算機是按照人們的要求來完成程序規(guī)定的任務。(二)、計算機采集、處理生物信息的基本原理首先將原始的生物機能信號,包括生物電信號和通過傳感器引入的非生物電信
38、號進行放大(有些生物電信號非常微弱,比如減壓神經放電,其信號為微伏級信號,如果不進行信號的前置放大,根本無法觀察)、濾波(由于在生物信號中夾雜有眾多聲、光、電等干擾信號,比如電網的50Hz信號,這些干擾信號的幅度往往比生物電信號本身的強度還要大,如果不將這些干擾信號濾除掉,那么可能會因為過大的干擾信號致使有用的生物機能信號本身無法觀察)等處理,然后對處理的信號通過模數轉換進行數字化并將數字化后的生物機能信號傳輸到計算機內部,計算機則通過專用的生物機能實驗系統(tǒng)軟件接收從生物信號放大、采集卡傳入的數字信號,然后對這些收到的信號進行實時處理,一方面進行生物機能波形的顯示,一方面進行生物機能信號的存貯
39、,另外,它還要根據使用者的命令對數據進行指定的處理和分析,比如平滑濾波,微積分、頻譜分析等。對于存貯在計算機內部的實驗數據,生物機能實驗系統(tǒng)軟件可以隨時將其調出進行觀察和分析,還可以將重要的實驗波形和分析數據進行打印。生物機能實驗系統(tǒng)原理圖二、BL-410微機型生物信號采集、處理系統(tǒng)(一)、BL-410微機型生物信號采集、處理系統(tǒng)的基本構成本系統(tǒng)由計算機、BL-410的硬件及軟件組成。BL-410是一種智能化的四通道生物信號采集、處理顯示系統(tǒng)。它具有記錄儀、示波器、放大器、刺激器、心電圖儀等傳統(tǒng)的生理儀器的全部功能。該系統(tǒng)以中文操作Win95、Win98、Win2000為軟件平臺,實現全圖形化
40、界面的鼠標操作。此外,它具有自動分析、參數預置、中文顯示等功能。(二)、BL-410微機型生物信號采集、處理系統(tǒng)的功能特點(1)采用4通道12位、40KSPS采樣率的A/D轉換器;(2)4通道高性能、全程控的生物電信號采集放大器;(3)程控全導聯(lián)心電選擇;(4)記滴和耳機監(jiān)聽功能;(5)抗干擾能力強,工作穩(wěn)定可靠;(6)低噪聲、高增益范圍(2-50000倍)的生物放大器,適應各種強弱不同的生物電信號;生物電放大器的增益、耦合方式(AC/DC)、時間常數(高通濾波)、高頻濾波(低通濾波)、回零控制等均由程序控制;(7)最高采樣率達60kHz,精度遠大于傳統(tǒng)的機械式記錄儀;(8)功能完善的高性能、
41、高可靠性的電刺激器,具有電壓輸出(0-35V,最小步長5mV)和電流輸出(0-10mA,最小步長1.0A)兩種模式,使用方便;(9)為幾乎所有的生理及大部分藥理實驗教學項目預設置了包括八大類共計32個實驗模塊。當您選擇一個實驗模塊后,計算機會自動設置其所需參數,并啟動數據采樣,直接進入實驗狀態(tài);(10)強大的數據分析功能:可對所采取的數據(積分、微分、頻率直方圖、頻譜分析等)進行運算,并將運算結果與原始波形一起實時、同步地顯示在計算機上;(11)強大的數據測量功能:可對數據進行實時測量、光標測量、選擇區(qū)域測量、兩點測量及區(qū)間測量,可得出生物信號的多種指標,如最大值、最小值、平均值信號頻率等;(
42、12)可獨立調節(jié)四個通道波形的掃描速度;(13)直觀地設置增益、時間常數、濾波及程控刺激等各種參數;(14)可直觀、方便設置顯示波形、背景標尺以及波形背景的顏色等;(15)可對反演的數據進行原始數據導出、數據剪輯及圖形剪輯。(16)可根據需要打印出單個或多個通道的實驗波形及相關的實驗數據。在打印時,還可進行圖形比例壓縮,確定打印位置。(三)、使用指南1、主界面和各部位的功能Biolap98生物信號顯示與處理軟件主界面(1)主界面的主要功能標題條 顯示Biolap98軟件的名稱以及實驗標題菜單條 顯示所有的頂層菜單項,您可以選擇其中的某一菜單項以彈出其子菜單。最底層的菜單項代表一條命令。工具條
43、一些常用命令的圖形表示集合,它們使常用命令的使用變得方便與直觀??刂啤⑿畔^(qū)切換按鈕切換控制區(qū)和信息區(qū)控制區(qū)和信息區(qū)占據屏幕左邊相同的區(qū)域時間顯示窗口顯示記錄數據的時間在數據記錄和反演時顯示生物信號顯示窗口顯示生物信號的原始波形或數據處理后的波形,每一個顯示窗口對應一個實驗采樣通道控制區(qū)及信息區(qū)控制區(qū)用于調節(jié)實驗參數,信息區(qū)用于顯示實驗數據測量結果控制區(qū)和信息區(qū)采用分時復用技術使用相同屏幕資源數據查找滾動條用于實時實驗和反演時快速數據查找核定位BL-410新增功能四個數據反演相關功能按鈕用于反演時進行數據剪輯、圖形剪輯以及波形的橫向擴展和壓縮BL-410新增功能狀態(tài)條顯示當前系統(tǒng)命令的執(zhí)行狀態(tài)
44、或一些提示信息設置刺激器參數對話框設置刺激器參數反演時消失(2)工具條的主要功能 該工具條按鈕代表系統(tǒng)復位命令。該工具條按鈕代表當前通道信號自動回零命令。該命令只對當前通道起作用。該工具條按鈕代表當前通道信號直流平衡增檔命令。該命令只對當前通道起作用。該工具條按鈕代表當前通道信號直流平衡減檔命令。該命令只對當前通道起作用。 該工具條按鈕代表打開上一次實驗設置命令。 該工具條按鈕代表反演數據讀取命令。 該工具條按鈕代表打印當前通道圖形命令。 該工具條按鈕代表實時數據記錄命令。 該工具條按鈕代表啟動波形顯示命令。 該工具條按鈕代表暫停顯示命令(空格鍵也代表暫停顯示命令)。 該工具條按鈕代表停止數據
45、顯示與記錄命令。 該工具條按鈕代表波形振幅擴大命令。 該工具條按鈕代表波形振幅縮小命令。 該工具條按鈕代表刪除、添加背景標尺格線命令。 該工具條按鈕代表啟動刺激器命令。 該工具條按鈕代表停止刺激器命令。 該工具條按鈕代表50Hz濾波命令(禁止50Hz波形)。該命令只對當前通道起作用。 該工具條按鈕代表取消50Hz濾波命令(允許50Hz波形通過),該命令只對當前通道起作用。 該工具條按鈕代表添加標記命令。 該工具條按鈕代表區(qū)間測量命令,該命令只對當前通道起作用。 該工具條按鈕代表兩點測量命令。2、操作步驟(1)開機 (2)圖標選擇 當進入Win98界面后,鼠標雙擊Pci410圖標,出現BL-41
46、0封面,鼠標單擊封面任何一部位,顯示器進入Pci410軟件主界面。(3)輸入方式:輸入方式1:BL-410軟件的“輸入信號”菜單中為需要采樣與顯示的通道設定相應的信號種類(如張力),然后從工具條中選擇“啟動波形顯示”命令按鈕或從“編輯”菜單中選擇“啟動波形顯示”命令項(如需要多通道輸入主要用這種方式,多通道輸入時要重復以上的步驟);輸入方式2:是從“實驗項目”菜單中選擇自己需要的實驗項目(如循環(huán)系統(tǒng)貓動脈血壓的調節(jié))。(4)參數調節(jié) 根據被觀察信號大小及波形特點,選定要調節(jié)的通為當前通道,調節(jié)增益或濾波。具體操作:鼠標移動到參數調節(jié)區(qū)相對應的調節(jié)旋鈕位置,然后單擊鼠標的左鍵使參數值增中,單擊鼠
47、標右鍵使參數值減小。掃描速度調節(jié):鼠標移動到掃描速度調節(jié)區(qū)所調節(jié)通道位置。在黃色柱左邊單擊一次,速度減檔一次;在黃色柱右邊單擊一次,速度增加一檔。在一般情況下,不用調節(jié)這些參數。(5)記錄 在BL-410軟件的工具條上有一個“記錄”命令按鈕,其圖形是一個紅色的實心圓,這是一個雙態(tài)命令按鈕,所謂雙態(tài)命令按鈕是指每按下該按鈕一次,其所代表的狀態(tài)就改變一次,這就好像是一盞電燈的開關,這種命令按鈕通過按鈕的按下和彈起表示兩種不同的狀態(tài)。在BL-410軟件中還有一些其它的雙態(tài)命令按鈕,比如“零速采樣”和“格線顯示”命令按鈕等。(6)暫停 如果您想暫停一下波形觀察與記錄,比如,此時您正在配置新藥,為了減少
48、無效數據占據磁盤空間,您可以暫停實驗,只需從BL-410選擇“暫?!泵畎粹o即可。當您完成本實驗之后,您可以選擇工具條上的“停止”命令按鈕,這時,BL-410軟件讓您為本次實驗的結果取一個名字以便于保存,然后結束本次實驗。(7)添加實驗標記 在實驗過程中,您往往需要在實驗波形有所變化的部分,比如加藥前后添加一個實驗標記,以明確實驗過程中的變化,同時也為反演數據的查找留下依據。在BL-410生物機能實驗系統(tǒng)中,有兩種類型的實驗標記供您選擇,分別是通用實驗標記和特殊實驗標記。(8)刺激器的使用 一般情況下,刺激器的參數調節(jié)面板以最小化隱藏在主界面的右上方。需要使用刺激時,用鼠標單擊“設備刺激器參數
49、”條的放大框,這時刺激器的參數調節(jié)面板將展開在主界面的左下方,該調節(jié)面板復蓋在掃描速度調節(jié)區(qū)上。需要移動該面板的位置時,用鼠標單擊“設置刺激器參數”條,該條變藍,鼠標放置在藍條上按住左鍵不放并拖動到面板需要放置的地方即可。刺激器各項參數展現在面板上,可根據實驗需要調節(jié)。當需要給標本刺激時,鼠標單擊工具條的“ ”啟動刺激按鈕。再單擊時即停止刺激。(9)結束實驗 當實驗完成結束時,用鼠標單擊工具條的“”停止鍵。如在實驗中啟動了記錄,此時會彈出一個存盤對話框,提示你給剛才記錄存盤的實驗數據輸入方文件名(文件名自定義,最長不得超過八個字符),否則,計算機將以Temp作用為當前文件名。中文輸入可用鍵盤組
50、合鍵Ctrl+Shift選擇合適的中文輸入法進行中文文件名輸入。(10)反演 反演數據的方法也非常簡單,只需從工具條上選擇“打開文件”命令,然后選擇需要反演的文件名字,按“確定”按鈕即可。對于反演的數據,您可以拖動顯示窗口下面的滾動條來選擇不同時間段的數據進行觀察和分析。也可以通過窗口下方的滾動條和反演按鈕窗口中的查找命令按鈕查找您所需要的數據。(11)圖形剪輯 鼠標單擊返演控制調節(jié)區(qū)右下角的圖形剪按鈕,移動鼠標,選定圖形的左上角為起點,按下鼠標左鍵不放,向右下方拖動鼠標,此時,屏幕上將出現一矩形虛框,框內圖形就是你將要剪輯的圖形。選定圖形后,放開鼠標的左鍵,屏幕上將出現一張白色剪輯頁,剛才剪
51、輯的圖形位于左下角,可用鼠標移動到相應的位置,然后,按返回鍵,繼續(xù)剪輯相應的圖形。必要時可加上相應文字或對圖形進行修改。(12)數據剪輯 選擇數據剪輯按鈕,當前通道出現一條垂直線,該線條隨鼠標移動而左右移動,當線條移動到要剪輯數據的起始端時,單擊鼠標左鍵確定,同時屏幕又出現另一直線,移動鼠標到該剪輯數據的尾端,再次用鼠標左鍵確定,此時,兩線條之間的圖形就是我們所剪輯的數據,同理可進行多次剪輯,當停止反演時可生成以cut為擴展名的文件。本文件是多次剪輯的集合。(13)實驗人員及實驗組號的輸入 實驗完成后,如需要在實驗結果上打印實驗人員名單及實驗組號時,則需編輯輸入。方法是用鼠標單擊“實驗人員編輯
52、”項,出現對話框,輸入相應數據,按“OK”即可。(14)數據處理 區(qū)間測量 該命令用于測量當前通道圖形的生意一段波形的頻率、最大值、最小值、平均值以及面積等參數。按工具條上的區(qū)間測量按鈕,此時通道內出現一條垂直線,線條隨鼠標移動,單擊鼠左鍵確定要測量的開始端,同時第二條直線出現,相同方法確定終端。在被測量圖形段內出現一條水平線。用鼠標上下移動該直線,選定頻率計數的基線,鼠標單確定,所要測定的參數自動顯示在屏幕下方的信息區(qū)內,單擊鼠標右鍵結束本次實驗。 兩點間測量 該命令用于測量任意通道內某個波形的最大值、最小值、及兩點之間的時間及信號的變化率。方法是鼠標單擊兩點間測量按鈕,移動鼠標將鍵頭指向被
53、測波形的第一點單擊確定,同樣的道理確定第二點,此時一條隨鼠標移動的紅線連接在第一點與第二點之間,該信號線代表被測信號的路線軌跡。確定第二點之后,被測信號的參數就被顯示出來。 單點測量 只要在實驗圖形顯示時,在任何通道內的任何位置都可以用此方法來測量測定指定點值的大小。測量時,只需要在測量點上單擊鼠標左鍵,所測的值則被自動顯示在信息區(qū)的“當前值”欄目上。微分 如果需了解實驗波形的變化,要對波形進行微分處理時,用鼠標單擊菜單條的“數據處理”項,彈出下拉式菜單,按選定“微分”的選項,鼠標左鍵單擊確定,此時將顯示“微分參數設置”對話框。按實驗所需的要求設定參數,然后按“OK”按鈕,此時微分波形將開始顯
54、示。如果對微分波形不滿意,還可重復以上步驟對微分參數再次調節(jié)。 (15)打印 圖形剪輯打印 當我們完成圖形剪輯后,在圖形剪輯頁中,用鼠標單擊“打印”按鈕,即可由打印機打印出一張已剪輯的圖形。數據圖形打印 當我們在實時實驗或者是反演過程中,如果需要打印圖形,用鼠標單擊菜單條的“打印”菜單項,彈出下拉式菜單,移動鼠標,首先選定打印比例,鼠標左鍵單擊;重復上步驟,選定打印位置,再重復上步驟,選定打印通道。如要繼續(xù)打印以后顯示的圖形,則鼠標單擊“”啟動波形顯示,重復上述步驟,選定圖形、打印位置和打印通道即可。(16)結束實驗退出該系統(tǒng) 結束本次實驗后,您又可以選擇開始其它實驗或者退出BL-410軟件。退出BL-410軟件的方法很簡單,從“文件”菜單中選擇“退出”命令或者單擊窗口左上角的“關閉”命令(為一小叉按鈕)均可以退出BL-410軟件。當實驗結束后,你可以為本次實驗的數據文件取一個有意義的名字進行保存,以便于以后進行反演、分析和處理。三、生產廠家BL-410微機信號采集、處理系統(tǒng)由成都泰盟科技有限公司研制。 722型光柵分光光度計一、儀器的工作原理分光光度計的基本原理是溶液中的物質在光的照射激發(fā)下,產生了對光吸收的效應,物質對光的吸收是具有選擇性的。各種不同的物質具有其各自的吸收光譜,當某單色光通過溶液時,其能量就會被吸收而減弱
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