植物基因工程疫苗的研究進展.docx

1、會做傳真本欄目旨在從不同方面報道行業(yè)或企業(yè)的大型會議.歡迎提供會議殘索。E-mai:sysc.zn江西博乘大藥廠會,*保50段4猊斌米會業(yè)1好*t、水地址：江西有九江晝沙域工業(yè)因電話：“792-6893392河址：公司推薦產(chǎn)品：通效阿H西尊朋針頭袍岐的釘北方金4i排止痢針2008年12月6-7日“京津冀畜牧善醫(yī)科技創(chuàng)新交流會暨新思想、新觀點、新方法論壇”部分內(nèi)容摘煽植物基因工程疫苗的研究進展作者：王偉青李玉冰周珍輝曾俊安英鳳王振玲北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系改編：趙翠卿本刊編輯部植物基因工程疫苗是利用植物系統(tǒng)表達病原菌抗原蛋白一個或兒個亞單位的疫苗，它沒有病原菌完整的侵染能力，卻可以使機體對特異

2、的病毒或細菌產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。由于轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生的疫苗對動物實施免疫只是簡單地攝取含這種疫苗的植物組織或種子，所以這種疫苗不會被酶類所破壞，可通過機體腸道黏膜作用激發(fā)特異性免疫應(yīng)答，使動物獲得持久性疾病防御能力，旦沒有或很少出現(xiàn)病原體的過敏反應(yīng)。植物表達系統(tǒng)表達異源蛋白成本低，具有正確折疊的能力、口服安全等特點.受到了國內(nèi)外研究人員的廣泛關(guān)注,Curtiss等人在1990年首次報道了在煙草中表達鏈球前抗原蛋白SpaA.1997年轉(zhuǎn)基因植物疫苗的第一次臨床試驗證明了植物基因工程疫苗在抵抗傳染性疾病方面的巨大潛能°利用植物作為抗原表達和傳遞的載體已經(jīng)成為當今生物技術(shù)研究的熱點之一。一、植

3、物基因工程疫苗的優(yōu)勢植物基因工程疫苗是Mason等提出的,該技術(shù)是利用分子生物學(xué)技術(shù)把重組的疫苗基因?qū)胫参?，并使其在植物體內(nèi)大髭表達的一類技術(shù)。植物基因工程疫苗與常規(guī)疫苗及其它新技術(shù)疫苗相比,具有以下優(yōu)勢：1.植物細胞具有全能性，能夠再生植株,且植物細胞中很少含有潛在的動物或人類病原,更安全可輜。2. 可利用植物能夠儲藏蛋白質(zhì)于種子中這一有利條件,進行簡單方便地生產(chǎn)'儲藏和發(fā)放疫苗。3. 用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)疫苗是最經(jīng)濟的生產(chǎn)系統(tǒng)，因為需要的僅是陽光、水和肥料。4. 植物具有完整的真.核細胞表達系統(tǒng),有利于禾紐蛋白質(zhì)的準確組裝和表達，使表達產(chǎn)物具有與高等動物細胞一致的免疫原性和生物活性。

4、5. 直接以植物的可食用部分進行曰服免疫,既可減去純化過程,降低生產(chǎn)成本，又可避免繁瑣的接種程序c與皮下注射相比,轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生的亞基或可溶性抗原的口服免疫常常在刺激免疫反應(yīng)方面效率較高，只需要少屋的抗原。二、植物基因工程疫苗的研究進展(-)植物基因工程疫苗的研究進展隨著基因工程疫苗的發(fā)展將轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)基因工程疫苗用人或動物疾病的防治已成為新興的研究領(lǐng)域。利用植物基因工程生產(chǎn)畜禽疫苗比生產(chǎn)人用疫苗更具現(xiàn)實意義和發(fā)展?jié)摿?。盡管目前還沒有培育出成熟的植物轉(zhuǎn)基因畜禽疫苗品種，但相關(guān)研究已取得了一定成果。牛、豬、家禽、兔等的植物基因工程疫苗的研究情況，見下表。植物基因工程疫苗的研究應(yīng)用物疫笛植物表達

5、蛋白他略)牛功妗薯、秘命芥口玲戎珥4(H4DV)VP1妥白煙草.4C±牛攜以，(RPV)血彼去(0釜白俳染姓炎古4巖突蚩臺(TGEV-S)和Ecoll不時熱股(HB)睛(牛用口躇疫瘍毒以荀也可用于祐村早)黃色玉米柱大桿茜LtB玉來樣子*tH緘傳豪姓胃腸炎珞#亞單待染姓炎恩狀珥，S釜白精流行姓腹瀉珥，杭原家禽璃件朵姓法氏去痛功,主矣括主保如姓枕原VP2蚩白1馬普薯育傳染姓女七管炎令#(IBV)S1的蛋白而h梅琦件染姓支七管炎(1BV)S1兔兌出血鞏滴4(RHDV)AST/89(二)提高植物丞因工程疫苗表達量和免疫原性的研究進展植物基因工程疫苗抗原表達雖低是其發(fā)展的主要限制之-。雖然抗體

6、的表達量可以達到總的可溶性蛋白的8%,但是其他蛋白的表達水平僅有0.01%,幾乎沒有超過0.40%的。1. 在葉綠體中表達抗原蛋白在過去幾年中，用葉綠體表達頁組蛋白已取得了很大的進展。在煙草葉綠體中,Staub等人表達了含二硫鍵的人生長素，占植物可溶性蛋白的7%;Decosa等人表達了一種殺蟲劑，占植物可溶性蛋白的45%;Daniell等人表達了其聚霍亂毒素亞單位,占植物可溶性蛋白的411%,是在核中表達的41倍;Tregoning等人表達了菌源的富含AT(7213%AT)和人工合成的富含GC(5213%AT)的破傷風毒素C片段，笛源的基因在葉綠體中更為穩(wěn)定，兩種蛋白分別占細胞可溶性蛋白的25

7、%和10%。2. 通過融合蛋白表達杭原妥白Tregoning等人設(shè)計了一個融合蛋白.來提高HbsAg在植物中的表達最。這個融合蛋白由一段大豆生(仲下頁)2008年12月5-6日大連三儀動物藥品有限公司舉辦的“科技成果產(chǎn)業(yè)化研討會夔大連三儀集團創(chuàng)業(yè)十周年四顧”內(nèi)容描編禽流感疫苗使用中應(yīng)注意的4個問題主講：周蛟北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所摘編：趙翠卿本刊編輯部禽流感疫苗在使用過程中，常由于不能合理使用，而造成雞群產(chǎn)蛋率下降或免疫不確實,從而為養(yǎng)殖戶造成不必要的經(jīng)濟損失。只有了解使用中應(yīng)注意的問題,才能合理使用禽流感疫苗。一、注意甲醪超標問題對A、B、C、D、E、F6個禽流感疫苗生產(chǎn)企業(yè)的Re-1

8、株、Re-1株、Re-1+Re-4株、H5+H9二價苗的21批次疫苗中甲醛進行含量測定,結(jié)果如下：表1禽濾感疫苗中的甲隧含量蟲戶廠本(.!%)ISH1tc-1<A2004124|O.SI%t.1A20頃06.66、6.6B9065.n%|B.u%I"C60*X,14%1.4C70201D.I?*1二、注意不同甲醛含量疫苗對產(chǎn)蛋率的影響不同甲醛含量的禽流感疫苗對產(chǎn)蛋率的影響不同,結(jié)果見表2表2不同甲醛含量的禽流感疫苗對產(chǎn)蛋率的影響姐劑血清中B2(Pg/nl)，蚩率（%）8佶平醉痍苗33.7170i.4傅甲醒疫苛57.5591未使用HS疫苗82.7092.5免疫6倍甲醛含量:疫苗可

9、見雞冠萎縮、蒼白。剖檢可見卵泡數(shù)：B少、卵子數(shù)量少、卵子及子宮腔體積萎縮等。由上表可見,1.4倍甲醛疫苗對產(chǎn)蛋率影響不明顯，而8倍甲醛疫苗對產(chǎn)蛋率的影響較明顯.因此，免疫接種時應(yīng)選擇甲酷含量低的禽流感疫苗。三、注意禽流感疫苗免疫時間長短對產(chǎn)蛋率的影響由下表可見，隨著禽流感免疫時間的延長，禽流感疫苗對產(chǎn)蛋率的影響逐漸減弱，產(chǎn)蛋率逐漸回升。表3禽流感免疫時間對產(chǎn)蛋率的影響inM尸釜率（%）JAJt疲后15天ttiiA1H5N1(M等2006333)*7.9980.1686.66tMtt85.02S5.1385.27*產(chǎn)蛋率：以免疫前的平均產(chǎn)蛋率為哀敬四、注意新城疫母源抗體對禽流感-新城疫重組二聯(lián)活

10、疫苗的干擾表4新城疫母源杭體對禽流感抗體的影響cutn釜0X分AKSW1>flX.*<M(OIOOI209S)7.“S.33Hf奔4log2AHKD”二“第4.笛4.02.46由上表可見，養(yǎng)雞生產(chǎn)中雛雞母源抗體均大于41<?g2時，應(yīng)用禽流感-新城疫二聯(lián)活疫苗后，兩種抗體均不升高,免疫空白期存在發(fā)生新城疫和旗流感的隱患，因此，免疫禽流感-新城疫二聯(lián)活疫苗應(yīng)在母源抗體低于41og2時進行。QB埴嘛日斯：2008-1219責編：趙早辯電話Q：744150942（校上頁）長儲存蛋白（VSPalphas）氨基端融合，信號肽的作用是引導(dǎo)HbsAg進入植物細

11、胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，融合蛋白不裂解,在轉(zhuǎn)基因植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中大屋積累，提高了HbsAg的表達SoHuang等人在表達麻疹病最凝血素蛋白（H蛋白）時。構(gòu)建了3種不同的表達結(jié)構(gòu):pSinH（只是H基因）,SinH/KDEL（加了一個內(nèi)質(zhì)網(wǎng)逗留序列）,Spinsp/H/KDEL（加了一個植物信號肽N端）。結(jié)果，表達雖最高的是SinH/KDEL。3. 加上強啟動子CarriUo等在轉(zhuǎn)基因馬鈴薯中表達口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1時,在VP1基因中加入一個或兩個花椰菜病毒35S啟動子（CaMV35s啟動子）,或一個改進的啟動子和煙草花葉病毒5,端非編碼區(qū)相連，表達的蛋白量:也得到了提高。4. 提高免疫原桂的方法為多種疫苗的

12、聯(lián)用Diane等人發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)基因煙草:中表達的麻疹凝血素蛋白，小鼠試驗誘發(fā)低濃度的中和性抗體，但兩種疫苗-DNA疫苗和轉(zhuǎn)基因疫苗的聯(lián)用，能產(chǎn)生高濃度的抗體。三、發(fā)展前景在疫苗的研制方面，應(yīng)用多種生物技術(shù)研究和開發(fā)不同類型的高新技術(shù)制品，可提高疫苗的安全性和效力，并且在商品化方面取得更大的成就。眾多的實驗表明，單靠花椰菜花葉病毒（CaMV）的35S啟動子效果并不理想，而II成型表達會造成不必要的能垃浪致，所以器官特異型強啟動子是今后研究和應(yīng)用的理想的啟動子;葉綠體基因組表達也將提高重組表達蛋白員，進一步加強葉綠體轉(zhuǎn)化的研究,并擴大葉綠體轉(zhuǎn)化的植物種類。另外，黏膜佐劑和適當?shù)目乖f呈細胞將提高口服亞單位疫苗的免疫效率，不同的