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1、弓形蟲(chóng)疫苗的研究進(jìn)展孑L猛半,白的二邵國(guó)青'(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所,江蘇南京210014;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,江蘇南京210095)中圖分類號(hào):S852.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A弓形蟲(chóng)病是一種人善共患病,已知有200多種哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類可感染該病,孕婦感染后會(huì)經(jīng)胎盤傳染給胎兒,造成嚴(yán)重疾患。豬弓形蟲(chóng)病在我國(guó)豬群中比較常見(jiàn),給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬弓形蟲(chóng)病發(fā)病急,癥狀明顯,對(duì)豬尤其是懷孕母豬及其胎兒危害巨大。里然磺胺類藥物能有效治療該病,但治療有滯后性,尤其對(duì)懷孕期間的母豬會(huì)因藥物使用不當(dāng)而存在一定風(fēng)險(xiǎn)。因此,研制安全、高效的疫苗對(duì)控制該病和提高公共衛(wèi)生水平具有十分重要的
2、意義。目前,研究的疫苗主要有滅活疫苗、弱毒疫苗及基因工程疫苗等,現(xiàn)就各種疫苗發(fā)展現(xiàn)狀綜述如下。1滅活疫苗滅活疫苗雖然安全性較好,但一般需加大劑量和使用頻率°滅活完整的病原體疫苗通常能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生校好的預(yù)期免疫反應(yīng),特別是可產(chǎn)生具有中和病原感染能力的中和抗體,但它們不能誘導(dǎo)典型的受MHCI類分子限制的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng),細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)啊反應(yīng)是清除病毒、細(xì)菌和寄生蟲(chóng)引起的胞內(nèi)感染的主要反應(yīng)。由于弓形蟲(chóng)屬于細(xì)胞內(nèi)寄生的原蟲(chóng),感染機(jī)休后細(xì)胞免疫在清除體內(nèi)弓形蟲(chóng)方而起著非常重要的作用,因此滅活疫苗免疫效力不理想。早在20世紀(jì)60年代,人們就對(duì)弓形蟲(chóng)病預(yù)防接種材料進(jìn)行了探討。此后人們又對(duì)
3、致死的速殖子加及不加佐劑免疫懷孕綿羊,均不能免遭攻擊性的收稿日期:2009-02-16;修回日期:2009-03-23基金項(xiàng)呂:農(nóng)業(yè)公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(200803017);江蘇省農(nóng)業(yè)三項(xiàng)工程項(xiàng)目iSX(2007)0«2)作者簡(jiǎn)介:仕猛(1982-),男,碩士研究生.通訊作者:邵國(guó)青(1964-),男,高級(jí)研究員,博士.明顯,導(dǎo)致的泌乳初期能量短缺高于限制飼喂的奶牛,產(chǎn)后體重下降,平均產(chǎn)奶髭降低o產(chǎn)前低能飼喂可以降低產(chǎn)后奶牛血液三酰甘油、非酯化脂肪酸和總豳體水平,提示T乳期能量攝入水平是影響和調(diào)節(jié)產(chǎn)后能ht平衡狀態(tài)的重要因素。I-乳期高能飼喂,產(chǎn)前體重增加明顯,產(chǎn)后失重也明顯,能雖負(fù)
4、平衡嚴(yán)重;干乳期低能飼喂,產(chǎn)前體重增加不明顯,產(chǎn)后失重少,能撾負(fù)平衡程度輕,且持續(xù)文章編號(hào):1004-7034(2010)02-0025-03感染。雖然用滅活疫苗免疫安全性較好,但因抵抗感染的能力低也就不再使用了。2弱毒疫苗弱毒疫苗的毒力已經(jīng)致弱,較少劑量即可誘導(dǎo)產(chǎn)生堅(jiān)實(shí)的免疫力,能夠調(diào)動(dòng)動(dòng)物機(jī)體全方位的免疫應(yīng)答,而且無(wú)需使用佐劑,免疫期長(zhǎng),是一種可供選擇的有效方法。但用致弱的毒株接種機(jī)體后,不能確保感染后毒力不返強(qiáng),而且弓形蟲(chóng)感染中間宿主后在機(jī)體免疫力正常時(shí)會(huì)形成組織包囊,在機(jī)體免疫力降低時(shí)包囊活化存在著再次感染的可能。因此,目前人們對(duì)弓形蟲(chóng)弱毒疫苗的研究主要集中在怎樣使其在機(jī)體內(nèi)毒力不返強(qiáng)
5、及不在組織內(nèi)形成包囊方面。人們通過(guò)紫外線照射、激光照射及改變培養(yǎng)溫度等方法研制出多株弓形蟲(chóng)弱毒株。以弱毒株為基礎(chǔ)種子研制的疫苗主要集中在S48速殖子、T-263突變株、Ts-4突變株等。英特威公司以S48速殖子為材料生產(chǎn)的“TOXOVAX”活疫苗是目前為止世界上唯一經(jīng)注冊(cè)的用于弓形蟲(chóng)病免疫的疫苗,已成功地推廣應(yīng)用于免疫預(yù)防弓形蟲(chóng)病引起的母羊流產(chǎn)。ChartierC等以S48速殖了肌肉接種交配前的山羊,在母羊懷孕90天以10000個(gè)S48速殖子攻毒,結(jié)果非免疫組的山羊體溫升高,免疫組和非免疫組的血清抗體效價(jià)都有大幅度的增加,但非免疫組的流產(chǎn)率明顯高于免疫組,攻毒后免疫組的山羊都表現(xiàn)出較高的血清學(xué)
6、反應(yīng)。弓形蟲(chóng)感染組織后在組織中形成的包囊無(wú)法用藥物殺死,因此弱毒疫苗研制的關(guān)鍵就是保證免疫后體內(nèi)不形成包囊。在美國(guó),用弓形蟲(chóng)基因突變株T-263免疫綿羊能有效防止流產(chǎn)發(fā)生,免疫的貓弓形蟲(chóng)卵囊的排出也減少了。用Ts-4突變株免疫可使宿主產(chǎn)時(shí)間明顯縮短。參考文獻(xiàn):IJ劉國(guó)文,E哲.國(guó)產(chǎn)期奶牛能仙代謝障碎性疾病的研究進(jìn)展J,m龍江布牧件醫(yī),2004(8):7879.2 張輝.脂聯(lián)素對(duì)用產(chǎn)期奶牛脂肪動(dòng)員的調(diào)檢作用【)】.氏祥:占林人學(xué),2007.3) 劉內(nèi)義.乙皺,1:成基因缺失j.程幽的構(gòu)建及其對(duì)痛',微'上物發(fā)警的影響B(tài)K:占林大學(xué),2004.生強(qiáng)大的保護(hù)力。Ts-4突變株雖然是活
7、蟲(chóng),但對(duì)宿主無(wú)任何致病的影響,即使大劑量(1x1031x105個(gè)速殖子)接種小鼠也不會(huì)致病,接種2個(gè)月后速殖子從宿主體內(nèi)逐漸消失,存活期較短。更為重要的是該突變株在小鼠的腦內(nèi)不形成包囊,并能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生高效價(jià)的特異性抗體。鑒于突變株具有上述優(yōu)點(diǎn),進(jìn)一步研究此種免疫材料的免疫機(jī)理及使用價(jià)值有重要意義。江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所用紫外線連續(xù)多代照射蟲(chóng)體后研制出NTA-皿弱毒疫苗.該疫苗在保護(hù)豬免受弓形蟲(chóng)侵害方面取得了較好的效果,但因其免疫動(dòng)物后不能確定是否會(huì)在組織中形成包囊,這成了該弱毒疫苗椎廣的一個(gè)瓶頸,如何解決這一難題保證其生物安全性將有助于該疫苗的推廣。弱毒株雖具有一定的免疫力,但存在著毒力
8、返強(qiáng)的危險(xiǎn)和在組織中形成包囊的情況,因此目前人們對(duì)弱毒蟲(chóng)株的研究較少。3基因工程疫苗3.1亞單位疫苗亞單位疫苗的研究主要集中于弓形蟲(chóng)速殖子表面抗原,速殖子表膜是蟲(chóng)體與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的界面,也是宿主免疫系統(tǒng)識(shí)別并殺傷蟲(chóng)體的主要作用部位。目前,研究的表膜抗原主要是P3。蛋白。張洪花等在研究弓形蟲(chóng)抗原的保護(hù)性時(shí)用SDS-PAGE大膠板電泳對(duì)弓形蟲(chóng)抗原進(jìn)行分離,選擇4組待異性抗原帶(P22P26、P30、P35、P36)洗脫獲得抗原,再分別與弗氏完全佐劑混勾免疫小鼠,發(fā)現(xiàn)P30誘導(dǎo)的小鼠弓形蟲(chóng)IgG抗體出現(xiàn)得最早旦效價(jià)最高-的0對(duì)小鼠具有較強(qiáng)的保護(hù)力。P30與霍亂毒素(CT)共同滴鼻免疫小鼠可誘
9、導(dǎo)高水平的血清IgG和全身性細(xì)胞免疫應(yīng)答,同時(shí)腸液中有大址的0A,弓形蟲(chóng)攻擊感染后免疫組腦包囊數(shù)較對(duì)照紐降低80%,且這種保護(hù)力至少持續(xù)5個(gè)月以上。P30與熱不穩(wěn)定內(nèi)毒索(LT)滴鼻免疫小鼠,也可以引起小鼠產(chǎn)生IgG和SIgAo近年來(lái),國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)在緩殖子期、子抱子期均能表達(dá)的致密顆??乖–KA)、棒狀體蛋白(ROP)及微線體蛋白(MIC)等進(jìn)行了大量研究C微線體蛋白作為疫苗候選分子研究較多的主要有微線體蛋白1、微線體蛋白2和微線體蛋白3等。IsmaelAB等在研究微線體蛋白3時(shí)發(fā)現(xiàn).微線體蛋白是一種黏附性蛋它,能夠成為種孤要的抗/;形蟲(chóng)病的候選疫苗。除表膜蛋的外,張德林等對(duì)弓形蟲(chóng)速殖子經(jīng)細(xì)
10、胞培養(yǎng)的排泄分泌抗原(E/SA)進(jìn)行了免疫效力測(cè)定,發(fā)現(xiàn)分泌抗原對(duì)小就也定的免疫力o目前,雖然亞單位疫苗比滅活疫苗、弱讒疫苗安全,但免疫原性弱,不能被抗原遞V細(xì)胞系統(tǒng)(APCS)有效識(shí)別、遞呈。弓形蟲(chóng)生活史復(fù)雜,抗原成分多樣,每種抗原在體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答又有所不同,大多數(shù)動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明,雖然單價(jià)亞單位疫苗有一定的免疫效力但效果不甚理想,為此人們相繼構(gòu)建r多表位的復(fù)合多價(jià)疫苗。MingtuX等構(gòu)建出了一個(gè)包含SAG1、ROP2、GRA2多個(gè)抗原的疫苗,并用白細(xì)胞介素-2作為佐劑去提高其免疫效力,肌肉注射小鼠后觀察其免疫效力。結(jié)果PCDNA3.1-SAG1-KOP2-GRA2產(chǎn)生了較高的Thl免
11、疫應(yīng)答,并且以白細(xì)胞介素-2為佐劑可提高免疫應(yīng)答的特異性,延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間。HuaC等構(gòu)建了一種多表位疫苗,這種疫苗包含弓形蟲(chóng)的多個(gè)表位,并以CTXA2/B為佐劑,這種疫苗能夠誘導(dǎo)特殊的體液免疫和細(xì)胞免疫。以CTXA2/B為遺傳佐劑可提高免疫應(yīng)答的強(qiáng)度和感染RH速殖子小鼠的存活率。4核酸疫苗核酸疫苗又稱為基因疫苗,它是繼病原體疫苗、亞單位疫苗之后的第3代疫苗,以DNA疫苗為主。將編碼位于真核表達(dá)調(diào)控元件下的抗原基因質(zhì)粒DNA(或RNA)直接注射至機(jī)體局部組織(如肌肉、脾臟、貓膜等),質(zhì)粒DNA在機(jī)體局部表達(dá)相應(yīng)抗原蛋白,并以類似自然感染的方式遞呈抗原,從而全面地誘導(dǎo)特異性體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免
12、疫應(yīng)答。與傳統(tǒng)疫苗相比,核酸疫苗具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。目前,在瘧疾、利什曼病等寄生蟲(chóng)病的防治中已進(jìn)行了核酸疫苗的試驗(yàn)和應(yīng)用。王丹靜等構(gòu)建了乙型肝炎表面抗原(HBSAg)和致密顆粒抗原-l(GRAl)融合基因真核表達(dá)載體PCDNA-HBSAg-GRA1二價(jià)核酸疫苗。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果初步顯示CRM融合于HBSAg的第224個(gè)氨基酸處,增強(qiáng)了GRA1的免疫保護(hù)性,并優(yōu)于混合免疫組。DaofengQ等將一種安全、穩(wěn)定的DNA疫苗導(dǎo)入致弱沙門桿菌中,獲得了一種重組抗原ZJM/PCDNA3-SAG1,以該重組抗原免疫ICR系小鼠,可產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答,以及產(chǎn)生大量的脾細(xì)胞和IgG2(x抗體,且對(duì)腹腔內(nèi)感染的500R
13、H速殖子有口好免疫效果。核酸疫苗在弓形蟲(chóng)疫苗的研究領(lǐng)域中已有了長(zhǎng)足的發(fā)展,但在其應(yīng)用中還存在不少問(wèn)題,主要是其安全性問(wèn)題。如質(zhì)粒DNA是否會(huì)整合到宿主基因組中,造成插入突變而導(dǎo)致體內(nèi)癌基因的活化或抑癌基因的失活;抗體在機(jī)體內(nèi)的K期表達(dá)是否對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生影響,導(dǎo)致宿主的免疫耐受或向身免疫反應(yīng);將質(zhì)粒DNA注射機(jī)體后抗原基因的表達(dá)調(diào)控如何等,這些都是核酸疫苗在實(shí)際應(yīng)用中迫切需要解決的問(wèn)題。5弓形蟲(chóng)疫苗的研究方向人們對(duì)弓形蟲(chóng)疫苗的研究經(jīng)歷了從最初的滅活疫苗,到之后的弱血疫苗、業(yè)單位疫苗、多價(jià)復(fù)合疫苗及現(xiàn)在的核酸疫苗。雖然弓形蟲(chóng)疫苗在不同發(fā)展時(shí)期都取得了可喜成果,但在其應(yīng)用上一直存在著尚待解決的問(wèn)題。
14、滅活疫苗的安全性較好,但其保護(hù)力不理想;弱毒疫苗有著較好的免疫力,但在安全性上一直存在著毒力返強(qiáng)及在組織內(nèi)形成包囊等問(wèn)題;基因工程疫苗的保護(hù)力及生物安全性還有待進(jìn)一步改進(jìn)。由于弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)的帶蟲(chóng)免疫,蟲(chóng)體在宿主細(xì)胞內(nèi)易形成包囊從而逃避宿主的免疫反應(yīng)。因此,研究包囊在體內(nèi)形成的機(jī)制將為弓形蟲(chóng)疫苗的研究打下良好基礎(chǔ)。弓形蟲(chóng)的弱毒疫苗一直被人們看作是效果較好的疫苗,由于有毒力返強(qiáng)和在體內(nèi)形成包囊的可能,使其存在一定的生物安全性問(wèn)題。在尋找保護(hù)性抗原方面,應(yīng)尋找保護(hù)力強(qiáng)的抗原,將蟲(chóng)體不同發(fā)育時(shí)期的保護(hù)性抗原聯(lián)合應(yīng)用是未來(lái)弓形蟲(chóng)疫苗的研究方向。由于細(xì)胞免疫在弓形蟲(chóng)的抗感染免疫中起著重要作用,研發(fā)能夠誘導(dǎo)T
15、hl、Th2、干擾素活性的保護(hù)性抗原疫苗,及將某些強(qiáng)保護(hù)性抗原中含有的T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞表位片段重組構(gòu)成多表位疫苗應(yīng)是今后疫苗研究的趨勢(shì)之一。增強(qiáng)核酸疫苗的免疫效果亦是今后的重點(diǎn)研究方向,如核酸疫苗中優(yōu)選密碼子的設(shè)計(jì)、免疫途徑和方法的選擇及評(píng)估體系的建立等,均有待于作進(jìn)一步探討c隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展,利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究疫苗成為新的熱點(diǎn),寄生蟲(chóng)不同發(fā)育階段的2-I)電泳圖譜聯(lián)合質(zhì)潛分析可用于鑒定特異性蛋白,通過(guò)對(duì)2-D電泳中有區(qū)別斑點(diǎn)的印跡分析,能鑒別出具有免疫原性的蛋白質(zhì)。弓形蟲(chóng)作為一種嚴(yán)重的人畜共患病在公共衛(wèi)生方面有著重要意義,新型弓形蟲(chóng)疫苗的最終發(fā)展目標(biāo)是提供能夠保護(hù)動(dòng)物和人類健康的疫
16、苗“相信隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,人類在弓形蟲(chóng)疫苗的研究上必會(huì)取得新的進(jìn)展。參考文獻(xiàn):1CHARTIERC,MALLEREAUMP.VnccinalefficacyoftoxoplasmagondiiS48straintestedinanexpcrimentaltnalingoatsJ.AnnaiesdeMedicineVeterinaire,2001(3):145.2 張洪花,悻廣東.弓形蟲(chóng)抗原的保護(hù)性研究J.中國(guó)寄生蟲(chóng)病防治雜志,2001,14(1):3.3 JSMAELAB,SEKKA1D.TheMIC3geneoftoxoplasmagondiiisanovelpotentvaccinec
17、andidateagainsttoxoplasmosisJ).InfectInmmu,2003,7】(11):6222-6228.4 王丹靜,舒衡平.弓形蟲(chóng)和乙蟻肝炎病毒混合核肢疫苗的研究m.pcDNA3-HBsAs-GRA!免疫小鼠的保護(hù)性觀察JJ.中國(guó)人咨共患病雜志,2005,21(6):515-518.(011)CNCPS體系對(duì)牛日糧營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)的研究進(jìn)展曲永利微,吳健毫2,張永根I(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,黑龍江哈爾濱150030;2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,黑龍江大慶163319)中圖分類號(hào):S823文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A康奈爾凈碳水化合物凈蛋白(cornel!netcarbohy
18、drateandproteinsystemforcattle,CN(1PS)體系是美國(guó)康奈爾大學(xué)眾多科學(xué)家提出的牛用動(dòng)態(tài)能髭、蛋白質(zhì)及氨基酸體系,能夠真實(shí)地反映奶牛采食的碳水化合物與蛋白質(zhì)在痛胃內(nèi)的降解率、消化率、外流數(shù)量,以及能量、蛋白質(zhì)的吸收效率等情況,該體系的研究口的是提供-個(gè)對(duì)牛進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)診斷和H糧營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)的計(jì)算體系,到目前為止CNCPS體系已發(fā)展到第6版。1CNCPS體系對(duì)牛瘤胃發(fā)酵的評(píng)價(jià)CNCPS體系肘牛痛日微生態(tài)的劃分CNCPS體系把瘤胃微生態(tài)分為發(fā)酵結(jié)構(gòu)性碳水化合物(SC)與非結(jié)構(gòu)性碳水化合物(NSC)微生物兩收稿日期:2009-01-04;修回日期:2(X)911-11基金項(xiàng)目:農(nóng)業(yè)部現(xiàn)代奶W尸W技術(shù)休系項(xiàng)目作者簡(jiǎn)介:曲永利(1972-),男,副教授,搟士.通訊作者:張永根(1962-),男,教授,博上,博士生導(dǎo)師.文章編號(hào):1004-7034(2010)02-0027-03部分。發(fā)酵結(jié)構(gòu)性碳水化合物細(xì)函只發(fā)酵細(xì)胞壁碳水化合物,利用基作為氮源而不發(fā)酵小肽與氮基酸;發(fā)酵非結(jié)構(gòu)性碳水
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