乳與乳制品非常規(guī)理化指標(biāo)檢驗(yàn)維生素B6的測定

1、YLNB1. 范圍本方法規(guī)定了用反相液相色譜法測定維生素 &的方法。 本方法適用于嬰幼兒配方食品和乳粉中維生素B6的測定。2. 原理樣品經(jīng)熱水萃取等前處理后，經(jīng) C18色譜柱分離，熒光 檢測器檢測，外標(biāo)法定量維生素 Be（吡哆醇、吡哆醛、吡哆 胺）的含量。3. 試劑所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；所有實(shí)驗(yàn)用水， 如未注明其他要求，均指三級(jí)水。3.1高峰氏淀粉酶3.2鹽酸溶液為：5mol/l3.3氫氧化鈉溶液為:5mol/l3.4冰乙酸：優(yōu)級(jí)純3.5無水甲醇：色譜純3.6辛烷磺酸鈉：優(yōu)級(jí)純3.7三乙胺體積分?jǐn)?shù)99.9%3.8標(biāo)準(zhǔn)溶液吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液濃度均為200ug

2、/ml 。準(zhǔn)確稱取吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)品各用水溶解并定容至容量瓶中。吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度均為2.0ug/ml 。取1.0ml標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(3.8.1 )，用水定容至100ml。4. 儀器4.1超聲波振蕩器。4.2高壓液相色譜儀：帶熒光檢測器。4.3色譜柱：30X 4mm C18或具有同等性能的色譜柱。4.4酸度計(jì)。5. 方法5.1樣品預(yù)處理含淀粉的樣品精確稱取5.0g 樣品，放人150mL隹形瓶中，加入0.5gTaka淀粉酶(3.1)，再加入25mL45- 50 C的蒸餾水，混合均 勻后，用氮?dú)馀懦績?nèi)空氣，蓋上瓶塞，置450 C烘箱內(nèi)30min，取出冷卻至室溫。不含

3、淀粉的樣品精確稱取5.0g樣品，放入150mL隹形瓶中，加入25mL60C的蒸餾水，振搖，靜置 5-l0min，使樣品充分溶解并降至室溫。5.2測定液的制備5.2 . 1用鹽酸溶液（3.2 ）慢慢調(diào)節(jié)樣品溶液的pH值至1.70 , 放置約1min，再用氫氧化鈉溶液（3.3）調(diào)節(jié)樣品溶液的pH值 至4.50。5.2.2 將樣品溶液轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中，用蒸餾水反復(fù)沖洗 錐形瓶，洗液合并于50mL容量瓶中，并用水定容至 50mL.5.2.3 把上述容量瓶放人超聲波水?。?.1）中，振蕩10min另取50mL容量瓶，上面放入三角漏斗和濾紙，把樣品 溶液倒入其中，自然過濾。濾液再經(jīng)0.45 um微孔

4、濾膜加壓過濾，用試管收集，即為樣品待測液。5.3色譜條件檢測靈敏度：0.002AU/ MV檢測器條件：熒光激發(fā)波長Ex:293nm，發(fā)射波長Em:395nm柱溫:30 C流速：1.00mL/min流動(dòng)相：體積分?jǐn)?shù)為5.0%的甲醇、0.20 g/IOOmL辛烷磺 酸鈉、體積分?jǐn)?shù)為25%勺三乙胺水溶液，用乙酸調(diào)pH= 3.00。 5.4定量分析（外標(biāo)法）注射一定量的標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.8.2）進(jìn)入色譜儀，得到組分i的峰高（或峰面積）Ai，注射等體積的樣品待測液進(jìn)入色 譜儀，得到組分i的峰高（或峰面積）Bi。6. 結(jié)果計(jì)算n(1)樣品中維生素 圧的含量（mg/IOOg）= X醇+ X荃+ X安注：樣品中維生素&是各組分的含量之和.樣品中各組分含量(mg/100g)=C Bi V 100m Ai 1000式中:Bi 樣品組分i的峰高或面積；Ai 標(biāo)準(zhǔn)工作液中組分i的峰高或面積；C 標(biāo)準(zhǔn)工作液中組分