氨基甲酸酯柱后衍生檢測(cè)方案書介紹

1、氨基甲酸酯TW-PCD2000柱后衍生設(shè)備檢測(cè)方案書介紹農(nóng)殘檢測(cè)方法主要有液相色譜法、光譜法、氣質(zhì)聯(lián)用等，其中柱后衍生的高效液相法方法簡(jiǎn)單、可靠、靈敏度高。泰特儀器衍生系統(tǒng)引進(jìn)國(guó)外先進(jìn)的溫度控制技術(shù)和關(guān)鍵的控制元器件，各項(xiàng)性能均能達(dá)到國(guó)外同類型儀器的指標(biāo)，完全可以滿足農(nóng)業(yè)部相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。且性能價(jià)格比遠(yuǎn)優(yōu)于進(jìn)口產(chǎn)品。柱后衍生原理背景氨基甲酸酯類農(nóng)藥由于高效、經(jīng)濟(jì)而被廣泛應(yīng)用于蔬菜水果種植過(guò)程，但會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重污染，并引發(fā)中毒。2004 年發(fā)布的我國(guó)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761 中，柱分離后在線水解生成的甲胺進(jìn)行熒光衍生的檢測(cè)方法作為蔬菜和水果中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法被采納。N-氨基甲

2、酸酯類化合物經(jīng)反相色譜法分離，柱后在堿的條件下水分解生成甲胺。生成的甲胺與一級(jí)胺的熒光衍生化試劑O-苯二甲醛（OPA）反應(yīng)，進(jìn)行較高靈敏度的熒光檢測(cè)。氨基甲酸酯的一般結(jié)構(gòu)是N-甲基取代氨基甲酸酯，有不同的成酯基團(tuán)。結(jié)構(gòu)分子式如圖圖中的10 種氨基甲酸酯的分離可用 5m C18 柱溫恒定、以水/甲醇梯度洗脫。其出峰順序根據(jù)其相對(duì)的疏水性。氨基甲酸酯（methiocarb）疏水性最強(qiáng)，最后被洗脫出來(lái)。分析過(guò)程：氨基甲酸酯首先被NaOH溶液在100水解形成醇、碳酸鹽、和甲胺。第二次反應(yīng)中甲胺與鄰苯二甲醛（OPA）和親和試劑ThiofluorTM試劑反應(yīng)形成一種高熒光的衍生物。注意：1-萘酚不需要衍生

3、也有熒光，胺甲萘水解后衍生也生成1-萘酚，但是兩者具有不同的保留時(shí)間。這一特點(diǎn)可被用于故障診斷?；緲悠分苽湎旅媸菍?duì)蔬菜和水樣品的制備。更多的細(xì)節(jié)請(qǐng)參看EPA531.2 對(duì)飲用水的檢測(cè)，AOAC 對(duì)蔬菜的檢測(cè)。對(duì)蔬菜樣品的檢測(cè)用已睛提取氨基甲酸酯，用甲醇重新溶解，用0.45m 濾膜過(guò)濾對(duì)水樣品的檢測(cè)采樣標(biāo)準(zhǔn)EPA 采用標(biāo)準(zhǔn)1 加1.8mL ClorAC 緩沖液到60mL 樣品瓶（井水和河水見(jiàn)注釋）2 如果樣品被氯化，每60ml 樣品加入5mg 硫代硫酸鈉。3 將去氯化的樣品加入到樣品瓶中，密封并混勻。4 10儲(chǔ)存，4下運(yùn)輸可保存28 天。樣品制備用0.45m 濾膜過(guò)濾2mL 樣品進(jìn)樣量200-

4、400L對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品和空白：將10mL ChorAC 用色譜純水稀釋至1000mL注釋：井水和河水中含有膠狀鐵離子。如果樣品未過(guò)濾便儲(chǔ)存，那么鐵離子只有在反應(yīng)器遇到NaOH 時(shí)才又沉淀出來(lái)。所以推薦先用0.45m 濾膜過(guò)濾后再用ChlorAC 溶液保存。試劑制備氨基甲酸酯的分析需要兩中衍生試劑：水解試劑（NaOH）和鄰苯二醛注意：首次使用前必須對(duì)試劑瓶、管線和泵進(jìn)行清洗，再用甲醇沖洗，以較少熒光背景。試劑1，水解試劑關(guān)掉氣源清洗試劑瓶并用甲醇沖洗，用蘸過(guò)甲醇的干凈紙巾擦拭吸取管。水解試劑不需要制備。直接將水解試劑（Cat No CB130）倒入試劑瓶中。蓋上瓶蓋，關(guān)閉進(jìn)氣閥。水解試劑會(huì)一直很溫度注

5、意： 不推薦自己配制水解試劑，因?yàn)楦呒兌鹊腘aOH 很達(dá)到。試劑2：OPA 試劑1 將945mL OPA 稀釋劑（Cat No CB910）倒入試劑瓶，留5mL 第五步使用。2 蓋上瓶蓋，打開(kāi)進(jìn)氣閥，開(kāi)啟氣源。使惰性氣體噴射滿全瓶。持續(xù)冒泡10 分鐘3 將100mgOPA（Cat NO O120）溶解于10mL 色譜純甲醇中。4 關(guān)閉氣源，打開(kāi)瓶蓋。將OPA 溶液倒入已經(jīng)去氧的稀釋液中。5 溶解2g ThiofluorTM（Cat NO 3700-2000）與第一步留下的5mLOPA 稀釋液中并倒入試劑瓶。6 蓋上瓶蓋，打開(kāi)氣源，使其噴射幾分鐘后關(guān)閉進(jìn)氣閥。輕輕搖動(dòng)試劑瓶使其完全混勻。注意：不

6、推薦自行配制OPA 稀釋液，因?yàn)楣杷徕c包含許多重金屬離子和不溶物質(zhì)。它們將會(huì)沉淀在反應(yīng)器和流通池中。一年的質(zhì)保不包括此種污染帶來(lái)的損壞。OPA 試劑對(duì)氧敏感并會(huì)降解。當(dāng)OPA 試劑瓶中充滿惰性氣體時(shí)，OPA 試劑的活性和保持2 周。柱后分析條件屏幕顯示：4位LED實(shí)際溫度顯示(紅色) 4位LED設(shè)定溫度顯示(綠色氨基甲酸酯分析推薦的柱后衍生條件，相關(guān)的HPLC條件參見(jiàn)樣品譜圖與梯度洗脫部分。試劑1：CB130,水解試劑（NaOH）試劑2：鄰苯二醛和ThiofluorTM 于CB190 稀釋液中泵1：流速：0.30ml/min泵2：流速：0.30ml/min反應(yīng)器1：500L100反應(yīng)器2：10

7、0L 室溫分析過(guò)程在最初條件下讓色譜柱平衡約20 分鐘注射10L 氨基甲酸酯測(cè)試混合液（或者一定體積的自制標(biāo)準(zhǔn)品），收集第一張譜圖。樣品譜圖與梯度洗脫以下峰名應(yīng)用與本節(jié)的所有譜圖1 涕滅威亞砜 7 殘殺威2 涕滅威砜 8 卡巴呋喃3 草氨酰 9 胺甲萘4 甲氨叉威 10 1-萘酚5 3-羥基卡巴呋喃 11 氨基甲酸酯6 涕滅威 12 BDMC 內(nèi)標(biāo)物氨基甲酸測(cè)試混合物，10L 進(jìn)樣，25cm，C8 柱（0840250）氨基甲酸測(cè)試混合物，0.25ppb，10L 進(jìn)樣，25cm，C8 柱（0840250）0840250 柱（4.0mm ID×250MM）用于甲醇溶解樣品HPLC 流速：

8、0.8ml/min 柱溫37氨基甲酸測(cè)試混合物，10L 進(jìn)樣，15cm，C18 柱（1846150）1846150 柱（4.6mm ID×150MM）用于甲醇溶解樣品HPLC 流速：1ml/min 柱溫42氨基甲酸測(cè)試混合物，10L 進(jìn)樣，25cm，C18 柱（1846250）1846250 柱，（4.6mm ID×250MM）用于甲醇溶解樣品HPLC 流速：1ml/min 柱溫42完成分析之后，執(zhí)行關(guān)閉程序，將氨基甲酸酯分析柱保存于100甲醇中。注意：保存OPA 試劑是應(yīng)保留惰性氣體，關(guān)閉試劑瓶上藍(lán)色的試劑閥防止不使用時(shí)試劑虹吸。氨基甲酸酯分析的注意事項(xiàng)1.配制試劑過(guò)程中

9、要始終配帶手套，OPA 與ThiofluorTM 試劑會(huì)引起皮膚刺激。OPA 試劑為對(duì)氧敏感，不斷降解。得到最佳的靈敏度需新制溶液。在惰性氣體的保護(hù)下，OPA 試劑可以保存兩周。ThiofluorTM 具有強(qiáng)烈的吸濕性，一定要在密封性好的容器中保存。2.不推薦用戶自制OPA 稀釋劑，因?yàn)榕鹚徕c（任何等級(jí)）包含著大量的重金屬離子污染物和不溶物質(zhì)。這些不純物會(huì)沉淀在反應(yīng)器和流通池中。由此造成的損壞不在保修范圍之中。3.使用色譜級(jí)的甲醇和水，防止產(chǎn)生基線漂移、鬼峰和基線噪音。4.推薦使用瓶裝的色譜級(jí)純水，特別是在系統(tǒng)剛開(kāi)啟時(shí)。如果使用水凈化系統(tǒng)得到的水，要確保此水凈化系統(tǒng)經(jīng)過(guò)了活性碳清除了有機(jī)物，并且活性碳柱芯必須安裝在離子交換柱芯的后面。（許多離子交換樹(shù)脂沒(méi)有去除對(duì)OPA 有影響的污染物而產(chǎn)生不可接受的熒光背景。）5.試劑瓶中的液體必須每隔3 到4 天更換一次以防止細(xì)菌的生長(zhǎng)。6.測(cè)試混合物只能作為氨基甲酸酯的定性測(cè)定，不推薦將其作為校正使用。7.所有樣品必須通過(guò)0.45m 薄膜過(guò)濾。如果存在膠體，則需進(jìn)一步過(guò)濾。8.水性樣品溶解于適合的緩沖溶液，具體細(xì)節(jié)參見(jiàn)EPA 531.2.9.甲醇溶解樣品，進(jìn)樣10l。近樣量大降引起峰的變形。10.小體積水樣進(jìn)樣（<20l），兩種分析柱均可以使用。當(dāng)進(jìn)樣體積大于300l，則只能使用25cm 的分析柱，并使樣品停留在泵頭