口蹄疫疫苗的研究進(jìn)展.docx

1、口蹄疫疫苗的研究進(jìn)展趙文仕卜楊繼生2肖建忠I和麗春3王向菊4李壽春4(1,云南省香格里拉縣富牧獸醫(yī)局飼料草山站674400；2,云南省香格里拉縣育牧獸醫(yī)局重大動(dòng)物疫病辦674400；3,云南省香格里拉縣窗牧獸醫(yī)局動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所674400；4,云南省維西縣白濟(jì)訊鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)站674603；5,云南省香格里拉縣畜牧獸醫(yī)局畜牧改良站674400)摘要：口蹄疫(Foot-and-mouthdisease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一種高度烈姓接觸桂傳染病，主要危害豬、牛、羊、駱鴕等偶蹄動(dòng)物。其特點(diǎn)是發(fā)病率高，死亡率低，傳播速度快，能給盲牧業(yè)生產(chǎn)帶來重大經(jīng)濟(jì)損失，因此，拱準(zhǔn)各地區(qū)口

2、蹄疫病#流行血清型和越勢(shì)，采取積極有效的免疫預(yù)防注射工作成為口玷疫防控的首要任務(wù)。本文結(jié)合目筑口玲疫疫苗的動(dòng)態(tài)信息，對(duì)口玲疫疫苗研完進(jìn)展進(jìn)行了嫁述。關(guān)鍵詞：口降疫；疫苗；研究進(jìn)展；綜述口瞄疫病毒(Foot-and-MouthDiseaseVims,FMDV)屬于小RNA病毒科，口蹄疫病毒屬。FMDV分為0、A、C、AsiakSAT1、SAT2和SAT3共7個(gè)血清型，型間無交叉免疫反應(yīng)。根據(jù)不同國(guó)家的流行病學(xué)情況，F(xiàn)MDV疫苗常常包含不同血清型的疫苗毒株。南亞國(guó)家是三價(jià)疫苗，包含0、A、Asia1三種血清型，而南美國(guó)家使用0、A、C型三價(jià)病毒疫苗；在東南亞使用最普遍的疫苗是0型病毒的單價(jià)疫苗。中

3、東最常用的疫苗株是A22伊拉克A、伊朗1996和A伊朗1999,南美最好的疫苗株是A24巴西。SAT型疫苗主要是SAT1和SAT2二價(jià)苗或是SAT1、SAT2和SAT3三價(jià)苗，在非洲，人們很少使用SAT單價(jià)苗。目前，大多數(shù)流行口稀疫的國(guó)家采取以常規(guī)疫苗免疫為主的預(yù)防措施。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，F(xiàn)MD疫苗的研制不斷得到改進(jìn)，在借鑒傳統(tǒng)疫苗研究的基礎(chǔ)上，新型疫苗得到進(jìn)一步發(fā)展，為有效預(yù)防和控制FMD的發(fā)生獎(jiǎng)定了堅(jiān)實(shí)的技術(shù)支搽。1常規(guī)疫苗1.1弱毒疫苗FMD弱毒疫苗是把原始毒通過豚鼠(乳鼠)、雞胚、細(xì)作者簡(jiǎn)介(*)：起文仕(1970年-),男，健健族，云南省普格里拉縣人，大學(xué)本對(duì)，善反炸，主

4、要從事草電監(jiān)剝、草原監(jiān)理及盲牧北科技推廣工作。但是并未排除體外的情況。比如子宮頸逼鎖而胎兒死后因?yàn)樗慕M織上水分被子宮吸收從而變得體積縮小、表面干燥的干尸。像這種我們稱作胎兒的干尸化。這一情況根據(jù)妊娠的現(xiàn)象逐漸消退，但是不發(fā)情，到了妊娠期也不分娩。3流產(chǎn)的預(yù)防預(yù)處理(1) 加強(qiáng)對(duì)母牛的飼養(yǎng)管理，按照嚴(yán)格的要求補(bǔ)給質(zhì)量過關(guān)的飼料，應(yīng)當(dāng)做適當(dāng)?shù)倪\(yùn)動(dòng)，在運(yùn)動(dòng)期間不能太過劇烈，增強(qiáng)母牛的抵抗力和身體素質(zhì)，從而減少母牛流產(chǎn)的現(xiàn)象。(2) 經(jīng)常檢查母牛的身體情況，確保在妊娠期間沒有任何的病癥。如有發(fā)現(xiàn)病癥及時(shí)就醫(yī)以確保胎兒的安全及安全的分娩。經(jīng)常檢查母牛全身以及生殖器官的狀態(tài)、胎兒、胎衣、胎盤有沒有異常的

5、現(xiàn)象。有必要的時(shí)候無菌采取胎衣的水腫也是必不可少的，方便能夠及時(shí)做出有效地治療和預(yù)防。(3)當(dāng)胎兒干尸化時(shí)，可以肌肉注射前列烯即0.6mg,使子宮頸擴(kuò)張，從而增強(qiáng)子宮收縮，然后再注射10mg垂體后葉素。在子宮頸開始擴(kuò)張的時(shí)候，可以用手指把宮頸擴(kuò)大，往里面注入溫度適中的肥皂水，從而把胎兒取出來。奉考文敏：1 謝英.奶牛流產(chǎn)的原因分析以及防治方法少.養(yǎng)殖技術(shù)麻何.2012,12(3):118.2 劉忠縹，張翠牢，等.牛漁戶的原因以及對(duì)策J.農(nóng)民致富之友，2010,28(12):16-17.畜業(yè)技術(shù)頁疏育繁胞連續(xù)傳代馴化或人工誘變的途徑獲得人為的減本（致弱）毒株，經(jīng)接種制苗材料，大量擴(kuò)增病毒后感染組

6、織培養(yǎng)物，加入一定的保護(hù)劑和佐劑制成的病毒制劑。國(guó)外研究表明FMDV毒力可以被致弱。而我國(guó)在20世紀(jì)80年代培育出溫度敏感毒株，并培育了0型OP4細(xì)胞培養(yǎng)弱毒疫苗。但病毒對(duì)一種動(dòng)物的減莓并不能保證對(duì)其他動(dòng)物減毒，且由于新的亞型不斷出現(xiàn)及毒株致弱結(jié)果和致弱時(shí)間都不能確定。1964年歐洲口蹄疫防治委員會(huì)決定歐洲國(guó)家不用弱毒疫苗免疫，停止了弱毒疫苗的研究。目前世界許多國(guó)家和地區(qū)在FMD的防治中都采用滅活疫苗。1.2天活疫苗常規(guī)滅活疫苗是經(jīng)一系列試駛動(dòng)物選擇的田間毒株經(jīng)病毒培養(yǎng)系統(tǒng)大危擴(kuò)增獲得的病毒制備物，滅活劑處理后添加佐劑制成的-類生物制品。1925年Belin首次用甲醛滅活牛舌皮組織病料制成了滅

7、活疫苗；1966年Lapstich和Telling等應(yīng)用乳倉(cāng)就腎傳代細(xì)胞（BHK.21）深層懸浮培養(yǎng)法制備門蹄疫疫苗，可大髭培養(yǎng)細(xì)胞、增殖病毒和制造疫苗?，F(xiàn)在大多數(shù)口蹄疫滅活疫苗仍用BHK-21克隆13或IBRS-2細(xì)胞生產(chǎn)。目前廣泛應(yīng)用二乙烯亞胺（BE1）作為滅活劑。佐劑有氫級(jí)化鋁膠、皂素、弗氏不完全佐劑、油包水乳劑等。有學(xué)者用分枝桿菌細(xì)胞壁的可溶性部分、合成硫辛酰胺、Avridine等作佐劑生產(chǎn)FMDV油佐劑滅活疫苗，可以降低抗原的用量，同時(shí)增強(qiáng)FMDV的細(xì)胞免疫應(yīng)答。滅活疫苗的缺點(diǎn)是熱穩(wěn)定性差，需要低溫保存，免疫持續(xù)期短，抗病毒潛有限，不能區(qū)分注射疫苗動(dòng)物和自然感染動(dòng)物，同時(shí)存在病毒滅活

8、不徹底而散毒的可能性。2新型疫苗2.1病毒栽體疫苗以病毒為載體的新型疫苗成為了基因T程的研究熱點(diǎn)之一，病毒重組活栽體疫苗可被視為減毒活疫苗和亞單位蛋向質(zhì)疫苗的結(jié)合，它既可以避免亞單位疫苗需要佐劑和多次接種注射的缺點(diǎn)，又可以誘導(dǎo)全面而持久的免疫反應(yīng)?？勺鳛闇p毒活疫苗的病毒載體有痘苗病密、腺病毒、桿狀病密、脊便灰質(zhì)炎病毒和單純皰疹病毒等，目前已用于FMD疫苗研究的載體主要有痘病毒、腺病毒和桿狀病盤載體等。（1）FMDV腺病毒重組活載體疫苗人腺病毒弱毒疫苗的安全有效使用，奠定了腺病毒作為載體研制的基礎(chǔ)。第一代腺病毒栽體起于20世紀(jì)80年代初，至今腺病毒載體已經(jīng)經(jīng)歷了4代發(fā)展。DuY等腺病毒載體構(gòu)建了

9、VP1基因和VP1主要抗原表位分別與巨噬細(xì)胞集落剌激因子共表達(dá)的重組活載體疫rAd-GMCSF-VPe和rAd-GMCSF-VPl,研究結(jié)果表明兩種疫苗均能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較高水平的FMDV特異性T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、IFN-gamma和1L-4,而且rAd-GMCSF-VPe和rAd-GMCSF-VPl均能對(duì)豬和豚鼠產(chǎn)生攻涯保護(hù)。（2）FMDV痘病癥近組活載體疫苗痘苗病毒載體是研究最早和最成功的病毒載體之-。痘苗病毒具有宿主范圍廣、增殖滴度高、穩(wěn)定性好、基因組容址大、含多個(gè)非必需區(qū)等優(yōu)點(diǎn)，有利于進(jìn)行基因T程操作和適于插入多個(gè)外源基因旦抗原性穩(wěn)定、免疫原性持久，能夠同時(shí)誘發(fā)體液和細(xì)胞免疫，相對(duì)安全。

10、Berinstein以痘苗病毒為載體構(gòu)建了表達(dá)FMDVC3Arg85株衣充蜀白前體P1基因的取組FMDV疫苗，免疫后凹檢測(cè)到高水平的FMDV和痘苗病毒的中和抗體,類似于滅活疫苗免疫所產(chǎn)生的抗體水平。有人采用金絲雀痘病毒為載體表達(dá)FMDV的VP1,其表達(dá)效率要比以疔苗病毒為載體高出100倍，具有曲好的應(yīng)用前景。此外，雞痘病宓表達(dá)載體具有安全、高效、外源基因容量大，宿主范闡較小等優(yōu)點(diǎn)，為疫苗的研究提供了可能，具有很好的發(fā)展前景C（3）FMDV偽狂犬病毒栽體改組活載體疫苗偽“犬病毒載體就是通過基因程技術(shù)使偽狂犬病毒載體中的毒力基因失活，使病毒的毒力減弱，但病毒粒子仍然保持良好的抗原性，能夠有效地刺激

11、機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。Ya。Q等用偽狂犬病毒載體構(gòu)建了共表達(dá)0型FMDV的P12A3C基因的重組活載體疫苗，并與用P12A3C構(gòu)建的DNA疫苗免疫效果進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，F(xiàn)MDV偽狂犬病毒收組活載體疫苗能誘導(dǎo)較高的抗體水平，對(duì)豚就的攻毒可完仝保護(hù)，而DNA疫苗抗體水平較低，對(duì)豚鼠的攻毒只能部分保護(hù)C2.2核酸疫苗DNA疫苗是指那些注入動(dòng)物體內(nèi)后能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的病毒保護(hù)性抗原基因表達(dá)質(zhì)粒。BeardC等構(gòu)建了兩個(gè)不同的質(zhì)粒，-個(gè)質(zhì)粒pP12X3C攜帶有FMDV衣充蛋I前體基因P1和蛋閂酶3C基因，用基因槍將該質(zhì)粒接種動(dòng)物可檢測(cè)到特異性的體液反應(yīng)。第2個(gè)DNA質(zhì)粒pWRMHX.攜帶有編碼完

12、整病毒的基因組（但明除了其細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)），用該質(zhì)粒接種豬后可以產(chǎn)生病毒樣粒子并誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。比較兩種質(zhì)粒pP12X3C和pWRMHX接種豬后的效果結(jié)果顯示，攜帶有夏制病毒基因組的質(zhì)粒DNA可以產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力，應(yīng)用pWRMHX經(jīng)肌肉注射、鼻內(nèi)接種和基因槍途徑接種的豬均對(duì)強(qiáng)毒攻擊產(chǎn)生部分保護(hù)力。ChanEW等構(gòu)建pCEIM和pCEIS兩個(gè)質(zhì)粒，它們分別含有FMDV的VP1基因的主要抗原位點(diǎn)（貌基酸殘基的第141位160位和200位213位套基酸）和鼠及豬的免疫球蛋月基因。用它們分別接種小W（腹部皮卜-）和豬（耳背部皮下），施者可剌激小鼠產(chǎn)生特異性的T淋巴細(xì)胞增生和中和抗體。后者兩次免疫的豬也

13、出現(xiàn)T淋巴細(xì)胞增生（SI可達(dá)8.1）,并產(chǎn)生高效價(jià)的中和抗體。在攻毒實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用pCEIS進(jìn)行免疫的豬可百分之百的保護(hù)。MaMingxiao等在總結(jié)國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的基礎(chǔ)上，利用FMDV2A蛋白自身裂解性和雙啟動(dòng)真核表達(dá)載體，構(gòu)建了FMDVP1-2A、豬IL-18和FMDV3C共表達(dá)的核酸疫苗PVIR-P12A1L18-3C和不攜帶豬IL-18的核酸疫苗pVIR-P12A-3C,研究結(jié)果表明，兩個(gè)核酸苗均對(duì)同源FMDV對(duì)豬的攻毒具有很好的保護(hù)性，且攜帶有豬IL-18基因的核酸苗免疫效果優(yōu)于不攜帝豬IL-18的核酸疫苗。2.3亞單位疫苗與合成肽疫苗FMDV的結(jié)構(gòu)俄白主要由VP1、VP2、VP3和V

14、P4組成，其中VP1是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的主要結(jié)構(gòu)蛋白。Vasan-tha等用脂質(zhì)體包裹0型和Asia1型FMDV的VP1制備亞單位疫苗，免疫豚鼠產(chǎn)生了高水平的中和抗體，小規(guī)模的田間試驗(yàn)也取得了比較好的效果。Kield等應(yīng)用重組DNA技術(shù)首次在大腸埃希菌中表達(dá)了口蹄疫病毒主要保護(hù)性抗原VPloHuang等則用含有半乳精吾酶和一個(gè)完整的FMDVVP1蛋白主要抗原決定簇的重組融合蛋白接種豚鼠和豬，可以產(chǎn)生特異性的中和抗體，起到有效的保護(hù)作用。Bitlie根據(jù)口蹄疫病毒01型VP1氨基酸序列分析資料，化學(xué)合成了140-160段氮基酸與載體蛋白偶聯(lián)，能誘導(dǎo)保護(hù)豚鼠的中和抗體。Di-marvh用合成的

15、01K病毒VP1的141-158段和200-213段基基酸組成40個(gè)氨基酸短肽，在其中間加上兩個(gè)脯敏酸和一個(gè)絲氨酸使多肽拆成立體構(gòu)型，大大提高了單段肽在豚鼠的應(yīng)答水平，并提出了VPI歿基端氨基酸在提高保護(hù)應(yīng)答中的重要性°這些亞單位疫苗與合成肽疫苗的免疫原性均基于它們能遞呈VP1蛋白G-H環(huán)上的關(guān)健的抗原表位。Taboga等應(yīng)用138頭牛進(jìn)行4種合成肽疫苗的效果檢測(cè)。結(jié)果表明各免疫組雖可產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，甚至高水平的中和抗體，但它們對(duì)免疫動(dòng)物的攻毒保護(hù)率沒有一個(gè)在40%以上。2.4表位疫苗研究表明，。型FMDV衣殼表面至少有5個(gè)抗原位點(diǎn)，其中位于VP1140-160位氨基酸處的A位點(diǎn)

16、和位于VP1C端200-213位敏基酸C位點(diǎn)是兩個(gè)B細(xì)胞表位能修誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異的FMDV中和抗體；Asial型FMDV抗原位點(diǎn)與0型FMDV相似；C型FMDV有4個(gè)抗原位點(diǎn)，A型FMDV抗原位點(diǎn)的命名和定位比較混亂，利用A10的單克隆抗體反應(yīng)把A型FMDV的抗原位點(diǎn)分為4組。ZhangHong-ying等對(duì)FMDV5個(gè)主要抗原表位和VP1上的T細(xì)胞表位，通過不同組合構(gòu)建5種DNA疫苗，通過對(duì)免疫原性研究表明，含有T細(xì)胞表位和抗原位點(diǎn)1,5的DNA疫苗免疫效果好于其他組合的DNA疫苗。另外，為了增強(qiáng)FMDVB細(xì)胞表位的免疫原性，Winther和YahongHuang等先后將B細(xì)胞表位與乙型肝炎

17、病毒（HBV）核蛋白融合表達(dá)，形成病毒樣粒子，構(gòu)建DNA疫苗或轉(zhuǎn)染煙草構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因植物多表位疫苗。Marchi等以鑰孔蟲戚血蘭素作為骨架與B細(xì)胞表位融合表達(dá)，構(gòu)建FMDV表位疫苗，通過對(duì)豚鼠、牛和豬的動(dòng)物攻毒實(shí)驗(yàn)均表現(xiàn)出了良好的保護(hù)性。馬鳴浦等人利用計(jì)算機(jī)軟件模擬分析，對(duì)。型、A型和Asial型FMDV優(yōu)勢(shì)抗原表位進(jìn)行了分子設(shè)計(jì)，先后構(gòu)建了0型、A型和Asial型FMDV復(fù)合多表位DNA疫苗和雞痘病毒重組活栽體疫苗。2.5空衣充亞單位疫苗Mayr等構(gòu)建了表達(dá)A12型FMDV衣殼蛋白和3C蛋白酶的復(fù)制缺陷眼腺病毒載體Ad5-FMDVO免疫豬產(chǎn)生了特異性中和抗體，5/6免疫豬獲得了攻毒保護(hù)，沒有獲

18、得保護(hù)的豬癥狀與對(duì)照組相比也比較輕。隨后，Moraes等構(gòu)建了表達(dá)A24型FMDV空衣殼粒子的重組腺病危，用比以前高10倍的免疫劑扯一次免疫豬，可誘導(dǎo)中和抗體產(chǎn)生，在免疫7d、144和42d后攻毒，所有免疫豬都可得到保護(hù)。盧曾軍等構(gòu)建了表達(dá)0型FMDV空衣殼的復(fù)制缺陷型重組腺病毒Ad-P12x3C,免疫豚鼠25d后，用同源病毒攻毒，所有豚鼠都獲得保護(hù)；豬免疫28d后攻毒，3/4豬獲得完全保護(hù)。綜上所述，重組腺病毒載體疫苗能夠在動(dòng)物體內(nèi)很好的表達(dá)FMDV的空衣殼結(jié)構(gòu)，對(duì)豬的免疫效果要好于對(duì)牛的免疫效果，說明重組腺病毒在兩種動(dòng)物體內(nèi)的作用方式不同。腺病毒載體疫苗還需要在提高空衣殼的表達(dá)量和延長(zhǎng)表達(dá)的時(shí)間這兩方面進(jìn)行改進(jìn)。也有用牛痕病毒、禽痘病毒、以及偽狂犬病毒為載體表達(dá)FMDV空衣殼的研究。但由于空衣殼的表達(dá)量太低，需要免疫23次才能產(chǎn)生FMDV特異性中和抗體，攻毒保護(hù)效果也不理想。李志勇等構(gòu)建了含有Asial/HNK/CHA/05FMDVP1-2A和3C編碼區(qū)的重組體家蠶桿狀病毒