紫外分光光度法原理,使用范圍,儀器的校正,測定方法和注意事項(xiàng)

1、紫外分光光度法原理,使用范圍,儀器的校正,測定方法和注意事項(xiàng)紫外分光光度法一、原理可見光、紫外線照射某些物質(zhì),主要是由于物質(zhì)分子中價(jià)電子能級躍遷對輻射的吸收,而產(chǎn)生化合物的可見紫外吸收光譜?；谖镔|(zhì)對光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法。它是以朗伯比耳定律為基礎(chǔ)。1朗伯比耳定律 A = lg- = ECLT式中 A為吸收度;T為透光率;E為吸收系數(shù),采用的表示方法是(E1%1cm,其物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%(g/ml,液層厚度為1cm時(shí)的吸收度數(shù)值;C為100ml溶液中所含被測物質(zhì)的重量(按干燥品或無水物計(jì)算,g;L為液層厚度,cm。二、使用范圍凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵

2、結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物,根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度,可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。三、儀器可見-紫外分光光度計(jì)。其應(yīng)用波長范圍為200400nm的紫外光區(qū)、400 850nm的可見光區(qū)。主要由輻射源(光源、色散系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機(jī)、自動(dòng)記錄器及顯示器等部件組成。本儀器是根據(jù)相對測量的原理工作的,即先選定某一溶劑(或空氣、試樣作為標(biāo)準(zhǔn)(空白或稱參比溶液,并認(rèn)為它的透光率為100%(或吸收度為0,而被測的試樣透光率(或吸收度是相對于標(biāo)準(zhǔn)溶液而言,實(shí)際上就是由出射狹縫射出的單色光,分別通過被測試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液,這兩個(gè)光能量之比值,就是在一定波長下對于被測試樣的透光率(或吸收度。

3、本儀器可精密測定具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物、有色物質(zhì)或在適當(dāng)條件下能與某些試劑作用生成有色物的物質(zhì)。使用前應(yīng)校正測定波長并按儀器說明書進(jìn)行操作。四、儀器的校正1.波長的準(zhǔn)確度試驗(yàn)以儀器顯示的波長數(shù)值與單色光的實(shí)際波長值之間誤差表示,應(yīng)在±1.0nm 范圍內(nèi)。2.吸收度的準(zhǔn)確度試驗(yàn)3.雜散光的試驗(yàn)4.波長重現(xiàn)性試驗(yàn)5.分辨率試驗(yàn)五、測定方法1.對照品比較法(1按各品種項(xiàng)下的方法,分別配制供試品溶液和對照品溶液,對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分標(biāo)示量的100±10%,所用溶劑也應(yīng)完全一致,在規(guī)定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度后,按下式計(jì)算

4、含量,即得。(2計(jì)算式A樣×G對/稀釋倍數(shù)×100×1含量(%= - ×100%A對×G樣/稀釋倍數(shù)×100×12.吸收系數(shù)法(1按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液,在規(guī)定的波長處測定其吸收度,再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測定時(shí),應(yīng)注意儀器的校正和檢定。(2計(jì)算式A樣含量(%= - ×100%G樣/稀釋倍數(shù)×(E1%1cm對×100×13.計(jì)算分光光度法采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種,使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部

5、位測定時(shí),波長的微小變化可能對測定結(jié)果造成顯著影響,故對照品和供試品測試條件應(yīng)盡可能一致。若測定時(shí)不用對照品,如維生素A測定法,則應(yīng)在測定時(shí)對儀器作仔細(xì)的校正和檢定。六、注意事項(xiàng)1.空白溶液與供試品溶液必須澄清,不得有渾濁。如有渾濁,應(yīng)預(yù)先過濾,并棄去初濾液。2.測定時(shí),除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照,采用1cm的石英吸收池。3.在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度,以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確,除另有規(guī)定外,吸收峰波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi);否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長的準(zhǔn)確度,并以吸收度最大的波長作為測

6、定波長。4.一般供試品溶液的吸收度讀數(shù),以在0.30.7之間的誤差較小。5.吸收池應(yīng)選擇配對,否則要引入測定誤差。在規(guī)定波長下兩個(gè)吸收池的透光率相差小于0.5%的吸收池作配對,在必要的情況時(shí),須在最終測量扣除吸收池間的誤差修正值。6.由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收,因此測定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù),再計(jì)算含量。7.儀器的接地必須良好,一切裸露的零件對地電位不得超過24伏(測電筆的氖管不得發(fā)亮。8.在使用過程中,如需開啟試樣室蓋時(shí)或暫時(shí)停止測試時(shí),必須及時(shí)推入光門鈕桿(使光電管前光門關(guān)閉,保護(hù)光電管,以防止光電管受強(qiáng)光或長時(shí)間照射而損壞。9.在測定時(shí)或改測其它檢品時(shí),應(yīng)用待測溶液沖洗吸

7、收池34次,用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕(切忌把透光面磨損。10.取吸收池時(shí),應(yīng)拿毛玻璃兩面,切忌用手拿捏透光面,以免粘上油污。使用完后及時(shí)用測定溶劑沖凈,再用純化水沖凈,用干凈綢布或擦鏡紙擦干,晾干后,放入吸收池盒中,防塵保存。11.若吸收池內(nèi)外壁沾污,兩池差較大的處理。(1可用綢布纏在扁竹條外或用脫脂棉纏在細(xì)玻璃棒上蘸上乙醇,輕輕摩擦,再用純化水沖凈。(2如上述方法處理不好,必要時(shí)可用重鉻酸鉀-硫酸洗液泡洗12分鐘,用自來水沖凈,再用純化水沖凈。(3不得用毛刷刷洗或硬物拭擦,以防止表面光潔度受損影響正常使用。12.請務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥,目的是保護(hù)光學(xué)元件和光電放大

8、器系統(tǒng)不致受潮損壞而影響儀器的正常工作,如發(fā)現(xiàn)有的硅膠由藍(lán)色變?yōu)榉奂t色,應(yīng)立即更換。該儀器干燥劑筒有兩個(gè):一個(gè)是裝在放大器暗盒上,另一個(gè)裝在單色光器暗盒上。13.在更換硅膠干燥劑時(shí),應(yīng)關(guān)閉切斷電源。14.在停止工作期間,主機(jī)試樣室內(nèi)應(yīng)放入袋裝或筒裝硅膠干燥劑。用防塵罩罩住整個(gè)儀器,并在防塵罩內(nèi)放數(shù)袋防潮硅膠。15.儀器在操作中,狹縫的寬度應(yīng)從小逐漸開大。若狹縫過大,由于進(jìn)入光電管的光能量強(qiáng)度過大,將會(huì)使放大器輸出信號達(dá)到飽和,以至數(shù)字顯示出溢出(即數(shù)字閃爍或示1不變。這不是儀器有故障。16.將波長旋轉(zhuǎn)放在625nm,鋏縫關(guān)閉在0.02nm附近,選擇按鍵恢復(fù)在停止工作部位(即三個(gè)鍵均彈出。17.搬動(dòng)儀器時(shí)應(yīng)搬在主體端,不要搬在試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位,以防止儀器狹縫或光路部件受力而發(fā)生變形。并在搬動(dòng)或運(yùn)輸時(shí),應(yīng)將可動(dòng)部分固定,如各旋鈕可用膠布貼住,狹縫位置開大些,然后固定,不要關(guān)小狹縫,以免運(yùn)輸時(shí)振動(dòng)使狹縫刀口受損壞。18.儀器的光柵、反射鏡絕對不能擦拭,否則將損壞儀器光學(xué)表面,增加雜散光。19.儀器經(jīng)過搬動(dòng)請及時(shí)檢查并糾正波長精度,為保證測定的準(zhǔn)確性請經(jīng)常校準(zhǔn)波長精度。如有異常,應(yīng)