LTP試驗(yàn)方法1

1、海馬長時(shí)程（LTP）增強(qiáng)檢測1.同心圓雙極刺激電極與單極記錄電極的制備（玻璃微電機(jī)的制備）（1）同心圓雙極刺激電極，鎢絲的，不銹鋼的或者鉑金的都行。自己制作方法：取4號或5號針頭一枚,挫刀挫去底部，只留乳頭及針尖。針尖斜面剪去，打磨，通條暢通針道乳頭部焊接一不銹鋼條（普通回形針拉直即可）從乳頭部滴入絕緣漆，使針管內(nèi)道涂滿絕緣漆取適當(dāng)粗細(xì)合金絲穿過針道，乳頭外部分可饒成彈簧狀，防止合金絲容易被拉出尖鑷子纏些棉花，蘸絕緣柒均勻涂布回形針焊接端，乳頭，針尖外表面，漆不宜過多，勿使成竄珠狀放入烤箱中烤2小時(shí)，取出再涂一遍絕緣漆，再烤使用時(shí)將露在針尖外的合金絲剪去，只留約0.5mm合金絲尖和未涂布絕緣漆

2、的回形針端分別為電極的兩極。注射針頭打磨如上，用漆包線絞合，穿入針管，露出1-2mm。針?biāo)ǖ稳?02，用2次，減去少許銅絲即可。找一根注射針頭，截去尖端，磨平。高強(qiáng)度漆包線絞合，穿入針管，頭端露出1.5mm左右，在針?biāo)ú康稳?02，至針尖流出少許。干后用利剪剪去少許露出的漆包線，使尖端光亮即可。如尖端氧化嚴(yán)重，再剪去少許。（2）單極記錄電極：王水的配置微電極毛坯管清潔拉制電阻檢測灌注KCl溶液漂浮電極用直徑約為23mm 的銀絲制備。取長約8cm 的銀絲，繞成直徑約為5mm 的彈簧圈，圈數(shù)約為35。彈簧上端焊接的銀絲直徑1mm、長約3cm 的以便夾持于微電操縱器上。彈簧下端焊接銀絲直徑約1cm、

3、長約3cm 的銀絲，以便插入微電極內(nèi)。2.在三維腦立體定位儀上將麻醉大鼠固定，顱骨鉆孔備用（1）水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，以25%烏拉坦將實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉 (l.5g/kg)，動物體溫(肛溫)維持于3738之間，隨時(shí)注意動物狀態(tài)。（2）大鼠頭部固定：將大鼠的門齒固定于三維立體腦定位儀上頜固定器，然后把一側(cè)的耳捧推入動物的外道后，使動物的頭在處于兩滑道正中。再將另一耳捧推入另一側(cè)的外耳道，參考（圖-1）這時(shí)觀察兩個(gè)耳棒的刻度一致后，將兩耳棒上的固定螺絲扭緊，在將牙齒固定器上壓鼻環(huán)壓下后扭緊（鼻環(huán)、耳棒的松緊度調(diào)節(jié)適宜為好），這時(shí)從各個(gè)方向推壓動物頭部，均不會出現(xiàn)移動。（3）開顱鉆孔前的備皮：剪去動物

4、頭部毛，用2%碘酒及75%酒精棉球作頭部皮膚的消毒，沿矢狀縫作一3cm長的皮膚切口，分離皮下組織，用雙氧水清潔顱骨表面的筋膜及肌肉并剝離，推開骨膜，暴露前囟、人字縫及矢狀縫。參考（圖-2）開顱勿傷及腦膜,盡量避免出血。（4）確定標(biāo)準(zhǔn)中線：將金屬定位針向下移動到矢狀縫上方后，再前后移動定位針，使定位針定位到前囟。（5）大鼠海馬定位鉆孔：按照坐標(biāo)(刺激電極為S:Bregma后4.2mm，中線右側(cè)旁開3.8mm，記錄電極為R:Bregma后3.4mm，中線右側(cè)旁開2.5mm)，參考（圖-3）圖-1圖-2圖-3將自制綁定于聚乙烯管內(nèi)的同心圓雙極刺激電極和單極記錄電極緩慢同步垂直插入海馬內(nèi)刺激和記錄部位

5、，即schaffer側(cè)支和CAI區(qū)放射層63，接近預(yù)定部位時(shí)，緩慢、精細(xì)調(diào)節(jié)刺激電極和記錄電極的下插深度，同時(shí)每1020s給予一個(gè)波寬為50ms，強(qiáng)度為2.55mv的正電壓刺激。測試刺激頻率為0.033Hz，直至出現(xiàn)最佳的場興奮性突觸后電位 (fleld exciatatory postsyna PticPotential，fEPSP)，然后將電極位置固定，在最佳fEPSP處以引起最大反應(yīng)30-40%的刺激強(qiáng)度作為記錄基礎(chǔ)fEPSP的刺激強(qiáng)度，記錄持續(xù)30min以確?；A(chǔ)性突觸傳遞的穩(wěn)定性。誘發(fā)LTP的高頻刺激 (high frequency stimulation，HFS)為200HZ，每串

6、刺激包含20個(gè)脈沖，共3個(gè)串刺激，串間隔為30s64。HFS誘發(fā)出LTP后連續(xù)記錄60min以觀察LTP反應(yīng)的長時(shí)程特點(diǎn)。記錄信號經(jīng)美國MP150型16導(dǎo)多道電生理信號采集處理系統(tǒng)進(jìn)行采集、放大，并在多媒體計(jì)算機(jī)中顯示和儲存，通過Sigmaplot軟件將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及圖像輸出處理。This is a fixed brain, all of the cerebral cortex has been removed exposing the whole hippocampus and the fornix. This is the dorsal view,and it will be easier to understand the sections modified This picture is very interesting. The hippocampus has been folded forward, clearly exposing the fornix colum. By following the fornix colum you will get a whole hip