XXXX年湖北省結(jié)核病防治研究所實(shí)驗(yàn)室診斷(魯進(jìn))

1、 2013年年8月月 魯進(jìn)上傳，以供學(xué)習(xí)魯進(jìn)上傳，以供學(xué)習(xí)2v結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核病的致病因子與確診依據(jù)，結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核病的致病因子與確診依據(jù)，結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷就是用直接或間接的方法來(lái)證結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷就是用直接或間接的方法來(lái)證明患者體內(nèi)存在結(jié)核分枝桿菌。在臨床患者樣本明患者體內(nèi)存在結(jié)核分枝桿菌。在臨床患者樣本中尋找結(jié)核分枝桿菌也就是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的主要內(nèi)中尋找結(jié)核分枝桿菌也就是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的主要內(nèi)容。理想的診斷技術(shù)應(yīng)該具有快速、特異、敏感、容。理想的診斷技術(shù)應(yīng)該具有快速、特異、敏感、準(zhǔn)確簡(jiǎn)便和價(jià)格低廉的特點(diǎn)，這也是結(jié)核界近百準(zhǔn)確簡(jiǎn)便和價(jià)格低廉的特點(diǎn)，這也是結(jié)核界近百年來(lái)技術(shù)研究的方向。年來(lái)技術(shù)研

2、究的方向。3v 目前結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢查主要有：目前結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢查主要有：v 結(jié)核病的細(xì)菌學(xué)診斷（涂片染色顯微鏡檢查、分枝桿菌分離培養(yǎng)、結(jié)核病的細(xì)菌學(xué)診斷（涂片染色顯微鏡檢查、分枝桿菌分離培養(yǎng)、分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)、分枝桿菌菌種鑒定）分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)、分枝桿菌菌種鑒定）v 結(jié)核病的免疫學(xué)診斷（皮膚結(jié)核菌素試驗(yàn)、結(jié)核抗體測(cè)定、結(jié)核結(jié)核病的免疫學(xué)診斷（皮膚結(jié)核菌素試驗(yàn)、結(jié)核抗體測(cè)定、結(jié)核抗原測(cè)定、細(xì)胞因子檢測(cè)）抗原測(cè)定、細(xì)胞因子檢測(cè)）v 結(jié)核病分子生物學(xué)檢測(cè)（結(jié)核病分子生物學(xué)檢測(cè)（DNA探針技術(shù)、探針技術(shù)、PCR測(cè)序、測(cè)序、PCR定性定性檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌、雙重實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌、雙重實(shí)

3、時(shí)熒光PCR技術(shù)和技術(shù)和TaqMan探針技探針技術(shù)及等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)），目前分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展非常快。術(shù)及等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)），目前分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展非常快。v 結(jié)核病病理學(xué)診斷。結(jié)核病病理學(xué)診斷。4v根據(jù)國(guó)家和我省的根據(jù)國(guó)家和我省的“十二五十二五”結(jié)核病防治規(guī)劃，要結(jié)核病防治規(guī)劃，要求求100的地（市）級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室具備藥物敏感的地（市）級(jí)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室具備藥物敏感性試驗(yàn)?zāi)芰Α⑿栽囼?yàn)?zāi)芰Α?00的區(qū)（縣）級(jí)實(shí)驗(yàn)室具備分枝的區(qū)（縣）級(jí)實(shí)驗(yàn)室具備分枝桿菌培養(yǎng)能力，同時(shí)根據(jù)我省桿菌培養(yǎng)能力，同時(shí)根據(jù)我省“三位一體三位一體”工作開(kāi)工作開(kāi)展的實(shí)際情況展的實(shí)際情況 ，目前我省各級(jí)開(kāi)展結(jié)核病診斷的實(shí)，目前我省

4、各級(jí)開(kāi)展結(jié)核病診斷的實(shí)驗(yàn)室在涂片、培養(yǎng)、藥敏實(shí)驗(yàn)方面能力還顯不足。驗(yàn)室在涂片、培養(yǎng)、藥敏實(shí)驗(yàn)方面能力還顯不足。因此主要從細(xì)菌學(xué)診斷給大家做些介紹，同時(shí)簡(jiǎn)介因此主要從細(xì)菌學(xué)診斷給大家做些介紹，同時(shí)簡(jiǎn)介目前我國(guó)正在評(píng)估和推廣應(yīng)用的新診斷技術(shù)。目前我國(guó)正在評(píng)估和推廣應(yīng)用的新診斷技術(shù)。6 每一張玻片都要編號(hào)每一張玻片都要編號(hào) 涂抹痰標(biāo)本涂抹痰標(biāo)本 自然干燥自然干燥 加熱固定加熱固定7使用鉛筆在磨砂面上編號(hào)使用鉛筆在磨砂面上編號(hào)8使用竹木簽進(jìn)行涂抹使用竹木簽進(jìn)行涂抹91011加熱固定涂片加熱固定涂片12太厚太厚 適宜適宜 太薄太薄13好好脫落脫落好好不均勻不均勻14 適宜適宜太厚太厚太薄太薄15v挑取了

5、痰標(biāo)本的膿性部分挑取了痰標(biāo)本的膿性部分v做螺旋狀軌跡涂抹均勻做螺旋狀軌跡涂抹均勻v 大小約為大小約為 2cm X 1cm v 不要太厚不要太厚v 透過(guò)染色前的痰膜可以隱約看到報(bào)紙上的透過(guò)染色前的痰膜可以隱約看到報(bào)紙上的字字16v 初染初染 (堿性復(fù)紅堿性復(fù)紅)v 脫色脫色 (鹽酸酒精鹽酸酒精)v 復(fù)染復(fù)染 (亞甲蘭亞甲蘭) 17堿性復(fù)紅脫色復(fù)染18v將涂片排放在染色架上將涂片排放在染色架上v滴加堿性復(fù)紅染色液，加熱出現(xiàn)蒸汽后，保持滴加堿性復(fù)紅染色液，加熱出現(xiàn)蒸汽后，保持5分鐘分鐘v流水輕緩沖洗流水輕緩沖洗v滴加脫色液，保持滴加脫色液，保持1分鐘分鐘 v流水輕緩沖洗流水輕緩沖洗v滴加亞甲蘭復(fù)染液

6、，保持滴加亞甲蘭復(fù)染液，保持1分鐘分鐘v流水輕緩沖洗流水輕緩沖洗19將涂片排放在染色架上，注意間隔將涂片排放在染色架上，注意間隔20滴加堿性復(fù)紅滴加堿性復(fù)紅21加熱加熱22流水沖洗流水沖洗23脫色脫色-流水輕緩沖洗流水輕緩沖洗24復(fù)染復(fù)染25流水洗去復(fù)染液流水洗去復(fù)染液 26在玻片架上自然干燥在玻片架上自然干燥27 ZN染色步驟 涂涂痰痰膜膜自自然然干干燥燥復(fù)復(fù)紅紅加加熱熱初初染染5 5分分鐘鐘自自然然干干燥燥鏡鏡檢檢流流水水沖沖洗洗美美蘭蘭復(fù)復(fù)染染3030秒秒5%5%鹽鹽酸酸酒酒精精脫脫色色1-31-3分分鐘鐘流流水水沖沖洗洗流流水水沖沖洗洗28v0.1%金胺金胺“O”染液染色染液染色10分

7、鐘，水洗；分鐘，水洗；3%的鹽酸酒精脫色的鹽酸酒精脫色1-2分鐘，直至無(wú)黃色可見(jiàn)，水分鐘，直至無(wú)黃色可見(jiàn)，水洗；洗；0.5%高錳酸鉀溶液復(fù)染高錳酸鉀溶液復(fù)染1-2分鐘，水洗，分鐘，水洗，晾干。晾干。v檢測(cè)用檢測(cè)用10倍目鏡，倍目鏡，40倍物鏡，不加油。倍物鏡，不加油。30單一的抗酸菌單一的抗酸菌31“V”- 字形字形32成簇的抗酸菌33復(fù)染太濃造成的影響復(fù)染太濃造成的影響34適宜的復(fù)染適宜的復(fù)染3536v陰性陰性 未發(fā)現(xiàn)抗酸菌未發(fā)現(xiàn)抗酸菌/ 300 視野視野v報(bào)告實(shí)際菌落數(shù)報(bào)告實(shí)際菌落數(shù) 1-8 條條 /300 視野視野v(1+) 3-9 條條 / 100 視野視野v(2+) 1-9 條條 /

8、 l 0 視野視野v(3+) 1-9 條條 / 每視野每視野v(4+) 達(dá)到或超過(guò)達(dá)到或超過(guò) 10 條條 /每視野每視野v報(bào)告報(bào)告1+至少觀察至少觀察300視野，視野，2+至少觀察至少觀察100視野，視野，3+以上至少以上至少50個(gè)視野個(gè)視野37v陰性陰性 未發(fā)現(xiàn)抗酸菌未發(fā)現(xiàn)抗酸菌/ 50視野視野v報(bào)告實(shí)際菌落數(shù)報(bào)告實(shí)際菌落數(shù) 1-9條條 /50 視野視野v(1+) 10-49 條條 / 50 視野視野v(2+) 1-9 條條 / 每視野每視野v(3+) 10-99條條 / 每視野每視野v(4+) 達(dá)到或超過(guò)達(dá)到或超過(guò) 100條條 /每視野每視野v報(bào)告報(bào)告2+至少觀察至少觀察50視野，視野，3

9、+以上至少以上至少20個(gè)視野個(gè)視野3839v對(duì)照標(biāo)記的患者姓名，在生物安全柜內(nèi)將約對(duì)照標(biāo)記的患者姓名，在生物安全柜內(nèi)將約2ml痰標(biāo)本痰標(biāo)本置于相應(yīng)的前處理管中；置于相應(yīng)的前處理管中；v使用吸管，將與痰標(biāo)本等體積使用吸管，將與痰標(biāo)本等體積4% NaOH加入前處理加入前處理管中；管中；v旋緊處理管螺旋蓋，接通渦旋振蕩器電源，將處理管在旋緊處理管螺旋蓋，接通渦旋振蕩器電源，將處理管在渦旋振蕩器上渦旋震蕩渦旋振蕩器上渦旋震蕩30秒左右；秒左右；v如果以手持拿處理管，持拿方法是以拇指、無(wú)名指分別如果以手持拿處理管，持拿方法是以拇指、無(wú)名指分別持拿處理管外壁，食指、中指按處理管螺旋蓋。持拿處理管外壁，食指

10、、中指按處理管螺旋蓋。40v將前處理管置于試管架內(nèi)，置于生物安全柜內(nèi)，室將前處理管置于試管架內(nèi)，置于生物安全柜內(nèi)，室溫靜置溫靜置15分鐘；分鐘；v擰開(kāi)羅氏培養(yǎng)管螺旋蓋，檢查培養(yǎng)基斜面底部的凝擰開(kāi)羅氏培養(yǎng)管螺旋蓋，檢查培養(yǎng)基斜面底部的凝固水，如果凝固水過(guò)多，則沿著斜面相對(duì)的一面的固水，如果凝固水過(guò)多，則沿著斜面相對(duì)的一面的培養(yǎng)管內(nèi)壁，將凝固水棄去。培養(yǎng)管內(nèi)壁，將凝固水棄去。v以無(wú)菌吸管吸取前處理后的痰標(biāo)本，吸取時(shí)吸取的以無(wú)菌吸管吸取前處理后的痰標(biāo)本，吸取時(shí)吸取的程度要小于擠壓的程度，使吸管前端一段不含液體，程度要小于擠壓的程度，使吸管前端一段不含液體，避免液體意外滴落。避免液體意外滴落。41v保

11、持培養(yǎng)基斜面水平或底端略高，均勻接種至酸性羅氏保持培養(yǎng)基斜面水平或底端略高，均勻接種至酸性羅氏培養(yǎng)基斜面上，每支培養(yǎng)基使用接種培養(yǎng)基斜面上，每支培養(yǎng)基使用接種2滴（約滴（約0.1 -0.15 ml），接種時(shí)第一滴液體接種至斜面中部，第），接種時(shí)第一滴液體接種至斜面中部，第二滴接種到培養(yǎng)基上部；二滴接種到培養(yǎng)基上部；v將用過(guò)的吸管置于廢液缸內(nèi)；將用過(guò)的吸管置于廢液缸內(nèi)；v旋上培養(yǎng)管螺旋蓋，不要太緊；旋上培養(yǎng)管螺旋蓋，不要太緊；v輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)并放低培養(yǎng)管底部，使接種的液體均勻的在斜輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)并放低培養(yǎng)管底部，使接種的液體均勻的在斜面上鋪開(kāi)。面上鋪開(kāi)。v培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，36

12、1孵育；孵育；42 操作操作 振蕩勻化振蕩勻化靜靜置置15分鐘分鐘43 37 37豎直培養(yǎng)豎直培養(yǎng)8 8周周均勻接種均勻接種0.1ml,2支支/標(biāo)本標(biāo)本斜面向上，斜面向上，3737水平放置水平放置24小時(shí)小時(shí)接種和孵育接種和孵育44渦旋振蕩渦旋振蕩1-21-2分鐘分鐘痰標(biāo)本中加入痰標(biāo)本中加入1-21-2倍體積倍體積4%NaOH4%NaOH分別接種分別接種0.1ml0.1ml前處理液至前處理液至2 2只培養(yǎng)基斜面只培養(yǎng)基斜面接種后接種后3 3天、天、7 7天天觀察，此后每周觀察，此后每周觀察一次觀察一次置置3737溫溫箱培養(yǎng)箱培養(yǎng)有菌落生長(zhǎng)需經(jīng)有菌落生長(zhǎng)需經(jīng)抗酸染色確認(rèn)，抗酸染色確認(rèn)，至第至第8

13、 8周無(wú)菌落周無(wú)菌落生長(zhǎng)報(bào)告陰性生長(zhǎng)報(bào)告陰性室溫靜置室溫靜置1515分鐘分鐘4 43 32 25 56 67 71 145v 接種后第接種后第3和和7日觀察培養(yǎng)情況，此后每周觀察一次，直日觀察培養(yǎng)情況，此后每周觀察一次，直至第八周末。每次觀察后要在培養(yǎng)結(jié)果記錄本上記錄觀察至第八周末。每次觀察后要在培養(yǎng)結(jié)果記錄本上記錄觀察結(jié)果。結(jié)果。v 無(wú)菌落生長(zhǎng)無(wú)菌落生長(zhǎng) 報(bào)告培養(yǎng)陰性報(bào)告培養(yǎng)陰性v 菌落生長(zhǎng)不及斜面面積菌落生長(zhǎng)不及斜面面積1/4時(shí)時(shí) 報(bào)告實(shí)際菌落數(shù)報(bào)告實(shí)際菌落數(shù)v 菌落占斜面面積菌落占斜面面積 1/4 報(bào)告報(bào)告(1+)v 菌落占斜面面積菌落占斜面面積1/2 報(bào)告報(bào)告(2+)v 菌落占斜面面積

14、菌落占斜面面積3/4 報(bào)告報(bào)告(3+)v 菌落布滿培養(yǎng)基斜面菌落布滿培養(yǎng)基斜面 報(bào)告報(bào)告(4+)46v 以藥物敏感性測(cè)試為目的（包括耐藥性診斷和耐藥監(jiān)測(cè)等），不以藥物敏感性測(cè)試為目的（包括耐藥性診斷和耐藥監(jiān)測(cè)等），不需要對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行涂片檢查，只需將培養(yǎng)物送至進(jìn)行藥物敏感性需要對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行涂片檢查，只需將培養(yǎng)物送至進(jìn)行藥物敏感性測(cè)試的實(shí)驗(yàn)室，并附培養(yǎng)物生長(zhǎng)情況的報(bào)告單。測(cè)試的實(shí)驗(yàn)室，并附培養(yǎng)物生長(zhǎng)情況的報(bào)告單。v 以培養(yǎng)作為診斷或評(píng)價(jià)療效為目的，需要對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行涂片顯微以培養(yǎng)作為診斷或評(píng)價(jià)療效為目的，需要對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行涂片顯微鏡檢查、鑒定，根據(jù)涂片和鑒定結(jié)果進(jìn)行報(bào)告。鏡檢查、鑒定，根據(jù)涂片和鑒定結(jié)

15、果進(jìn)行報(bào)告。v 培養(yǎng)物經(jīng)涂片顯微鏡檢查確定為抗酸菌后，結(jié)合菌落形態(tài)、生長(zhǎng)培養(yǎng)物經(jīng)涂片顯微鏡檢查確定為抗酸菌后，結(jié)合菌落形態(tài)、生長(zhǎng)時(shí)間，報(bào)告：羅氏培養(yǎng)抗酸菌陽(yáng)性時(shí)間，報(bào)告：羅氏培養(yǎng)抗酸菌陽(yáng)性v 經(jīng)菌種初步鑒定，證實(shí)為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群后，報(bào)告：羅氏培經(jīng)菌種初步鑒定，證實(shí)為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群后，報(bào)告：羅氏培養(yǎng)結(jié)核菌陽(yáng)性養(yǎng)結(jié)核菌陽(yáng)性 47v 1、幼稚菌落比較小，表面光滑、幼稚菌落比較小，表面光滑而有光澤呈黃色；成熟典型菌一而有光澤呈黃色；成熟典型菌一般為中等大小或較大，干燥粗糙，般為中等大小或較大，干燥粗糙，易碎，呈奶酪色，白色或橘黃色，易碎，呈奶酪色，白色或橘黃色，不透明凸起菌落。不透明凸起菌落。

16、v 2、不典型菌落為細(xì)小、園形、不典型菌落為細(xì)小、園形、濕潤(rùn)、易乳化、呈黃紅色，一般濕潤(rùn)、易乳化、呈黃紅色，一般7-10天內(nèi)就成熟，常為非典型天內(nèi)就成熟，常為非典型抗酸桿菌或非致病菌?？顾釛U菌或非致病菌。4849v 如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基污染，按污染面積報(bào)告如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基污染，按污染面積報(bào)告v 污染菌有明顯界限，且不超過(guò)斜面面積污染菌有明顯界限，且不超過(guò)斜面面積1/4 報(bào)告報(bào)告(C1+)v 污染菌有明顯界限，且不超過(guò)斜面面積污染菌有明顯界限，且不超過(guò)斜面面積1/2 報(bào)告報(bào)告(C2+)v 污染菌有明顯界限，且不超過(guò)斜面面積污染菌有明顯界限，且不超過(guò)斜面面積3/4 報(bào)告報(bào)告(C3+)v 污染菌沒(méi)有明顯界限

17、或布滿培養(yǎng)基斜面污染菌沒(méi)有明顯界限或布滿培養(yǎng)基斜面 報(bào)告報(bào)告(C4+) 50v 留取標(biāo)本后，盡可能立即進(jìn)行培養(yǎng)。如果不能立即處理，應(yīng)留取標(biāo)本后，盡可能立即進(jìn)行培養(yǎng)。如果不能立即處理，應(yīng)冷藏；冷藏；v 將氫氧化鈉分裝成若干小瓶（小包裝），每次使用新的氫氧化將氫氧化鈉分裝成若干小瓶（小包裝），每次使用新的氫氧化鈉；鈉；v 如果只有一臺(tái)生物安全柜，避免同時(shí)進(jìn)行涂片和培養(yǎng)操作；如果只有一臺(tái)生物安全柜，避免同時(shí)進(jìn)行涂片和培養(yǎng)操作；v 在同一批處理的痰標(biāo)本中，優(yōu)先處理涂片陰性的標(biāo)本，其次處在同一批處理的痰標(biāo)本中，優(yōu)先處理涂片陰性的標(biāo)本，其次處理陽(yáng)性級(jí)別低的標(biāo)本，最后處理涂片陽(yáng)性級(jí)別高的標(biāo)本理陽(yáng)性級(jí)別低的標(biāo)

18、本，最后處理涂片陽(yáng)性級(jí)別高的標(biāo)本v 打開(kāi)標(biāo)本容器蓋子時(shí)要緩慢以減少氣溶膠的產(chǎn)生，同時(shí)避免劇打開(kāi)標(biāo)本容器蓋子時(shí)要緩慢以減少氣溶膠的產(chǎn)生，同時(shí)避免劇烈震蕩標(biāo)本，震蕩后靜置幾分鐘，然后再打開(kāi)蓋子烈震蕩標(biāo)本，震蕩后靜置幾分鐘，然后再打開(kāi)蓋子51v處理標(biāo)本時(shí)，盡可能隨時(shí)蓋上容器蓋子，避免在生處理標(biāo)本時(shí)，盡可能隨時(shí)蓋上容器蓋子，避免在生物安全柜內(nèi)敞開(kāi)所有的標(biāo)本容器物安全柜內(nèi)敞開(kāi)所有的標(biāo)本容器v用過(guò)的無(wú)菌吸管應(yīng)置于廢液缸中；用過(guò)的無(wú)菌吸管應(yīng)置于廢液缸中；v正確標(biāo)記培養(yǎng)管避免標(biāo)本之間混淆；正確標(biāo)記培養(yǎng)管避免標(biāo)本之間混淆；v控制前處理去污染的接觸時(shí)間，從向標(biāo)本中加入氫控制前處理去污染的接觸時(shí)間，從向標(biāo)本中加入氫

19、氧化鈉到接種時(shí)間不能超過(guò)氧化鈉到接種時(shí)間不能超過(guò)20分鐘，為此，當(dāng)標(biāo)本分鐘，為此，當(dāng)標(biāo)本數(shù)量較多時(shí)，應(yīng)分批處理，每批標(biāo)本數(shù)量不超過(guò)數(shù)量較多時(shí)，應(yīng)分批處理，每批標(biāo)本數(shù)量不超過(guò)6份為宜；份為宜； 52v應(yīng)將培養(yǎng)結(jié)果及時(shí)反饋給臨床醫(yī)生。應(yīng)將培養(yǎng)結(jié)果及時(shí)反饋給臨床醫(yī)生。7天以內(nèi)的結(jié)果天以內(nèi)的結(jié)果觀察中如果發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)告知病人及時(shí)收集另一份標(biāo)觀察中如果發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)告知病人及時(shí)收集另一份標(biāo)本；如果發(fā)現(xiàn)快速生長(zhǎng)分枝桿菌（本；如果發(fā)現(xiàn)快速生長(zhǎng)分枝桿菌（7天內(nèi)長(zhǎng)出的菌天內(nèi)長(zhǎng)出的菌落）。立即報(bào)告結(jié)果并要求再收集另一份痰標(biāo)本。落）。立即報(bào)告結(jié)果并要求再收集另一份痰標(biāo)本。v結(jié)核菌可能在結(jié)核菌可能在3-4周內(nèi)生長(zhǎng)。發(fā)現(xiàn)

20、菌落并鑒定后立即周內(nèi)生長(zhǎng)。發(fā)現(xiàn)菌落并鑒定后立即報(bào)告結(jié)果。報(bào)告陰性培養(yǎng)結(jié)果時(shí)應(yīng)孵育滿報(bào)告結(jié)果。報(bào)告陰性培養(yǎng)結(jié)果時(shí)應(yīng)孵育滿8周。周。v登記內(nèi)容應(yīng)包括：菌落初生長(zhǎng)的日期以及陽(yáng)性培養(yǎng)物登記內(nèi)容應(yīng)包括：菌落初生長(zhǎng)的日期以及陽(yáng)性培養(yǎng)物的菌落特征的菌落特征;污染結(jié)果應(yīng)隨時(shí)檢出并報(bào)告。污染結(jié)果應(yīng)隨時(shí)檢出并報(bào)告。53v涂陽(yáng)培陰率涂陽(yáng)培陰率=培養(yǎng)陰性的病例總數(shù)培養(yǎng)陰性的病例總數(shù)/涂片檢查陽(yáng)涂片檢查陽(yáng)性的病例總數(shù)性的病例總數(shù)*100%v涂陽(yáng)培陰率應(yīng)涂陽(yáng)培陰率應(yīng)10%v污染率污染率=污染的培養(yǎng)管數(shù)量污染的培養(yǎng)管數(shù)量/培養(yǎng)管總數(shù)培養(yǎng)管總數(shù)*100%v污染率應(yīng)污染率應(yīng)5%54可能原因解決方法標(biāo)本保存不當(dāng)(時(shí)間、溫度） 標(biāo)

21、本留取后盡快培養(yǎng)，暫時(shí)無(wú)法培養(yǎng)應(yīng)于4C冰箱保存。標(biāo)本選擇不當(dāng)選擇標(biāo)本中膿樣、干酪樣可疑部分過(guò)處理（時(shí)間、濃度)4NaOH，12倍體積，20分鐘接種量太小每管接種0.1毫升溫箱溫度不當(dāng)溫箱內(nèi)置溫度計(jì)，每日監(jiān)測(cè)溫度。？55可能原因解決方法標(biāo)本保存不當(dāng)(時(shí)間、溫度）標(biāo)本留取后盡快培養(yǎng)，暫時(shí)無(wú)法培養(yǎng)應(yīng)于4C冰箱保存。前處理不充分4，12倍，充分混旋，20分鐘。材料滅菌不佳接種用吸管需高壓滅菌。操作不當(dāng)培訓(xùn)，預(yù)培養(yǎng)，嚴(yán)格按操作規(guī)程操作。培養(yǎng)基因素統(tǒng)一供應(yīng)，4C直立保存，1個(gè)月內(nèi)使用56v 目的：治療，監(jiān)測(cè)，診斷耐藥目的：治療，監(jiān)測(cè)，診斷耐藥v 主要就是診斷耐藥結(jié)核病、選擇和調(diào)整耐藥結(jié)核病治療主要就是診斷

22、耐藥結(jié)核病、選擇和調(diào)整耐藥結(jié)核病治療方案、開(kāi)展耐藥監(jiān)測(cè)以了解某一地區(qū)結(jié)核分枝桿菌的耐方案、開(kāi)展耐藥監(jiān)測(cè)以了解某一地區(qū)結(jié)核分枝桿菌的耐藥水平。藥水平。57v 比例法比例法 Canetti , 1963v 臨界藥物濃度（單和多藥物濃度）臨界藥物濃度（單和多藥物濃度）v 臨界菌群比耐藥菌群數(shù)臨界菌群比耐藥菌群數(shù)/全菌群數(shù)全菌群數(shù)v 1% 、10% v 絕對(duì)濃度法絕對(duì)濃度法 Meisnner， 1963v 臨界藥物濃度（單或多藥物濃度）臨界藥物濃度（單或多藥物濃度）v 臨界藥物菌落數(shù)（臨界藥物菌落數(shù)（10、20菌落）菌落）v 比率法比率法 Mitchson， 1963v RR= MIC被檢菌被檢菌/M

23、ICH37Rv：58v含藥培養(yǎng)基的制備含藥培養(yǎng)基的制備v菌液制備和稀釋菌液制備和稀釋v接種接種v培養(yǎng)培養(yǎng)v報(bào)告結(jié)果報(bào)告結(jié)果59WHO 推薦的推薦的DST培養(yǎng)基藥物濃度培養(yǎng)基藥物濃度 ( 2007)60v 實(shí)驗(yàn)前物品準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)前物品準(zhǔn)備v 所有實(shí)驗(yàn)用品必須無(wú)菌所有實(shí)驗(yàn)用品必須無(wú)菌v 所有用品一次性拿入實(shí)驗(yàn)室，不要在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中反復(fù)進(jìn)所有用品一次性拿入實(shí)驗(yàn)室，不要在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中反復(fù)進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室出實(shí)驗(yàn)室61v 一、臨床標(biāo)本初分離的菌株，若具備以下特點(diǎn)，可直接一、臨床標(biāo)本初分離的菌株，若具備以下特點(diǎn)，可直接用于藥敏試驗(yàn)：用于藥敏試驗(yàn)： 1、出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)菌落后、出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)菌落后12周的新鮮周的新鮮菌落。菌落。

24、2、沒(méi)有其他污染菌共存。、沒(méi)有其他污染菌共存。3、涂片確認(rèn)為抗酸菌、涂片確認(rèn)為抗酸菌v 二、以下情況需要二次傳代后才能進(jìn)行藥敏試驗(yàn)：二、以下情況需要二次傳代后才能進(jìn)行藥敏試驗(yàn)：1、 固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)老化的菌落。固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)老化的菌落。2、固體培養(yǎng)基上部分污、固體培養(yǎng)基上部分污染的菌落。染的菌落。62v 實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)：分枝桿菌藥敏試驗(yàn)是對(duì)高致病性實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)：分枝桿菌藥敏試驗(yàn)是對(duì)高致病性病原微生物的純分離培養(yǎng)物進(jìn)行操作，實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員病原微生物的純分離培養(yǎng)物進(jìn)行操作，實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入藥敏試驗(yàn)區(qū)須穿防護(hù)服、鞋套，實(shí)驗(yàn)中須戴手套、進(jìn)入藥敏試驗(yàn)區(qū)須穿防護(hù)服、鞋套，實(shí)驗(yàn)中須戴手套、帽子

25、、帽子、N95口罩?？谡?。63v 準(zhǔn)備磨菌瓶或磨菌管：準(zhǔn)備磨菌瓶或磨菌管：v 磨菌瓶為帶有可密封螺旋蓋的玻璃小瓶，裝入約磨菌瓶為帶有可密封螺旋蓋的玻璃小瓶，裝入約10個(gè)個(gè)直徑直徑3mm的玻璃珠，高壓滅菌后待用。的玻璃珠，高壓滅菌后待用。v 磨菌管為底部磨砂的玻璃管，帶有與之匹配的磨砂玻磨菌管為底部磨砂的玻璃管，帶有與之匹配的磨砂玻璃棰（磨菌棒），分別高壓后方可可使用。璃棰（磨菌棒），分別高壓后方可可使用。64v 磨菌瓶法：磨菌瓶法：v 在磨菌瓶中加入在磨菌瓶中加入12滴滴10%吐溫吐溫-80，用火焰消毒的接，用火焰消毒的接種環(huán)刮取種環(huán)刮取2-3周的新鮮菌落，置于磨菌瓶中。注意盡可能刮周的新鮮菌

26、落，置于磨菌瓶中。注意盡可能刮取多處的菌落。旋緊瓶蓋，在渦旋振蕩器上混旋取多處的菌落。旋緊瓶蓋，在渦旋振蕩器上混旋0.5-1分鐘。分鐘。加入少許滅菌的加入少許滅菌的PBS或生理鹽水?；蛏睇}水。v 將懸濁液轉(zhuǎn)移至比濁管中，加生理鹽水或?qū)覞嵋恨D(zhuǎn)移至比濁管中，加生理鹽水或PBS其濁度與標(biāo)其濁度與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽?zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽∕acFarland No.1）一致，即得到）一致，即得到1mg/ml的菌液。的菌液。65v 磨菌管法磨菌管法v 向磨菌管中加入向磨菌管中加入1滴滴10%吐溫吐溫-80，用火焰消毒的接種，用火焰消毒的接種環(huán)刮取環(huán)刮取2-3周的新鮮菌落，放入玻璃磨菌器底部，插入周的新鮮菌落，放

27、入玻璃磨菌器底部，插入磨菌棒捻動(dòng)，使呈乳酪樣，磨菌棒捻動(dòng)，使呈乳酪樣，v 加入少許滅菌加入少許滅菌PBS緩沖液或生理鹽水，靜止片刻，緩沖液或生理鹽水，靜止片刻，v 吸適量（吸適量（1-2ml）至比濁管中，加入生理鹽水直至其濁）至比濁管中，加入生理鹽水直至其濁度與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽ǘ扰c標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳葷峁埽∕acFarland No.1）一致，即）一致，即為為1mg/ml的菌液。的菌液。66取菌 磨菌67v每株菌事先準(zhǔn)備好每株菌事先準(zhǔn)備好2個(gè)稀釋管，然后用個(gè)稀釋管，然后用22 SWG標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)或微量吸管吸取比濁好的菌液，無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)或微量吸管吸取比濁好的菌液，無(wú)菌操作逐步稀釋至操作逐步稀釋至10-2m

28、g/ml和和10-4mg/ml。v 22 SWG標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)：金屬絲直徑標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)：金屬絲直徑0.7mm，接種環(huán)內(nèi)徑接種環(huán)內(nèi)徑3mm，1滿環(huán)移液滿環(huán)移液0.01ml。68v用用22 SWG標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)分別沾取標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)分別沾取1環(huán)環(huán) （即（即0.01ml ）10-2mg/ml和和 10-4mg/ml的菌液，的菌液，用劃線法均勻接種至對(duì)照及含藥培養(yǎng)基表面，應(yīng)用劃線法均勻接種至對(duì)照及含藥培養(yǎng)基表面，應(yīng)注意使菌液盡可能均勻分散于培養(yǎng)基斜面。最終注意使菌液盡可能均勻分散于培養(yǎng)基斜面。最終接種菌量為接種菌量為10-4mg和和10-6mg。v接種后的培養(yǎng)基置于接種后的培養(yǎng)基置于37培養(yǎng)，至四周后報(bào)告結(jié)培養(yǎng)，至

29、四周后報(bào)告結(jié)果。果。6970v 按以下方式記錄菌落生長(zhǎng)情況：按以下方式記錄菌落生長(zhǎng)情況：v 少于少于50個(gè)菌落：個(gè)菌落： 實(shí)際菌落數(shù)實(shí)際菌落數(shù)v 50-100個(gè)菌落：個(gè)菌落： 1+v 100-200個(gè)菌落：個(gè)菌落： 2+v 大部分融合（大部分融合（200-500個(gè)菌落）：個(gè)菌落）： 3+v 融合（大于融合（大于500個(gè)菌落）：個(gè)菌落）： 4+v 4周后觀察結(jié)果，如果生長(zhǎng)不良，可適當(dāng)延長(zhǎng)但不能超過(guò)周后觀察結(jié)果，如果生長(zhǎng)不良，可適當(dāng)延長(zhǎng)但不能超過(guò)6周報(bào)告結(jié)果周報(bào)告結(jié)果. （耐藥菌長(zhǎng)的慢，藥效喪失）（耐藥菌長(zhǎng)的慢，藥效喪失）71v 計(jì)算耐藥百分比：計(jì)算耐藥百分比：v 含藥培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)含藥培養(yǎng)

30、基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)v 耐藥百分比耐藥百分比= - 100%v 對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)v 若耐藥百分比大于或等于若耐藥百分比大于或等于1%，則認(rèn)為受試菌對(duì)該抗結(jié)，則認(rèn)為受試菌對(duì)該抗結(jié)核藥耐藥。核藥耐藥。v 72菌菌濃濃度度藥藥物物74757677v 若高稀釋度菌液（若高稀釋度菌液（10-4mg/ml）在對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)）在對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)少于的菌落數(shù)少于20個(gè)菌落，則應(yīng)從對(duì)照管傳代培養(yǎng)，重復(fù)個(gè)菌落，則應(yīng)從對(duì)照管傳代培養(yǎng)，重復(fù)試驗(yàn)。試驗(yàn)。v 每批試驗(yàn)以結(jié)核分枝桿菌參考菌株（每批試驗(yàn)以結(jié)核分枝桿菌參考菌株（H37Rv敏感株）敏感株） 檢測(cè)含藥培養(yǎng)基的質(zhì)量。檢測(cè)含藥培養(yǎng)

31、基的質(zhì)量。78v 培養(yǎng)基制備藥物效價(jià)、保存與使用期限培養(yǎng)基制備藥物效價(jià)、保存與使用期限v 選擇新鮮、生長(zhǎng)旺盛的菌落進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，生長(zhǎng)不良或選擇新鮮、生長(zhǎng)旺盛的菌落進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，生長(zhǎng)不良或陳舊菌株應(yīng)傳代后再進(jìn)行試驗(yàn)陳舊菌株應(yīng)傳代后再進(jìn)行試驗(yàn)v 比濁、菌液稀釋應(yīng)力求精確，以保證接種菌量的準(zhǔn)確。比濁、菌液稀釋應(yīng)力求精確，以保證接種菌量的準(zhǔn)確。v 下列操作應(yīng)嚴(yán)格按技術(shù)規(guī)范進(jìn)行，防止產(chǎn)生氣溶膠：挑下列操作應(yīng)嚴(yán)格按技術(shù)規(guī)范進(jìn)行，防止產(chǎn)生氣溶膠：挑取菌落、磨菌、菌液稀釋和接種、燒灼接種環(huán)。取菌落、磨菌、菌液稀釋和接種、燒灼接種環(huán)。v 實(shí)驗(yàn)后按要求處理廢棄物和實(shí)驗(yàn)物品。實(shí)驗(yàn)后按要求處理廢棄物和實(shí)驗(yàn)物品。79對(duì)

32、照培養(yǎng)基對(duì)照培養(yǎng)基含藥培養(yǎng)基含藥培養(yǎng)基藥物儲(chǔ)存液藥物儲(chǔ)存液混合、搖勻混合、搖勻基礎(chǔ)液改良L-J100ml1ml磨菌磨菌分裝分裝凝固凝固分裝分裝凝固凝固1mg/ml菌懸液菌懸液1010-4 -4 mg/ml 1010-2 -2 mg/ml 100倍稀釋倍稀釋100倍稀釋倍稀釋接種接種0.01ml接種接種0.01ml2-3周周新鮮菌落新鮮菌落凍存凍存80v 根據(jù)分支桿菌在一些特定培養(yǎng)基上是否生長(zhǎng)的特性，將其根據(jù)分支桿菌在一些特定培養(yǎng)基上是否生長(zhǎng)的特性，將其初步鑒定為人型結(jié)核分支桿菌、牛型結(jié)核分支桿菌和非典初步鑒定為人型結(jié)核分支桿菌、牛型結(jié)核分支桿菌和非典型分支桿菌。型分支桿菌。v 主要的培養(yǎng)基為主

33、要的培養(yǎng)基為PNB（對(duì)硝基苯甲酸）、（對(duì)硝基苯甲酸）、TCH（噻吩（噻吩-2-羥酸肼）培養(yǎng)基羥酸肼）培養(yǎng)基v 接種方法：用接種方法：用22 SWG標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)沾取標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)沾取1環(huán)環(huán) 10-1mg/ml的菌液（即的菌液（即0.01ml ），用劃線法均勻接種至），用劃線法均勻接種至PNB、TCH培養(yǎng)基表面，每管最終接種菌量為培養(yǎng)基表面，每管最終接種菌量為10-3mg/管。管。v 接種后的培養(yǎng)基置于接種后的培養(yǎng)基置于37培養(yǎng)，至四周后報(bào)告結(jié)果。培養(yǎng)，至四周后報(bào)告結(jié)果。8182衛(wèi)生部衛(wèi)生部-蓋茨基金會(huì)項(xiàng)目蓋茨基金會(huì)項(xiàng)目83衛(wèi)生部衛(wèi)生部-梅里?；饡?huì)項(xiàng)目梅里?；饡?huì)項(xiàng)目84實(shí)驗(yàn)方法醫(yī)院數(shù)量MIGT 96

34、0液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)的比較5衛(wèi)生部衛(wèi)生部-碧迪公司項(xiàng)目碧迪公司項(xiàng)目8586v發(fā)光二極管發(fā)光二極管（ （LEDLED） ）熒光熒光顯微鏡顯微鏡 光源壽命光源壽命長(zhǎng)長(zhǎng)（ （30,000h30,000h） ） 不不需要預(yù)熱需要預(yù)熱 不需要不需要暗室暗室 可用現(xiàn)有的顯微鏡可用現(xiàn)有的顯微鏡 可使用可使用電池電源電池電源v 與與通常通常熒光顯微鏡的熒光顯微鏡的判定判定一致率一致率98.0%98.0%（ （n=1,326/n=1,326/內(nèi)內(nèi)部部資料資料） ）Fraen FluoLED module87v Z-N染色鏡檢結(jié)果染色鏡檢結(jié)果v LED鏡檢結(jié)果鏡檢結(jié)果88v初診患者初診患者v LED涂陽(yáng)患者檢出率

35、為涂陽(yáng)患者檢出率為14.96%（552/3691），萋），萋尼氏染色明場(chǎng)顯微鏡涂陽(yáng)患者檢出率尼氏染色明場(chǎng)顯微鏡涂陽(yáng)患者檢出率12.46% (460/3691)，前者較后者提高，前者較后者提高2.5個(gè)百分點(diǎn)個(gè)百分點(diǎn)（P=0.000）v隨訪患者隨訪患者v LED和明場(chǎng)顯微鏡的檢出率分別為和明場(chǎng)顯微鏡的檢出率分別為7.09%(178/2509)和和2.83%（71/2509)，提高，提高4.26個(gè)百分點(diǎn)（個(gè)百分點(diǎn)（P=0.000）89v讀片時(shí)間讀片時(shí)間v LED 讀片時(shí)間讀片時(shí)間120.0338.88秒，明場(chǎng)顯微鏡秒，明場(chǎng)顯微鏡206.3175.86秒（秒（p=0.00）v使用接受度調(diào)查使用接受度調(diào)

36、查v 對(duì)于進(jìn)一步推廣建議，大多數(shù)對(duì)于進(jìn)一步推廣建議，大多數(shù)(8/9)認(rèn)為應(yīng)進(jìn)一步推廣，認(rèn)為應(yīng)進(jìn)一步推廣，但其中有但其中有2人認(rèn)為應(yīng)在日工作量大的實(shí)驗(yàn)室優(yōu)先使用人認(rèn)為應(yīng)在日工作量大的實(shí)驗(yàn)室優(yōu)先使用90v可檢測(cè)是否感染結(jié)核桿菌可檢測(cè)是否感染結(jié)核桿菌v可同時(shí)檢測(cè)患者是否對(duì)利福平和異煙肼耐藥可同時(shí)檢測(cè)患者是否對(duì)利福平和異煙肼耐藥v約五小時(shí)內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果約五小時(shí)內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果91 檢測(cè)步驟v DNA提?。禾崛。?1.5hv PCR擴(kuò)增：擴(kuò)增：2.53hv 探針雜交：探針雜交：22.5hv 結(jié)果判讀：結(jié)果判讀：0.5h92v利福平利福平/異煙肼耐藥性的產(chǎn)生與結(jié)核分枝桿菌特異煙肼耐藥性的產(chǎn)生與結(jié)核分

37、枝桿菌特定基因某些位點(diǎn)的突變相關(guān)。定基因某些位點(diǎn)的突變相關(guān)?？菇Y(jié)核藥基因基因功能利福平rpoB編碼DNA依賴RNA聚合酶，參與mRNA轉(zhuǎn)錄過(guò)程異煙肼katG編碼過(guò)氧化氫-過(guò)氧化物酶，參與INH體內(nèi)的轉(zhuǎn)化inhA編碼煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)依賴的enoyl-ACP還原酶，參與脂酸的合成93利福平線性探針傳統(tǒng)藥敏合計(jì)一致率靈敏度特異性PPV陽(yáng)性預(yù)測(cè)值NPV陰性預(yù)測(cè)值耐藥敏感合計(jì)耐藥1354117693.6%75.0%96.5%76.7%96.2%敏感4511271172合計(jì)1801168134894異煙肼線性探針傳統(tǒng)藥敏總計(jì)一致率靈敏度特異性PPVNPV耐藥敏感合計(jì)耐藥1493017993

38、.2%71.0%97.4%83.2%94.8%敏感6111081169合計(jì)2101138134895MDR線性探針傳統(tǒng)合計(jì)一致率靈敏度特異性PPVNPVMDR非-MDR合計(jì)MDR792810795.0%66.4%97.7%73.8%96.8%非-MDR4012011241合計(jì)1191229134896激光共焦掃描儀軟件判讀結(jié)核耐藥檢測(cè)芯片獲北京市自主創(chuàng)新產(chǎn)品證書樣品制備儀雜交儀n 通 量：兩個(gè)一線抗結(jié)核藥n 速 度： 6 小時(shí)（比傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)法快 50-100 倍）n 靈敏度：103 CFU/反應(yīng)n 特異性：對(duì)照設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)；自動(dòng)判讀基于rpoB/katG/inhA的基因突變，快速檢測(cè)分離株或者痰

39、樣本中結(jié)核桿菌多藥耐藥（利福平、異煙肼）。International Journal of Tuberculosis and Lung Disease, 13:914-920, 2009（IF=2.3）96獲國(guó)家醫(yī)療器械證書和歐盟CE認(rèn)證97基因芯片基因芯片v 基因芯片是指采用光導(dǎo)原位基因芯片是指采用光導(dǎo)原位合成或微量點(diǎn)樣等方法，將合成或微量點(diǎn)樣等方法，將核酸片段有序地固化于支持核酸片段有序地固化于支持物的表面，然后與已標(biāo)記的物的表面，然后與已標(biāo)記的待測(cè)生物樣品中靶分子雜交，待測(cè)生物樣品中靶分子雜交，通過(guò)特定的儀器對(duì)雜交信號(hào)通過(guò)特定的儀器對(duì)雜交信號(hào)的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、高的強(qiáng)度進(jìn)行快速、并行、

40、高效地檢測(cè)分析，從而判斷樣效地檢測(cè)分析，從而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。品中靶分子的數(shù)量。98雜交反應(yīng)雜交清洗清洗干燥掃描檢測(cè)數(shù)據(jù)分析檢測(cè)分析PCR擴(kuò)增DNA 提取樣品制備99100產(chǎn)品指標(biāo)基因芯片線性探針注冊(cè)證書SFDA、CESFDA、CE產(chǎn)地中國(guó)德國(guó)用途從涂片陽(yáng)性痰標(biāo)本或培養(yǎng)物中檢測(cè)對(duì)利福平和異煙肼的耐藥性從涂片陽(yáng)性痰標(biāo)本或培養(yǎng)物中檢測(cè)分枝桿菌對(duì)利福平和異煙肼的耐藥性檢測(cè)原理耐藥相關(guān)基因的突變耐藥相關(guān)基因的突變（參考國(guó)際文獻(xiàn)）檢測(cè)方法反向雜交（斑點(diǎn)）反向雜交（slot 縫隙）需要儀器核酸提取儀、基因擴(kuò)增儀、芯片雜交儀、芯片洗干儀和掃描儀超聲水浴、基因擴(kuò)增儀、雜交儀試劑儲(chǔ)藏4 和-204 和-2

41、0檢測(cè)指標(biāo) M.tb + 16 NTM種/群 M.tb + 13 NTM種/群 可擴(kuò)展性 強(qiáng) 弱 內(nèi)部質(zhì)控 5種 3種靈敏度 102-103菌/ml JCM, in revision 102-103菌/ml JCM, 2002 符合率 三家醫(yī)院，1724例，測(cè)序符合率100% 分離株(157株)JCM 2008,(197株)JCM 2006,(219株)CMI 2006。符合率分別為100%,98.9%和88% 探針重復(fù)5次 1次 檢測(cè)重復(fù)性 10次重復(fù)，結(jié)果均正確 無(wú)相關(guān)資料 其他樣本 痰標(biāo)本、分離株痰標(biāo)本、分離株操作流程 自動(dòng)化高（雜交-清洗-掃描），省力，通量高，重復(fù)性好 自動(dòng)化低（雜交

42、）， 費(fèi)力，通量低，重復(fù)性稍差 結(jié)果判讀 儀器掃描，軟件自動(dòng)判讀 雜交顯示條帶需黏貼比對(duì)，肉眼或自動(dòng)判讀，。 成本 相當(dāng)（根據(jù)兩家的市場(chǎng)價(jià)格和在疾病預(yù)防控制體系中應(yīng)用的承諾價(jià)格 ）101v可同時(shí)檢測(cè)患者是否感染結(jié)核可同時(shí)檢測(cè)患者是否感染結(jié)核v對(duì)涂陰培陽(yáng)病人具有非常高的敏感性和特異性對(duì)涂陰培陽(yáng)病人具有非常高的敏感性和特異性v兩小時(shí)內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果，所用儀器設(shè)備極其兩小時(shí)內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果，所用儀器設(shè)備極其簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單102PCR LAMP需要使用需要使用PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增儀 針對(duì)針對(duì)基因基因設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)的特異性的兩條引物的特異性的兩條引物 擴(kuò)增效率擴(kuò)增效率:107不需要使用不需要使用PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增儀

43、多多對(duì)對(duì)引物保引物保證證了了擴(kuò)擴(kuò)增的特異性增的特異性 擴(kuò)擴(kuò)增效率增效率:1010103抽提基因組DNA 擴(kuò)增管去除雜質(zhì)將純凈DNA轉(zhuǎn)入擴(kuò)增管 痰血液咽試子標(biāo)本類型樣品處理在幾分鐘內(nèi)就可以完成104v可同時(shí)檢測(cè)患者是否結(jié)核以及是否對(duì)利福平耐藥可同時(shí)檢測(cè)患者是否結(jié)核以及是否對(duì)利福平耐藥v對(duì)涂陰培陽(yáng)病人具有非常高的敏感性和特異性對(duì)涂陰培陽(yáng)病人具有非常高的敏感性和特異性v兩小時(shí)內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果，所用儀器設(shè)備簡(jiǎn)單兩小時(shí)內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果，所用儀器設(shè)備簡(jiǎn)單105基于核酸擴(kuò)增的一步法利福平耐藥檢測(cè)Xpert TM MTB/Rif技術(shù)平臺(tái)技術(shù)平臺(tái) 利福平的耐藥性分析 喹諾酮類藥物耐藥性 HIV 病毒載量分析自動(dòng)化的標(biāo)本處理和檢測(cè)，可以在自動(dòng)化的標(biāo)本處理和檢測(cè)，可以在2小小時(shí)內(nèi)出結(jié)果時(shí)內(nèi)出結(jié)果h106原理：原理：v分枝桿菌抗原致敏的分枝桿菌抗原致敏的T細(xì)胞體外再次接觸分枝桿菌抗原時(shí)細(xì)胞體外再次接觸分枝桿菌抗原時(shí)會(huì)產(chǎn)生會(huì)產(chǎn)生IFN- ；v大量產(chǎn)生的大量產(chǎn)