培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

1、惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書編號：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 1 頁 共 6 頁 1.目的規(guī)范本中心微生物實驗室培養(yǎng)基的內(nèi)部質(zhì)量控制工作。2適用范圍適用于實驗室微生物培養(yǎng)基使用前的質(zhì)量驗收、使用過程中的質(zhì)量控制。3. 職責(zé)3.1 檢驗人員：按照本規(guī)程規(guī)對培養(yǎng)基使用前及使用過程中進(jìn)行質(zhì)量控制，確保培養(yǎng)基符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。3.2 科室負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)指導(dǎo)、監(jiān)督檢驗人員對培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制。4使用前的質(zhì)量控制4.1生產(chǎn)企業(yè)提供的材料培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家隨產(chǎn)品應(yīng)提供下列文件：培養(yǎng)基、獨立成分、添加成分名稱；批號；使用前的pH；儲藏信息和有效期；性能評價和所用測

2、試菌株；技術(shù)數(shù)據(jù)清單；質(zhì)控證書/必要的安全、危害數(shù)據(jù)。4.2驗收實驗室收到培養(yǎng)基后，應(yīng)填寫“培養(yǎng)基驗收檢查記錄單”，檢查包裝及完整性，標(biāo)識是否清晰等，驗收合格后按照“培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)使用規(guī)程”對培養(yǎng)基進(jìn)行編號。4.3 貯存及使用前質(zhì)量確認(rèn)商品化培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格按供應(yīng)商提供的貯存條件、有效期進(jìn)行貯存。 驗收合格的培養(yǎng)基應(yīng)建立“商品化干粉培養(yǎng)基目錄清單”，使用前對容器密閉性進(jìn)行復(fù)查。開封的脫水培養(yǎng)基，每次使用前應(yīng)對其質(zhì)量進(jìn)行檢查，通過粉末的流動性、均勻性、結(jié)塊情況和色澤變化等判斷培養(yǎng)基的質(zhì)量變化。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基受潮或物理性狀發(fā)生明顯改變則不應(yīng)再使用。制備好的成品培養(yǎng)基應(yīng)建立“ 成品培養(yǎng)基目錄清單”，每次使

3、用前應(yīng)檢查：顏色是否發(fā)生變化?/是否蒸發(fā)/脫水?/是否有微生物生長 ?等。如果發(fā)生上述異常情況，則不應(yīng)再使用。5制備好的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制新購的不同批次的商品化培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基性能測試，符合要求后使用。成品培養(yǎng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制應(yīng)包括物理指標(biāo)和微生物指標(biāo)的測試，根據(jù)測試結(jié)果及時填寫“實驗室制備培養(yǎng)基測試結(jié)果記錄單”。5.1物理指標(biāo)控制 測試2025的pH值瓊脂層厚度；色澤；透明度和（或）是否存在肉眼可見雜質(zhì)；凝膠穩(wěn)定性、粘稠度和濕度。5.2微生物學(xué)指標(biāo)控制可根據(jù)要求選用定量方法、半定量方法或定性方法（詳見表1-表）對培養(yǎng)基性能進(jìn)行測試，具體操作方法詳見作業(yè)指導(dǎo)書“培養(yǎng)基性能測試指南”

4、。微生物污染的控制從每批制備好的培養(yǎng)基中選取至少一個（或1%）平板或試管，置于37或按特定標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的溫度培養(yǎng)18h。生長特性.1生長率惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書編號：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 2 頁 共 6 頁 將適量測試菌株的工作培養(yǎng)物接種至固體、半固體和液體培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基上菌株的生長率應(yīng)達(dá)規(guī)定的最低限值。.1.1定量方法生長率PR的計算： PR = NS/NONS：從一個或多個待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)。N0：從一個或多個規(guī)定的參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)（該菌落總數(shù)應(yīng)100cfu ）。要求：非選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率

5、最低應(yīng)為0.7，該類培養(yǎng)基應(yīng)易于目標(biāo)菌生長；選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率最低應(yīng)為0.1；每平板（或每試管）的接種水平為10CFU100CFU。.1.2 半定量方法半定量方法采用生態(tài)測量技術(shù)在平板上劃線，平板板連續(xù)劃線區(qū)域得分的總和即為生長指數(shù)G，G值不應(yīng)超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的允許范圍。.1.3 定性方法定性方法采用劃線法觀察。.2選擇性將濃度為104CFU/mL106CFU/mL的非目標(biāo)菌工作菌株懸浮液接種至選擇培養(yǎng)基和參考培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的選擇性應(yīng)達(dá)到規(guī)定值。.2.1定量方法選擇因子SF： SF = DO - DSDO：能在參考培養(yǎng)基上生長至少10個菌落的最高稀釋度DS：能在測試培養(yǎng)基上顯示生長的最

6、高稀釋度 要求：非目標(biāo)菌在選擇性培養(yǎng)基上的SF至少為2 ；半定量和定量法中，非目標(biāo)菌應(yīng)部分或全部被抑制。生理生化特性（選擇性和特異性）規(guī)定培養(yǎng)基的基本特性，使用一套適當(dāng)?shù)臏y試菌株對培養(yǎng)基上的目標(biāo)菌的生理生化特性（菌落形態(tài)、大小等）和非目標(biāo)菌的被抑制程度進(jìn)行測試。5.3性能評價和結(jié)果解釋按照規(guī)定得到的所有測試菌株的性能均符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基品質(zhì)優(yōu)良；若只有物理指標(biāo)和微生物指標(biāo)符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基可被接收。表1 計數(shù)用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株參考培養(yǎng)基控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)Baird-ParkerS生長率3724-48h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923TSA定量PR0

7、.5黑色/灰色菌落，周圍為一混濁帶，其外有透明帶選擇性3748h大腸桿菌ATCC25922/8739定性全部抑制特異性3724-48h表皮葡萄球菌ATCC12228定性黑色/灰色菌落，周圍為一混濁帶，其外無透明帶MYPS生長率3024-48h臘樣芽胞桿菌ATCC11778TSA定量PR0.7具沉淀帶的粉色菌落選擇性3748h大腸桿菌ATCC25922定性全部抑制特異性3748h 枯草芽胞桿菌ATCC6633定性不具沉淀帶的粉色菌落惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書編號：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 3 頁 共 6 頁 表1計數(shù)用選擇性培養(yǎng)基(續(xù))培養(yǎng)基

8、用途培養(yǎng)條件測試菌株參考培養(yǎng)基控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)VRBG（結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂）S生長率3724h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA定量PR0.5帶有或不帶沉淀帶的粉紅色或紅色菌落鼠傷寒沙門菌ATCC14028選擇性3720h糞鏈球菌ATCC29212/19433定性全部抑制VRBL（紫紅膽汁乳糖）S生長率3020h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA定量PR0.5帶有或不帶沉淀帶的淡紫色菌落選擇性3020h糞鏈球菌ATCC29212/19433定性全部抑制特異性3020h銅綠假單胞菌ATCC27853定性-無色至淺棕色菌落CT-SMAC（改良山梨醇麥康凱瓊脂）S生長

9、率3724h大腸桿菌O157：H7ATCC43894/43895TSA定量PR0.5透明菌落，表面淡黃棕色，菌落直徑約1mm選擇性3724h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性全部抑制特異性3724h大腸桿菌ATCC11775/25922定性粉色菌落BGBLB（煌綠乳糖膽鹽肉湯）L生長率3024-48h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA半定量濁度2+，導(dǎo)管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁弗氏檸檬酸桿菌ATCC25922/8739選擇性糞鏈球菌ATCC29212/19433定性不生長ECL生長率442448h大腸桿菌ATCC25922半定量濁度2+，導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁選擇性4424

10、48h銅綠假單胞菌ATCC27853b定性不生長EC-MUG/LS-MUGL生長率442448h大腸桿菌ATCC25922半定量濁度2+，導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁，產(chǎn)生熒光選擇性442448h銅綠假單胞菌ATCC27853b定性不生長乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)L生長率3724h大腸桿菌ATCC25922半定量導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并變黃色選擇性3724h鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性不產(chǎn)氣、仍為紫色LST（月桂酸肉湯）L生長率3724h大腸桿菌ATCC25922半定量導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣選擇性3724h福氏志賀氏菌CMCC51572定性表2 計數(shù)用非選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株參考培養(yǎng)基控制方

11、法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)PCA（平板計數(shù)瓊脂）S生長率3072h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA定量PR0.7金黃色葡萄球菌ATCC6538枯草芽孢桿菌ATCC6633惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書編號：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 4 頁 共 6 頁 表3 選擇性增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)EEL生長率3724h大腸桿菌ATCC25922/8739半定量VRBG上10CFU粉紅至紅色菌落，有或沒有沉淀帶鼠傷寒沙門菌ATCC14028選擇性糞腸球菌ATCC29212全部抑制RVSL生長率41.524h鼠傷寒沙門菌

12、ATCC14028半定量XLD或其他選擇性培養(yǎng)基上10CFU腸炎沙門氏菌ATCC13076銅綠假單胞菌ATCC27853選擇性41.524h大腸桿菌ATCC25922半定量TSA上全抑制糞鏈球菌ATCC29212TSA上10CFUSC(亞硒酸鹽胱氨酸)L生長率3724h鼠傷寒沙門菌ATCC14028半定量XLD或其他選擇性培養(yǎng)基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo)準(zhǔn)）+大腸桿菌ATCC25922+銅綠假單胞菌ATCC27853b選擇性3724h大腸桿菌ATCC25922半定量TSA上10CFU糞鏈球菌ATCC29212TTB(四硫磺酸鈉煌綠增菌液)L生長率3724h鼠傷寒沙門菌ATCC1

13、4028半定量XLD或其他選擇性培養(yǎng)基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo)準(zhǔn)）傷寒沙門菌CMCC50071選擇性3724h大腸桿菌ATCC25922TSA上10CFU堿性蛋白胨水L生長率3724h霍亂弧菌CMCC16109半定量TCBS或其他選擇性培養(yǎng)基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo)準(zhǔn)）副溶血性弧菌CMCC20001選擇性3724h大腸桿菌ATCC25922/8739TSA上10CFU福氏志賀氏菌CMCC515727.5%氯化鈉肉湯L生長率3724h金黃色葡萄球菌ATCC6538半定量B-P平板或其他培養(yǎng)基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo)準(zhǔn)）表4 非選擇性增菌培養(yǎng)基

14、培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)BHI生長率3724h金黃色葡萄球菌ATCC6538定性濁度12蛋白胨鹽L稀釋202545min大腸桿菌ATCC25922定量+/-50%菌落數(shù)/至（+/-50%原始菌落數(shù)金黃色葡萄球菌ATCC25923惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書編號：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 5 頁 共 6 頁 表4 非選擇性增菌培養(yǎng)基（續(xù)）培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)乳糖蛋白胨肉湯L生長率3724h大腸桿菌ATCC25922定性導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣選擇性3724h鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性SCD

15、LP液體培養(yǎng)基L生長率3724h銅綠假單胞菌ATCC27853定性濁度12大腸桿菌ATCC25922金黃色葡萄球菌ATCC6538液體沙氏培養(yǎng)基L生長率265天白色念珠菌CMCC98001定性濁度12真菌培養(yǎng)基L生長率265天白色念珠菌CMCC98001定性濁度12表5 選擇性分離培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)亞硫酸酸鉍瓊脂（BS）S生長率3748h鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性良好生長(2)菌落呈黑色，有金屬光澤福氏志賀氏菌CMCC51572菌落呈棕色選擇性大腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01）無典型菌落糞鏈球菌ATCC29212/19433

16、全部抑制（0）-XLDS生長率3724h鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性良好生長(2)菌落呈黑色福氏志賀氏菌CMCC51573菌落呈無色選擇性大腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01）無典型菌落糞鏈球菌ATCC29212/19433全部抑制（0）-血瓊脂平板S生長率372448h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性良好生長溶血，透明溶血環(huán)糞鏈球菌ATCC29212定性良好生長溶血,草綠色溶血環(huán)TCBSS生長率372448h霍亂弧菌CMCC16109定性良好生長菌落較大，呈黃色副溶血性弧菌CMCC20001定性良好生長菌落較大，呈綠色4號瓊脂S生長率372448h霍亂

17、弧菌CMCC16109定性良好生長菌落較大、扁平透明、濕潤、中心帶有黑色非O1群霍亂弧菌CMCC17045定性良好生長菌落較大、扁平透明、濕潤、中心帶有黑色選擇性3724h大腸桿菌ATCC25922/8739定性全部或部分抑制（01）惠山疾控作 業(yè) 指 導(dǎo) 書編號：HSCDC/GC-76-2009 培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程版本 / 修改次：1/0第 6 頁 共 6 頁 表5 選擇性分離培養(yǎng)基（續(xù)）培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)伊紅美蘭瓊脂S生長率3724h大腸桿菌ATCC25922/8739定性良好生長菌落紫黑色帶金屬光澤鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性良好生長菌落灰白色半透明

18、福氏志賀氏菌CMCC51573定性良好生長菌落灰白色半透明TSI(三糖鐵瓊脂)S生長率3724-48h大腸桿菌ATCC25922/8739定性良好生長斜面及底層均變黃，產(chǎn)氣，硫化氫陽性普通變形桿菌CMCC49001定性良好生長斜面及底層均變黃，產(chǎn)氣，硫化氫陽性福氏志賀氏菌CMCC51573定性良好生長底層變黃，斜面變紅，不產(chǎn)氣，硫化氫陰性鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性良好生長底層變黃，斜面變紅，產(chǎn)氣，硫化氫陽性表6 非選擇性分離培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)營養(yǎng)瓊脂S生長率3724h大腸桿菌ATCC25922定性良好生長(2)-鼠傷寒沙門菌ATCC14028c小腸

19、耶爾森氏菌ATCC237155記錄培養(yǎng)基驗收檢查記錄單 HSCDC/ZJ-19-29A 商品化培養(yǎng)基目錄清單 HSCDC/ZJ-19-30A 成品培養(yǎng)基目錄清單 HSCDC/ZJ-19-31A 實驗室制備培養(yǎng)基測試結(jié)果記錄單 HSCDC/ZJ-19-33A6參考文獻(xiàn)6.1 GB/T27405-2008.實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測S.6.2 SN/T1538.1-2005.培養(yǎng)基制備指南 第1部分：實驗室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則S.6.3 SN/T1538.2-2007.培養(yǎng)基制備指南 第2部分：培養(yǎng)基性能測實用指南S.6.4紀(jì)紹梅.微生物培養(yǎng)基質(zhì)控與圖解M.北京:北京科學(xué)技術(shù)出版社,20