硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其意義

1、    硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其意義            作者：時間：2007-11-22 11:31:00                     作者：魯建國，王青，馬慶久，寧力，房青，褚延魁，杜錫林，楊媛，林晨 

2、【關(guān)鍵詞】  腫瘤/病理學(xué)；蛋白質(zhì)類/分析；硒；免疫組織化學(xué)    【Abstract】  AIM:   To investigate the expression and significance of selenoprotein P in colon carcinoma tissues.  METHODS:  Samples were derived from 30 cases of colon carcinoma，and 30 corresponding normal colon tissues w

3、ere used as controls. The expression of selenoprotein P in colon carcinoma tissues were investigated by immuohistochemical stain. RESULTS: The expression rate  of selenoprotein P in colon carcinoma(60.0%) was  significantly lower than that of their control normal tissues（80.0%, P<0.05).

4、 The expression rate of selenoprotein P in high and moderatedifferentiation  cases（86.7%） was  higher than  that  of  lowerdifferentiation  tissues（33.3%, P<0.05). The expression rate  of selenoprotein P was 58.8% in III stage cases, and  61.5% in III stage

5、 cases(P>0.05). CONCLUSION:  The  expression which of selenoprotein P is  low in colon carcinoma tissues, which is  related with differentiation levels of colon carcinoma, but not with TNM stage of tumor.    【Keywords】 Neoplasms/pathology; proteins/analysis; sel

6、enium; immuohistochemistry    【摘要】目的：  研究結(jié)腸癌組織中硒蛋白P的表達(dá)及其意義. 方法：  選用手術(shù)切除結(jié)腸癌組織30例，同時另取30例正常結(jié)腸組織作為對照，用免疫組化的方法觀察硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的表達(dá). 結(jié)果：  硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)率(60.0%)低于其在正常結(jié)腸組織中的表達(dá)率（80.0%），二者相差有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；硒蛋白P在高、中分化病例中表達(dá)率(86.7%)高于低分化例病例中表達(dá)率(33.3%)，二者相差有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；硒蛋白P在期病

7、例中表達(dá)率為58.8%，期病例中表達(dá)率為61.5%，二者相差無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05). 結(jié)論：  硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中為低表達(dá)，與腫瘤的分化程度有關(guān)，與腫瘤的TNM分期無關(guān).    【關(guān)鍵詞】 腫瘤/病理學(xué)；蛋白質(zhì)類/分析；硒；免疫組織化學(xué)    硒是哺乳動物必需的一種微量元素，缺硒會導(dǎo)致多種病理狀態(tài). 硒蛋白是微量元素硒發(fā)揮生物學(xué)功能的主要形式. 為了進(jìn)一步探討硒蛋白P在腫瘤中的作用，我們利用免疫組化技術(shù)觀察該抗體在結(jié)腸癌中的表達(dá).     1對象和方法  &#

8、160; 1.1對象結(jié)腸癌30例，為第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院普通外科200310/200505手術(shù)切除標(biāo)本,男17例，女13例. 年齡4579(平均61.4)歲；高分化10例，中分化5例，低分化15例；腫瘤TNM分期：I期8例，II期9例，III期13例. 另取30例原發(fā)器官正常結(jié)腸組織作為對照.    兔抗人硒蛋白P多克隆抗體，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所分子腫瘤學(xué)國家重點實驗室先期制備保存.  免疫組化試劑盒購自北京中杉公司.     1.2方法 將組織蠟塊切片，常規(guī)脫臘：70烤片2 h，二甲苯10 min×2次.

9、水化： PBS洗3 min×2次.  30 mL/L H2O2溶液室溫處理10 min，雙蒸餾水洗3 min×3次. 在0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）9298水浴中處理25 min修復(fù)抗原，自然冷卻到室溫. 緩沖液洗3min×2次. 分別用正常山羊血清和卵白素室溫封閉2 h. 滴加稀釋的一抗SelP多克隆抗體（150），37孵育4 h. PBS洗3 min ×3次. 生物素結(jié)合的羊抗兔IgG二抗和ABC復(fù)合物室溫分別孵育2 h. 滴加DAB溶液顯色，注意觀察顏色變化，及時終止，沖洗. 蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，封片.

10、0;   以免疫組化試劑盒中的陽性片作陽性對照，以0.01 mol/L PBS（pH 7.4）和正常羊血清分別替代一抗和二抗作為陰性對照. 陽性染色為棕黃色，定位于細(xì)胞胞質(zhì)和細(xì)胞膜. 染色陽性細(xì)胞數(shù)量評分： 0分（全片未見著色或少于5%細(xì)胞散在著色），1分（5%25%細(xì)胞著色），2分（25%50%細(xì)胞呈陽性），3分（50%75%細(xì)胞染色陽性），4分（>75%細(xì)胞染色陽性）. 染色強度評分：0分（陰性），1分（弱陽性），2分（中等陽性），3分（強陽性）. 染色陽性細(xì)胞數(shù)量評分與染色強度評分之積為最終染色評分標(biāo)準(zhǔn)：0分（陰性），04分（弱表達(dá)），48分（中等表達(dá)），812

11、分（強表達(dá)）.    統(tǒng)計學(xué)處理: 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包，用非參數(shù)檢驗，兩個獨立樣本W(wǎng)ilcoxon檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析. P<0.05認(rèn)為存在顯著性差異.    2結(jié)果    2.2硒蛋白P在腫瘤中的表達(dá)與其分化程度及臨床分期的關(guān)系見表2.    3討論    目前硒蛋白P真正的生物學(xué)功能還不清楚，特別是與腫瘤發(fā)生的關(guān)系不甚明了. Burk等1認(rèn)為硒蛋白P可能是自由基的清除劑. 硒蛋白P可能由于其抗氧化的保護性作用，通過消除自由基

12、，減少DNA損傷，預(yù)防突變阻止腫瘤的發(fā)生2-3. 其他可能的機制是調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)，增強機體免疫系統(tǒng)的抗癌活力；拮抗腫瘤細(xì)胞內(nèi)cGMP的增加，抑制DNA, RNA及蛋白質(zhì)的合成；抑制腫瘤病變中新生血管生成4-6.    A: 結(jié)腸癌組織;    B: 正常結(jié)腸組織.    Mork等2發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸腺瘤較鄰近正常黏膜硒蛋白P mRNA表達(dá)下降，并認(rèn)為在結(jié)直腸腺瘤硒蛋白P mRNA表達(dá)下調(diào)可能是腺瘤到腺癌發(fā)展過程中的一個早期事件，這種下調(diào)使硒蛋白P表達(dá)減少，導(dǎo)致DNA受到氧化損傷，從而發(fā)生基因突變，引起腫瘤的

13、發(fā)生和促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，而且硒蛋白P和同屬硒蛋白的胃腸谷胱甘肽過氧化物酶在抗氧化細(xì)胞抵抗腺瘤腺癌演變中起到互補作用. AlTaie等3證實在結(jié)直腸癌中其mRNA表達(dá)明顯減少或缺失，表明在結(jié)腸癌中可能存在著硒蛋白P基因的突變和轉(zhuǎn)錄異常.     本結(jié)果提示，硒蛋白P表達(dá)在結(jié)腸癌與正常組織差異顯著，表達(dá)與分化程度有關(guān). 伴黏液分泌者中低表達(dá)，細(xì)胞富于黏液成分或杯狀細(xì)胞無論是正常還是腫瘤中表達(dá)均為陰性. 或許提示正常腸黏膜杯狀細(xì)胞分泌功能與硒蛋白P表達(dá)無關(guān)；同樣，其在結(jié)腸癌中的表達(dá)與腫瘤分期無關(guān). 在結(jié)腸癌硒蛋白P低表達(dá)，除了受硒營養(yǎng)狀況（血漿中硒蛋白P濃度）的影響，可能

14、存在著硒蛋白P基因的突變和轉(zhuǎn)錄異常3，失去這一保護性因素，可能導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生.    【參考文獻(xiàn)】    1 Burk RF,Hill KE. Regulation of selenoproteins J. Annu Rev Nutr, 1993,13:65-81.    2 Mork H, AlTaie OH, Bahr K, et al. Inverse mRNA expression of the selenocysteinecontaining proteins GIGPx

15、and SeP in colorectal adenomas compared with adjacent normal mucosaJ. Nutr Cancer, 2000,37(1):108-116.    3 AlTaie OH, Uceyler N, Eubner U, et al. Expression profiling and genetic alterations of the selenoproteins GIGPx and SePP in colorectal carcinogenesisJ. Nutr Cancer, 2004,48(1):6

16、-14.    4 Ganther HE. Selenium metabolism and mechanisms of cancer preventionJ. Adv Exp Med Biol, 2001,492:119-130.    5  Raich PC, Lu J, Thompson HJ, et al. Selenium in Cancer Prevention:Clinical Issues and ImplicationsJ. Cancer Invest, 2001,19(5):540-553.    6 Brown KM,Arthur JR.Selenium,selenoproteins and