菊花的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1、菊花的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)名稱菊花的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)年級、組2012級10班 第5組組 員楊素華、葉利萍、佐尚秀李定峰、歐 霞、劉新鵬劉昌恒、顏政委、李元鳳2014年12月6日菊花的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)一 實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)1.掌握植物組織培養(yǎng)的原理。2.學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)，進(jìn)行菊花或其他植物的組織培養(yǎng)。二 實(shí)驗(yàn)原理植物組織培養(yǎng)主要利用了植物細(xì)胞的全能性，在適宜的條件下，細(xì)胞具有形成一個(gè)新的個(gè)體的潛在能力。細(xì)胞全能性(totipotency)就是指每個(gè)生活的細(xì)胞中都包含有產(chǎn)生一個(gè)完整機(jī)體的全套基因.植物組織培養(yǎng)的大致過程是：在無菌條件下，將植物器官或組織（如芽、莖尖、根尖或花藥）的一部分切下來，放在

2、適當(dāng)?shù)娜斯づ囵B(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，這些器官或組織就會(huì)進(jìn)行細(xì)胞分裂，形成新的組織。不過這種組織沒有發(fā)生分化，只是一團(tuán)薄壁細(xì)胞，叫做愈傷組織。再適合的光照、溫度和一定的營養(yǎng)物質(zhì)與激素等條件下，愈傷組織便開始分化，產(chǎn)生出植物的各種器官和組織，進(jìn)而發(fā)育成一棵完整的植株。三 實(shí)驗(yàn)材料1.實(shí)驗(yàn)設(shè)施培養(yǎng)基制備、滅菌和材料處理室、高壓滅菌鍋、無菌接種室、組織培養(yǎng)室、水浴鍋、超凈工作臺或簡易接種箱、2.實(shí)驗(yàn)儀器解剖刀、三角燒瓶（100mL）、燒杯、量筒、錐形瓶、容量瓶、移液管、培養(yǎng)皿、封口膜、棉線、分析天平、長鑷子、剪刀、牛皮紙、圓濾紙。3.實(shí)驗(yàn)材料在晴天，最好是中午或下午采集無病毒、無病害、生長良好的，易于誘導(dǎo)的未

3、開花的菊花植株莖上部新萌生的側(cè)枝為組織培養(yǎng)材料。4.實(shí)驗(yàn)試劑準(zhǔn)備制備MS培養(yǎng)基、乙醇、1mol/LHCl、1mol/LNaOH、氯化汞（升汞）或次氯酸鈉、瓊脂、6-芐基氨基腺嘌呤（6-BA）、吲哚乙酸（IAA）或2,4-D（生長素類似物）、萘乙酸（NAA）及蔗糖四 實(shí)驗(yàn)的具體操作過程1.配置培養(yǎng)基（1）愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基（蔗糖含量為10g/L，2，4D含量為2mg/L，瓊脂10g/L）。（2）試驗(yàn)培養(yǎng)基：在MS培養(yǎng)基中加入IAA和6BA。吲哚乙酸（IAA)先用少量0.1mol/LNaOH溶解，6-芐基氨基腺嘌呤先用少量0.1mol/LHCl溶解，然后用蒸餾水稀釋，再加入培養(yǎng)基中。2

4、.滅菌待滅菌的物品有：培養(yǎng)基、裝有濾紙的培養(yǎng)皿等具體滅菌步驟是：先將蒸餾水裝入1000mL錐形瓶的3/4處，用封口膜和牛皮紙兩層封口，再將裝有濾紙的培養(yǎng)皿包起來，然后，連同已配置好的培養(yǎng)基一起放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在1.2個(gè)大氣壓下滅菌 1015min，冷卻后備用，注意滅菌時(shí)間不得超過15min，以免培養(yǎng)基變性。3.組培材料的滅菌4.接種無菌接種前：用70的酒精消毒工作臺，點(diǎn)燃酒精燈。所有工作都必須在酒精燈控制下進(jìn)行，器械使用前后都要用火焰灼燒滅菌。接種操作：插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上，每個(gè)錐形瓶接種78個(gè)外植體，接種后將封口膜重新扎好，后送進(jìn)組培室。5.培養(yǎng)：應(yīng)該放在無菌箱中進(jìn)行，并定期進(jìn)行消毒，溫度控制在1822攝氏度，相對濕度應(yīng)保持在60%70%，每天應(yīng)保證至少12h的光照，光照強(qiáng)度約為1500Lx，也可使用自然光。根長>1cm時(shí)，可出瓶移栽。6.移栽與栽培：移栽前，打開封口膜，在培養(yǎng)間生長幾日；移栽時(shí)候，用流水將依附于小苗根部的培養(yǎng)基洗凈，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。五 注意事項(xiàng)1.材料的選擇與處理盡量選擇未開花植株的莖上部分新萌生的側(cè)枝，帶菌少，易誘導(dǎo)。外