HE組織切片制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 HE染色標(biāo)準(zhǔn)化操作程序一、目的保證病理切片質(zhì)量，以達(dá)到準(zhǔn)確的病理診斷。二、范圍石蠟包埋組織 三、試劑，儀器酒精、二甲苯、蘇木素、伊紅、鹽酸酒精、脫水機(jī)、包埋機(jī)、切片機(jī)、漂烘儀、染色機(jī)。四、工作流程（一）制片前 制片前過(guò)程從標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室至包埋結(jié)束為止。包括：1.標(biāo)本的交接編號(hào)記錄及檢查（1）實(shí)驗(yàn)室人員收檢標(biāo)本時(shí)人必須認(rèn)真執(zhí)行查對(duì)制度，包括：送檢標(biāo)本種類和數(shù)量與送檢單上填寫(xiě)的是否一致；容器上的聯(lián)號(hào)或姓名與送檢單上是否符合；固定液的種類（通常要求為10中性緩沖甲醛液）和量是否符合要求；送檢單是否按規(guī)定用墨水筆逐項(xiàng)填寫(xiě)清楚。若發(fā)現(xiàn)有錯(cuò)誤、疑問(wèn)或不符合要求時(shí)，應(yīng)立即查詢清楚

2、和適當(dāng)處理，在合格后方可簽名接收。如標(biāo)本已干涸、腐敗或其它明顯不符則不應(yīng)接收。接收標(biāo)本應(yīng)在初級(jí)人員接收后，再由中級(jí)人員和主檢或具體負(fù)責(zé)人員復(fù)核，以確保沒(méi)有差錯(cuò)發(fā)生。（2）收到標(biāo)本后應(yīng)按標(biāo)本順序逐一在申請(qǐng)單上編上病理檢查號(hào)，并在標(biāo)本容器外壁貼上相應(yīng)的號(hào)碼，然后按號(hào)碼先后順序排列放好，再在申請(qǐng)單上打上收到日期。將收檢的標(biāo)本，按申請(qǐng)單逐一向負(fù)責(zé)處理的醫(yī)師交代清楚，包括標(biāo)本種類、數(shù)量、臨床診斷及有無(wú)特殊注意事項(xiàng)等。（3）取檢過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)認(rèn)真記錄填寫(xiě)好工作單，包括標(biāo)本號(hào)、塊（包）數(shù)、有無(wú)特殊處理、標(biāo)本名稱，如標(biāo)本全取、標(biāo)本過(guò)小等均應(yīng)記錄在案以備日后查對(duì)。對(duì)一些易碎、小而少的標(biāo)本應(yīng)用尼龍絲小袋或擦

3、鏡紙包裹好后再做上機(jī)處理，以防丟失。標(biāo)本的取材塊通?？刂圃?cm×2cm×0.3cm左右。標(biāo)本取檢多于一個(gè)包埋塊者，在標(biāo)本病理檢查號(hào)后綴寫(xiě)-1或-2等，以便于查找校對(duì)。取好的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)浸泡在指定的固定液中，來(lái)不及取完的標(biāo)本特別是大標(biāo)本應(yīng)縫上號(hào)碼投入固定池內(nèi)以備次日再取。標(biāo)本取檢完后，自報(bào)告發(fā)出之日起，通常規(guī)定小標(biāo)本保留1月以上，大標(biāo)本保留6月以上。（4）標(biāo)本在上機(jī)處理之前，必須由初級(jí)和中級(jí)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員共同檢查標(biāo)本總數(shù)與申請(qǐng)單和工作單是否一致，確定無(wú)疑后方可上機(jī)處理。2.標(biāo)本的處理 利用全自動(dòng)脫水機(jī)處理。（根據(jù)組織的大小、分類分別設(shè)置程序）所有試劑由專人負(fù)責(zé)定時(shí)檢測(cè)定期更換，

4、并做好詳細(xì)記錄。3.標(biāo)本的包埋 首先清點(diǎn)檢查標(biāo)本，確認(rèn)完好無(wú)缺后方可開(kāi)始包埋操作，操作時(shí)應(yīng)注意核對(duì)標(biāo)本與工作單記錄是否吻合。包埋的石蠟溫度應(yīng)盡量與標(biāo)本浸蠟溫度一致，大約控制在6570之間，溫度太低會(huì)造成包埋平面凹凸不平，尤其是內(nèi)鏡活檢等小塊標(biāo)本，易出現(xiàn)切片不完整而發(fā)生漏診現(xiàn)象。包埋時(shí)，先取大小合適的不銹鋼模型，注入蠟液置于熱臺(tái)上，液面剛好與模型的上緣平齊，不得低于或高于此限。取出包埋盒內(nèi)的組織，校對(duì)正確后用干凈的熱鑷子將所有組織悉數(shù)放入模型的底部，待組織與模型內(nèi)的蠟液充分融合后，按要求排列后迅速移動(dòng)模型至冷臺(tái)，至底部石蠟剛開(kāi)始凝固，用鑷子輕壓組織數(shù)秒，待組織埋平后，迅速蓋上包埋盒注上蠟液，約過(guò)

5、10s 15s ，包埋盒與模型周邊的蠟液凝固后，再次補(bǔ)充注入少許蠟液，以增加包埋盒的穩(wěn)固性，注意液面高度不得高于包埋盒上緣，加蓋包埋盒時(shí)一定要保持與模型底部平面平行，無(wú)前后左右傾斜的現(xiàn)象。待蠟塊在冷凍臺(tái)徹底冷卻后，從模型內(nèi)取出修去包埋盒周邊多余的石蠟。清點(diǎn)包埋好的蠟塊總數(shù)，按大小類別放好，冷凍備切。（二）切片1、將切片刀安裝在持刀座上；2、將蠟塊固定于支持器上；3.、細(xì)心移動(dòng)刀座或蠟塊支持器，使蠟塊與刀刃接近，旋緊刀座，觀察蠟塊面是否與刀座相平，如不平須調(diào)節(jié)支持器，使蠟塊面與刀面平行；4、修塊（粗切）：用右手勻速旋轉(zhuǎn)切片機(jī)輪，修切蠟塊表面至包埋其中的組織塊全部切到。修塊粗切片的厚度為15-20

6、微米（注意：對(duì)于醫(yī)囑再次深切片特別是在原切片中發(fā)現(xiàn)了有意義病變而進(jìn)行的深切片應(yīng)盡量少修塊，以盡量好地獲得有關(guān)病變的連續(xù)性）；5、調(diào)節(jié)切片厚度調(diào)節(jié)器（一般為2-4 微米），進(jìn)行切片。切出的蠟片應(yīng)連續(xù)成帶狀，完整無(wú)缺，厚度適宜（3-5 微米）、均勻，無(wú)刀痕、顫痕、皺褶、開(kāi)裂、缺損、松解等；6、以專用鑷子輕輕夾取完整、無(wú)刀痕、厚薄均勻、干凈的蠟片，放入漂片機(jī)的溫水中（40-50左右），使切片全面展開(kāi)；每切完一個(gè)蠟塊后必須認(rèn)真清理水面，不得遺留其它病例的組織碎片以免污染。7、將蠟片附貼于處理過(guò)的載玻片上，蠟片應(yīng)放在載玻片右2/3處的中央，留出載玻片左1/3的位置用于貼附標(biāo)簽；蠟片與載玻片之間無(wú)氣泡；為

7、防止蠟片滑落，蠟片的一角（遠(yuǎn)離組織的）可粘在載玻片邊緣上；若一片載玻片上撈兩片以上的蠟片，必須把蠟片均勻貼附在載玻片上，保持制片的美觀。8、必須立即在置放了蠟片的載玻片一端（待貼標(biāo)簽處），用鉛筆準(zhǔn)確清楚地標(biāo)記其相應(yīng)的病理號(hào)（包括次級(jí)號(hào)），外借白片，需在每張白片上注明對(duì)應(yīng)的病理號(hào)。9、將置放了蠟片的載玻片呈45度斜置片刻；待載玻上的水分流下后，將其插入專用的染色架中，最后置于恒溫箱中烘烤（72左右，15分鐘），然后即可進(jìn)行染色。10、切片注意事項(xiàng)（1）切片前蠟塊要冷凍，這樣容易切片（甲狀腺、淋巴結(jié)及胃鏡等特殊組織，必須控制冰凍時(shí)間）。（2）如遇難切的蠟片時(shí)，可用與蠟塊切面差不多大小的薄紙潮濕后貼

8、在蠟塊上切片，然后將附有蠟片的一面朝上放入水中漂片。（3）如遇易脫片組織（如血凝塊、腦組織）時(shí)，可用多聚賴氨酸或APES 處理過(guò)的玻片來(lái)?yè)破?。?）總是切不出完整的蠟片，或皺縮或卷片，可能是刀不利。（5）切出的蠟片總是皺縮，可能是蠟塊冷凍時(shí)間不夠，或是組織脫水、浸蠟效果不好。（6）切片厚薄不勻或空片，可能是刀未固定緊或蠟塊未夾緊，也可能是切片機(jī)有問(wèn)題。（7）烤片時(shí)間與溫度有關(guān)，一般時(shí)間寧長(zhǎng)勿短，否則會(huì)造成脫片。一般烤片溫度控制在62，時(shí)間為30min左右。（8）連續(xù)切片放入熱水漂片時(shí)，不要撈取第一、二張蠟片，因?yàn)榍? 張蠟片厚、組織有空洞（鏡下可見(jiàn)）。（9）用于展片漂片儀的溫水必須認(rèn)真清理水面

9、，不得遺留其它病例的組織碎片以免污染。（三）HE染色1、自動(dòng)染色：見(jiàn)染色機(jī)使用及維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序2、手工染色（1）脫蠟二甲苯 5分鐘二甲苯 5分鐘100%酒精 1分鐘100%酒精 1分鐘95%酒精 1分鐘80%酒精 1分鐘自來(lái)水浸洗 1分鐘(2)染色蘇木素染液 6分鐘水冼 1分鐘0.5-1%鹽酸酒精分化片刻（顏色由藍(lán)變紅即可）自來(lái)水沖冼10分鐘左右（顏色由紅變藍(lán)）。（然后95%酒精片刻，主要是避免所帶的水份稀釋以下的伊紅酒精，此步可免）伊紅染液浸染（3）脫水、透明、封固75%酒精 0.5分鐘85%酒精 1分鐘95%酒精 1分鐘100%酒精 1分鐘100%酒精 1分鐘石炭酸二甲苯(1:3) 10

10、秒鐘二甲苯 透明 1分鐘二甲苯 透明 1分鐘取出后用中性樹(shù)膠封固。3、H&E染色注意事項(xiàng) （1）二甲苯脫蠟時(shí)間冬季長(zhǎng)些，夏季可短些，為防止脫蠟不凈影響染色，脫蠟時(shí)間寧長(zhǎng)勿短。（2）鹽酸酒精分化時(shí)間靈活掌握，可以在切片藍(lán)化后鏡下觀察。（3） 染色后的脫水透明也很重要，若脫水不完全，切片會(huì)模糊不清，脫水的乙醇要保持純度，切片在進(jìn)入脫水乙醇前盡量把水份去掉。 （4）結(jié)束染色的切片用中性樹(shù)膠封固。操作時(shí)用濾紙輕輕吸去組織周圍的液體，保持組織切片的輕度濕潤(rùn)，滴少許樹(shù)膠，用鑷子取蓋玻片輕輕蓋上。注意封片時(shí)不能讓組織切片干涸，否則會(huì)出現(xiàn)人為色素即“中性樹(shù)膠色素”。封片動(dòng)作要輕，以防產(chǎn)生氣泡或溢膠。樹(shù)

11、膠濃度要適當(dāng)，預(yù)先可用二甲苯調(diào)試好備用。太稠不宜操作，太稀易出現(xiàn)氣泡或溢膠。（四）制片后 制片后過(guò)程由封固切片結(jié)束到上交切片為止。1.封固好的切片，由初級(jí)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員按號(hào)碼順序排放在切片夾內(nèi)，與相應(yīng)的蠟塊進(jìn)行校對(duì)，檢查切片與蠟塊的號(hào)碼是否一致，有無(wú)錯(cuò)號(hào)。檢查切片與蠟塊中組織的形狀是否一致，是否切全。仔細(xì)粘貼標(biāo)簽后交上級(jí)人員復(fù)查。2.上級(jí)人員根據(jù)申請(qǐng)單或工作單上的記錄全面仔細(xì)檢查切片，評(píng)分內(nèi)容、標(biāo)準(zhǔn)及其分值如下。 外觀（5分）：清潔，無(wú)溢膠。載玻片及蓋玻片完整。 標(biāo)簽（5分）：清潔，號(hào)碼清晰，粘貼牢固，貼在指定位置。 裱片（5分）：組織裱貼在適當(dāng)位置上，方向合適。 厚?。?分）：切片厚薄均勻一致。 平整（7分）：切片平整無(wú)皺折。 切痕（8分）：切片完整，無(wú)破裂或劃痕。 透明（10分）：切片透明，無(wú)云霧狀，組織固定脫水徹底。 顏色（18分）：核漿著色正，對(duì)比度清晰明顯。 層次、氣泡（5分）：染色有層次，深淺分明，無(wú)氣泡。 細(xì)胞形態(tài)（12分）：無(wú)擠壓、皺縮及膨脹變形。 污染（15分）：無(wú)異物或其它組織混入切片。 潔凈度（5分）：玻片內(nèi)無(wú)殘留染料。如有上述不合格項(xiàng)目，按評(píng)分表格標(biāo)準(zhǔn)扣分，總分為100分，90分以上為甲級(jí)片，90分80分為乙級(jí)片，80分以下為丙級(jí)