腎氣丸“陰中求陽(yáng)”配伍對(duì)桂皮醛含量的影響

1、腎氣丸“陰中求陽(yáng)”配伍對(duì)桂皮醛含量的影響                           作者：李政木 陳煒璇 卓廉佳 吳勇  【摘要】  目的測(cè)定桂皮醛在腎氣丸各拆方組水煎液中的含量，分析腎氣丸“陰中求陽(yáng)”配伍對(duì)桂皮醛含量的影響。方法將腎氣丸組方藥物拆方分為補(bǔ)陽(yáng)組?1、補(bǔ)陽(yáng)組?2、補(bǔ)陰組?1、補(bǔ)陰組?2

2、、陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?1和陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?2（即腎氣丸全方），采用高效液相色譜法測(cè)定各腎氣丸拆方組水煎液中桂皮醛的含量。結(jié)果陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?2水煎液中桂皮醛含量高于補(bǔ)陽(yáng)組?2和陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?1，陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?1和補(bǔ)陽(yáng)組?2水煎液中桂皮醛含量高于補(bǔ)陽(yáng)組?1，且都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論腎氣丸“陰中求陽(yáng)”配伍能增大水煎液中桂皮醛的含量，且腎氣丸中的“三瀉”藥物（茯苓、澤瀉、丹皮）也有增強(qiáng)此作用的趨勢(shì)。 【關(guān)鍵詞】  腎氣丸 陰中求陽(yáng) 桂皮醛 高效液相色譜法腎氣丸始載于金匱要略，由桂枝、附子、干地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮組成，有溫補(bǔ)腎陽(yáng)之功效，是臨床治療腎陽(yáng)虛證的名方。其“陰中求陽(yáng)”的組方原理，即在大

3、量滋陰補(bǔ)腎的藥物中加入少量的附子、桂枝，是方劑現(xiàn)代研究中值得探討的課題。本研究將腎氣丸的組方進(jìn)行拆分，以桂枝的主要有效成分桂皮醛為指標(biāo)，測(cè)定各腎氣丸拆方組水煎液中桂皮醛的含量，并比較其含量變化?，F(xiàn)報(bào)道如下。    1  儀器與試劑    1.1  儀器DIONEX P680 高效液相色譜儀；UVD170U型紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器；Chromeleon工作站；分析天平；超聲清洗儀。    1.2  試劑無(wú)水乙醇，乙醚，甲醇（色譜純），其他試劑均達(dá)到色譜分析要求。  

4、;  1.3  對(duì)照品桂皮醛（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110710?200212）。    1.4  藥材桂枝、附子、干地黃、山藥、山茱萸、茯苓、澤瀉、牡丹皮均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室張丹雁教授鑒定為正品。    2  方法與結(jié)果    2.1  拆方分組將腎氣丸組方藥物分為補(bǔ)陽(yáng)組?1：附子、桂枝；補(bǔ)陽(yáng)組?2：附子、桂枝茯苓、澤瀉、丹皮；補(bǔ)陰組?1：干地黃、山茱萸、山藥；補(bǔ)陰組?2：干地黃、山茱萸、山藥茯苓、澤瀉、丹皮；陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?1：附子、桂

5、枝干地黃、山茱萸、山藥；陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?2：即腎氣丸全方。其中含有桂枝的組有：補(bǔ)陽(yáng)組?1，補(bǔ)陽(yáng)組?2，陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?1，陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?2。    2.2  高效液相色譜條件 色譜柱 DiomonsilTM C18（5 m，4.6 mm×250 mm）；柱溫為室溫；流動(dòng)相為甲醇-水（60：45），流速1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)310 nm；進(jìn)樣量10 l。    2.3  標(biāo)準(zhǔn)曲線制備  精密稱取桂皮醛對(duì)照品17.2 mg，置50 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度（每毫升含桂皮醛0.344 mg），作

6、為對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。分別精密量取對(duì)照品溶液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 ml，置25 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制得桂皮醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣10l測(cè)定，以桂皮醛標(biāo)準(zhǔn)品液濃度為橫坐標(biāo)（C），峰面積為縱坐標(biāo)（A），得回歸方程A=0.840 7C- 0.263 3，r= 0.999，桂皮醛在5.50419.264 g/ml內(nèi)線性關(guān)系良好，符合外標(biāo)法定量測(cè)定要求。    2.4  供試品溶液的制備精密稱取含桂枝4 g（以桂枝、附子、干地黃、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮1：1：8：4：4：3：3：3的

7、比例計(jì)算）各拆方組，浸泡30 min，煎煮60 min，得藥液約15 ml，用乙醚萃取2次（15 ml/次），合并醚液，室溫?fù)]干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? ml，用0.45 m的有機(jī)微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。百事通    2.5  精密度實(shí)驗(yàn) 取相同濃度對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定，根據(jù)所得峰面積計(jì)算，RSD = 1.15%，n=6。    2.6  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液在室溫下放置，每隔2 h測(cè)定1次，共測(cè)定6次，按測(cè)得峰面積積分值計(jì)算，供試品在10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD = 1.65%。  &#

8、160; 2.7  陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)  腎氣丸全方按照含桂枝4 g的比例稱取不含桂枝的其他藥，按照上述供試品制備方法，制作陰性供試品溶液，用與樣品相同的色譜條件測(cè)定，在與樣品相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰。結(jié)果見(jiàn)圖13。    圖1  桂皮醛對(duì)照品HPLC色譜圖    圖2  腎氣丸全方HPLC色譜圖    圖3  腎氣丸缺桂枝陰性對(duì)照色譜圖    2.8  樣品測(cè)定按照含量測(cè)定方法測(cè)定各拆方組的樣品，記錄峰面積，計(jì)算桂皮醛在各

9、拆方組中的含量，用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果見(jiàn)表1，色譜圖見(jiàn)圖48。表1  樣品含量測(cè)定結(jié)果（±s）    3  討論    實(shí)驗(yàn)過(guò)程中流動(dòng)相試用了甲醇?菜?（3070）、甲醇?菜?（4555）、甲醇?菜?（5050）、甲醇?菜?（6040）、甲醇?菜?（7030）、甲醇?菜?（6045）幾個(gè)系統(tǒng)，以甲醇-水（6045）系統(tǒng)分離效果最優(yōu)，各拆方組桂皮醛的理論塔板數(shù)均大于4 000；而檢測(cè)波長(zhǎng)選擇試用了285，300，310 nm 3個(gè)波長(zhǎng)，以310 nm時(shí)峰形最好，出峰時(shí)間在12 min左右。

10、0;   實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示腎氣丸全方（即陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?2）水煎液中桂皮醛含量高于桂枝、附子與“三瀉”（茯苓、澤瀉、丹皮）配伍組（即補(bǔ)陽(yáng)組?2），其次桂枝、附子與“三補(bǔ)”（干地黃、山茱萸、山藥）的配伍組（即陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?1）水煎液中的桂皮醛含量高于桂枝、附子配伍組（即補(bǔ)陽(yáng)組?1），且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明配伍了補(bǔ)陰藥干地黃、山茱萸、山藥有助于桂皮醛在水煎液中的溶出。而補(bǔ)陽(yáng)組?2含量高于補(bǔ)陽(yáng)組?1、陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?2含量高于陰陽(yáng)雙補(bǔ)組?1，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則說(shuō)明無(wú)論是純補(bǔ)陽(yáng)組還是陰陽(yáng)雙補(bǔ)組，加用“三瀉”（茯苓、澤瀉、丹皮）后桂皮醛含量增高，茯苓、澤瀉、丹皮亦有助于桂皮醛在水煎液中的溶出。即陰

11、陽(yáng)雙補(bǔ)組水煎液中桂皮醛的含量高于純補(bǔ)陽(yáng)組，且“三瀉”有增強(qiáng)此作用的趨勢(shì)。    對(duì)腎陽(yáng)虛證的現(xiàn)代研究表明1，腎陽(yáng)虛證具有下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸不同環(huán)節(jié)(層次) 、不同程度的功能紊亂，腎陽(yáng)虛證與神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)有內(nèi)在聯(lián)系，補(bǔ)腎藥是調(diào)節(jié)下丘腦、神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)、下丘腦-垂體-腎上腺-胸腺軸的有效手段。生理?xiàng)l件下，下丘腦產(chǎn)生的促腎上腺皮質(zhì)釋放激素經(jīng)垂體門脈系統(tǒng)到達(dá)垂體，促進(jìn)垂體促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）分泌，垂體分泌的ACTH進(jìn)入血液，作用于腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞，促使其分泌皮質(zhì)醇，而血漿皮質(zhì)醇又可以反饋抑制CRH和ACTH的分泌。外源性糖皮質(zhì)激素氫化可的松能明顯降低

12、血液中皮質(zhì)醇、ACTH的含量，使腎上腺皮質(zhì)分泌類固醇激素的釋放減少，從而使大鼠表現(xiàn)出一系列的腎陽(yáng)虛癥狀。    桂皮醛是桂枝中的有效成分之一。有研究表明2桂皮醛進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)后，到達(dá)腎上腺，促使腎上腺釋放兒茶酚胺，從而提高血漿中兒茶酚胺的濃度。而兒茶酚胺對(duì)許多激素的分泌有促進(jìn)作用，如 ACTH、胰高血糖素、生長(zhǎng)素、甲狀腺素、腎素等。而增加腎陽(yáng)虛大鼠血中ACTH的含量，則可明顯改善腎陽(yáng)虛證癥狀。    中醫(yī)學(xué)認(rèn)為陰陽(yáng)相互依存，互為根本，“孤陰不生，獨(dú)陽(yáng)不長(zhǎng)”。醫(yī)貫?陰陽(yáng)論曰：“陰陽(yáng)又各互為其根，陽(yáng)根于陰，陰根于陽(yáng)；無(wú)陽(yáng)則陰無(wú)以生，無(wú)陰則陽(yáng)

13、無(wú)以化”。腎陽(yáng)虛證若單用大量的溫補(bǔ)腎陽(yáng)的藥物反致虛不受補(bǔ)且有助熱之弊，若在滋陰補(bǔ)腎的基礎(chǔ)上加入少量溫陽(yáng)的藥物，使陽(yáng)得陰之助而生化有源，以達(dá)陰中求陽(yáng)之效。腎氣丸是“陰中求陽(yáng)”配伍的代表方劑，方中大量滋陰補(bǔ)腎藥配以少量溫陽(yáng)的桂枝、附子，在于溫通陽(yáng)氣，使溫陽(yáng)而有生化之源，滋陰藥得溫陽(yáng)藥相助則滋而不膩，微微生火，“少火生氣”，以鼓舞腎中真陽(yáng)。    綜上所述，桂皮醛進(jìn)入機(jī)體后通過(guò)作用于腎上腺，促使其釋放兒茶酚胺，使血漿中兒茶酚胺的濃度增高，間接促進(jìn)血中ACTH含量增加來(lái)改善腎陽(yáng)虛證，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以“陰中求陽(yáng)”的腎氣丸全方組水煎液中桂皮醛的含量最高，高于補(bǔ)陽(yáng)組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示腎氣丸“陰中求陽(yáng)”的配伍可能是通過(guò)桂皮醛提高血漿中兒茶酚胺的濃度來(lái)調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌以治療腎陽(yáng)虛證，桂皮醛可能是腎氣丸“陰中求陽(yáng)”的配伍在治療腎陽(yáng)虛證中的有效成分之一?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 沈自尹