酵母菌酒精發(fā)酵實(shí)驗(yàn)方案

1、實(shí)驗(yàn)方案酵母菌酒精發(fā)酵的條件研究學(xué) 院（部）： 生物與化學(xué)工程學(xué)院 專(zhuān) 業(yè)： 生物工程 學(xué) 生 姓 名： 學(xué) 號(hào)： 11018150 班 級(jí)： 生物工程二班 指 導(dǎo) 教 師： 肖連冬 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)和操作過(guò)程2、找到酵母菌發(fā)酵時(shí)的最優(yōu)條件二、 培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)方法及材料的確定1、 玉米粉的糖化方法玉米粉的糖化采用雙酶法，其工藝流程如下玉米粉  加水  液化  糖化  發(fā)酵  蒸餾  成品酒精試驗(yàn)中，發(fā)酵培養(yǎng)按照三角瓶100ml培養(yǎng)。本次工做20組是要，共需發(fā)酵液

2、20*100=2000ml。培養(yǎng)液按照100g玉米粉、300ml水。所以共需玉米粉700g。液化：取 玉米粉，加入的水，液化溫度為，值為，液化時(shí)間為，液化酶的添加量為  玉米粉糖化：糖化時(shí)的工藝條件為：糖化溫度為，值為，糖化時(shí)間為，糖化酶的添加量為 玉米粉。2、 活化培養(yǎng)基本實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)采用察氏(czapck)培養(yǎng)基的配制 ，配方如下表一：蔗糖NaN03K2HP04KClMgSO4·7H2OFeS04瓊脂蒸餾水pH3g0.3g0.1g0.05g0.05 g0.001 g1.5-2g100ml7表一3、 擴(kuò)大培養(yǎng)

3、基擴(kuò)大培養(yǎng)仍然用察氏(czapck)培養(yǎng)基，由于要用液體的，所以將其中的瓊脂配料去掉。4、 發(fā)酵培養(yǎng)基糖化液稀釋至l0%濃度，添加輔料（硫酸銨0.4%），pH5.5滅菌三、 培養(yǎng)基的制備及酵母的活化1、準(zhǔn)備酵母母菌一支常溫下存放一天，增加菌種的活力。在母菌存放期間制作各時(shí)期培養(yǎng)基2、準(zhǔn)備固體培養(yǎng)基（察氏培養(yǎng)基）50ml，做成8支試管斜面，擴(kuò)大培養(yǎng)基800ml（做擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)使用）。做成8個(gè)三角瓶，每瓶200ml。120滅菌30min。3、發(fā)酵液的制備（1）玉米粉的篩選實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備粉碎后的玉米粉700g。（2）玉米粉的液化按照100g玉米粉、300ml水的配比對(duì)玉米粉進(jìn)行液化，液化方案上文已經(jīng)交代。

4、在1000ml燒杯里，或者500ml燒杯分兩次，水浴液化。器材：燒杯500ml兩個(gè)，玻璃棒一個(gè)，水浴鍋一個(gè)，糖化酶0.225g步驟：1、將糖化酶，玉米粉，水按照比例配置好在燒杯里。2、將配好的玉米液放于水浴鍋中90液化3.5h。邊液化邊攪拌。（3）玉米粉的糖化將液化后的玉米液中按照0.3g/100ml加入液化液中。再在水浴鍋中，58糖化3.5h。（4）過(guò)濾糖化后的糖化液有可能有沒(méi)有徹底液化的玉米顆粒，會(huì)造成渾濁，這時(shí)需要對(duì)糖化液進(jìn)行過(guò)濾操作。操作步驟：最后與以上培養(yǎng)基一起進(jìn)行滅菌處理。滅菌時(shí)，清洗16支移液管，與培養(yǎng)基一起滅菌。（5）活化步驟器材：酒精燈，接種針，母菌，斜面培養(yǎng)基，消毒酒精。步

5、驟：1、將器材放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。對(duì)雙手合桌面進(jìn)行滅菌。對(duì)接種針進(jìn)行灼燒滅菌。2、在酒精燈旁按照無(wú)菌操作步驟在酒精燈火焰旁取下試管棉塞。3、將灼燒后的接種針伸入母菌試管取粘取少量母菌，粘取前將接種針?lè)庞谠嚬軆?nèi)壁，冷卻56s。4、按照無(wú)菌操作將取過(guò)母鐘的接種針移入活化試管內(nèi)并畫(huà)曲線(xiàn)。5在酒精燈火焰旁將試管棉塞塞上，塞前將棉塞燒一下。如此接種八支試管。并保存28培養(yǎng)2d。四、 酵母的擴(kuò)大培養(yǎng)器材：液體培養(yǎng)基，活化后菌種，酒精燈，接種針，消毒酒精。步驟：1、將器材放于試驗(yàn)臺(tái)上，并對(duì)雙手和桌面滅菌，接種針進(jìn)行灼燒滅菌。2、在酒精燈旁取下棉塞，并用接種針接種少量菌種于液體培養(yǎng)基內(nèi)。3、在酒精燈旁塞好棉塞，并于

6、28培養(yǎng)。根據(jù)發(fā)酵單因素的不同，確定培養(yǎng)時(shí)間。其中變量是菌齡的一瓶瓶號(hào)1、2要求培養(yǎng)時(shí)間分別為：對(duì)數(shù)期1：1516h，對(duì)數(shù)期2:1618h，緩沖期：2024h，穩(wěn)定期：2426h。其他菌種培養(yǎng)20h進(jìn)行接種。五、發(fā)酵培養(yǎng)1、 不同菌齡下的發(fā)酵器材：擴(kuò)大菌種的四個(gè)不同階段即對(duì)數(shù)期1：1516h，對(duì)數(shù)期2:1618h，緩沖期：2024h，穩(wěn)定期：2426h。移液管四個(gè)，酒精燈，發(fā)酵液，洗耳球。步驟：1、將對(duì)數(shù)期1的菌種和其他設(shè)備放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。2、用移液管按照發(fā)酵液的10%的比例移取擴(kuò)大培養(yǎng)液到發(fā)酵液中。3、塞好棉塞將發(fā)酵液放于30條件下培養(yǎng)2d。4、按照以上步驟將不同菌齡的擴(kuò)大菌種移接到發(fā)酵液中進(jìn)

7、行發(fā)酵培養(yǎng)。之后進(jìn)行酒精檢測(cè)。2、 不同菌量下的發(fā)酵器材：擴(kuò)大菌種，移液管四個(gè)，酒精燈，發(fā)酵液，洗耳球。步驟：1、將實(shí)驗(yàn)器材放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。2、用移液管移取8%的擴(kuò)大菌種到發(fā)酵液中。3、塞好棉塞，將發(fā)酵液存放于30條件下發(fā)酵2d。4、按照以上步驟，分別移取10%、12%、14%的擴(kuò)大菌種到發(fā)酵液中，30培養(yǎng)2d，之后進(jìn)行酒精檢測(cè)。3、 不同醪液濃度下的發(fā)酵器材：擴(kuò)大菌種，移液管四個(gè)，酒精燈，發(fā)酵液，洗耳球。步驟：1、將實(shí)驗(yàn)器材放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。2、用移液管移取10%的擴(kuò)大菌種到4個(gè)發(fā)酵液中。3、制作不同濃度的醪液，分別按照1:2,1:3,1:4，1:5。3、塞好棉塞，將四個(gè)發(fā)酵液三角瓶編號(hào)1、2、3

8、、4。將發(fā)酵液按照序號(hào)存放于30條件下發(fā)酵2d。4、對(duì)發(fā)酵后的發(fā)酵液進(jìn)行酒精檢測(cè)。4、 不同發(fā)酵時(shí)間下的發(fā)酵器材：擴(kuò)大菌種，移液管四個(gè)，酒精燈，發(fā)酵液，洗耳球。步驟：1、將實(shí)驗(yàn)器材放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。2、用移液管移取10%的擴(kuò)大菌種到4個(gè)發(fā)酵液中。3、塞好棉塞，將發(fā)酵液將四個(gè)發(fā)酵液三角瓶編號(hào)1、2、3、4。存放于30條件下發(fā)酵。按照序號(hào)分別培養(yǎng)2d、2.5d、3d、3.5d。4、對(duì)發(fā)酵后的發(fā)酵液進(jìn)行酒精檢測(cè)。6、 酒精檢測(cè)器材：蒸餾設(shè)備一套，200ml量筒4個(gè)，酒精檢測(cè)器一個(gè)，步驟：1、將100ml發(fā)酵液配制成200ml溶液于蒸餾燒瓶中。2、對(duì)200ml發(fā)酵液進(jìn)行蒸餾，蒸餾出100ml酒精溶液。3、

9、取一定量的蒸餾出的酒精溶液于試管中放于酒精檢測(cè)器中進(jìn)行酒精檢測(cè)并記錄數(shù)據(jù)，以上的四種發(fā)酵方法，均使用這種檢測(cè)方法。數(shù)據(jù)記錄于下表二中：表二瓶號(hào)1234S/%8101214產(chǎn)量H對(duì)數(shù)期1對(duì)數(shù)期2緩沖期穩(wěn)定期產(chǎn)量料液比1:21:31:41:5產(chǎn)量D/d22.533.5產(chǎn)量注：發(fā)酵溫度：T 發(fā)酵時(shí)間：D 接種量：S 菌齡：H進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)是，除變量以外，其他條件按照，T=30、S=10%、H=2024h、D=2d七、最優(yōu)條件的培養(yǎng)及最優(yōu)條件確定1、 以上四種最優(yōu)條件共同作用下的發(fā)酵器材：擴(kuò)大培養(yǎng)液2024h菌齡，發(fā)酵液，移液管，洗耳球步驟：1、將實(shí)驗(yàn)器材放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。2、用移液管移取8%的擴(kuò)大菌種到發(fā)酵液中。3、塞好棉塞，將發(fā)酵液存放于30條件下發(fā)酵2d。之后進(jìn)行酒精檢測(cè)，檢測(cè)方法與六中相同。2、 最優(yōu)條件的確定、八、實(shí)驗(yàn)進(jìn)程及任務(wù)按拍6/9：進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行儀器交接，同時(shí)取出母菌，進(jìn)行活化前的預(yù)處理。6/10：上午準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器和實(shí)驗(yàn)所用的藥品進(jìn)行滅菌處理和玉米粉的液化和糖化等，下午進(jìn)行活