中藥品質(zhì)整合評(píng)價(jià)方法研創(chuàng)

1、中藥品質(zhì)整合評(píng)價(jià)方法研創(chuàng) 目的與意義 中藥品質(zhì)的有效評(píng)價(jià)與其現(xiàn)代化發(fā)展息息相關(guān), 當(dāng)前以成分分析為主、 多個(gè)指標(biāo)共同監(jiān)控的方法 , 大多定性且彼此孤立, 與安全性有效性關(guān)聯(lián)不緊密 , 忽視了不同成分對(duì)整體藥效、 不同指標(biāo)對(duì)整體品質(zhì)的貢獻(xiàn)度問題 , 缺乏關(guān)聯(lián)臨床效用、 綜合多元評(píng)價(jià)方法的量化集成性指標(biāo)去科學(xué)全面地表征中藥品質(zhì)。 為了尋求解決中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)問題的新突破, 根據(jù)現(xiàn)行中藥控制管理模式的現(xiàn)狀和問題 , 本課題提出應(yīng)在當(dāng)前“找成分、測含量”的基礎(chǔ)上 , 將“聯(lián)效應(yīng)”納入其中 , 構(gòu)建基于化學(xué)成分分析和生物效應(yīng)檢測的中藥品質(zhì)整合評(píng)價(jià)方法效應(yīng)成分指數(shù) (Effect-constituent In

2、dex, ECI), 實(shí)現(xiàn)中藥標(biāo)準(zhǔn)關(guān)聯(lián)藥效、簡便可控,并指導(dǎo)個(gè)性化、精準(zhǔn)化評(píng)用藥。為此 , 課題以物質(zhì)基礎(chǔ)相對(duì)明確、藥效活性比較清楚且為臨床大宗藥材的黃連為模式藥, 對(duì) ECI 的構(gòu)建及應(yīng)用進(jìn)行了具體說明 , 以期為科學(xué)提振中藥品質(zhì)和療效提供策略支撐和技術(shù)示例。 內(nèi)容與方法 中藥 ECI 的構(gòu)建主要是針對(duì)藥效作用相對(duì)明確、 活性成分比較清楚的對(duì)象來開展, 本研究以臨床大宗藥材黃連為例 ,針對(duì)其傳統(tǒng)功效在臨床的應(yīng)用 , 確定效應(yīng)指標(biāo)及相關(guān)活性成分, 構(gòu)建不同效應(yīng)的黃連 ECI, 并探索將其應(yīng)用于不同等級(jí)、來源及產(chǎn)地的中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)中。具體內(nèi)容與方法如下： 文獻(xiàn)調(diào)研及前期研究工作基礎(chǔ)上確定黃連效應(yīng)指

3、標(biāo)及相關(guān)活性成分。收集不同來源、不同產(chǎn)地的黃連樣品多批并制備其水提物，采用高效液相法檢測不同批次黃連水提物中主要活性成分的含量。利用微量量熱法、MTTt測定黃連成分的藥效活性,為不同成分進(jìn)行藥效 權(quán)重分配。應(yīng)用多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)法構(gòu)建黃連 ECI,并通過不同批次藥材的總效 應(yīng)檢測對(duì) ECI 的藥效代表性進(jìn)行驗(yàn)證。采用 Delphi 法 , 為不同批次樣品進(jìn)行等級(jí)判別 , 將 ECI 應(yīng)用于不同等級(jí)、來源和產(chǎn)地樣品的品質(zhì)評(píng)價(jià)。 結(jié)果與結(jié)論 針對(duì)黃連清熱燥濕、 瀉火解毒的功效 , 通過文獻(xiàn)檢索調(diào)研基于該功效的傳統(tǒng)應(yīng)用及臨床新用, 結(jié)合課題組前期研究及相關(guān)機(jī)制研究,確定黃連效應(yīng)指標(biāo)為抗痢疾桿菌效應(yīng)及抗H

4、epG型田胞增殖效應(yīng),主要活性成分為小檗堿(berberine,BER) 、表小檗堿(epiberberine, EPI) 、黃連堿(coptisine, COP)巴馬汀(palmatine, PAL)和藥根堿(jatrorrhizine, JAT)。對(duì)不同批次黃連水提物的活性成分進(jìn)行了含量測定 , 結(jié)果顯示 , 五個(gè)成分含量x在0.00%24.64%范圍內(nèi)。以黃連抗痢疾才f菌效應(yīng)為藥效指標(biāo)，采用微量量熱法 , 考察不同成分的抗痢疾桿菌效應(yīng) , 采用 IC50 倒數(shù)歸一化法為各成分分配藥效權(quán)重 , 構(gòu)建黃連抗痢疾桿菌效應(yīng)成分指數(shù)： ECI 抗菌=3.1676*XBER+1.0842*XEPI+

5、5.2062* XCOP+0.0164*XPAL+0.1041*XJAT。測量不同批次黃連樣品在相同濃度下的相對(duì)抑菌率RI%,與ECI抗菌進(jìn)行相關(guān)性分析以對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證，相關(guān)性分析結(jié)果顯示RI%W ECI抗菌為顯著正相關(guān)關(guān) 系(R抗菌=0.987,*P<0.01), 表示ECI抗菌大，黃連抑菌效應(yīng)越好，說明ECI 抗菌能很好表征黃連抗痢疾桿菌活性。以黃連抗HepG2ffi胞增殖效應(yīng)為藥效指 標(biāo)，采用MTTt測定不同成分抗HepG農(nóng)田胞增殖的IC50,采用IC50倒數(shù)歸一化法 為各成分分配藥效權(quán)重，構(gòu)建黃連抗HepG2ffi胞增殖的效應(yīng)成分指數(shù)：ECI抗月中 瘤=3.7602*XBE

6、R+0.3687*XEPI+0.9718*XCOP +0.3862*XPAL+0.3564*XJAT不同批次黃連樣品抗HepG2ffi胞增殖效應(yīng)1/IC50與ECI抗月中瘤的相關(guān)性分 析結(jié)果顯示，1/IC50與ECI抗月中瘤為顯著正相關(guān)關(guān)系(R抗月中瘤=0.873,*P<0.01),即ECI抗月中瘤越大，1/IC50越大,IC50越小，抗HepG卸胞增殖效應(yīng)越好，說明ECI抗月中瘤能較好表征黃連抗HepG農(nóng)田胞增殖的活性。采用 Delphi 法 , 邀請(qǐng)專家為不同批次黃連樣品進(jìn)行等級(jí)評(píng)判 , 結(jié)果顯示兩次評(píng)審的一致性分別為74.36%和 76.07%,提示黃連藥材感官評(píng)價(jià)經(jīng)驗(yàn)在專

7、家群體內(nèi)的一致性合格 , 評(píng)價(jià)結(jié)果可作為不同批次黃連的等級(jí)分類。將黃連 ECI 抗菌與 ECI 抗腫瘤應(yīng)用于不同等級(jí)藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)中 , 發(fā)現(xiàn)通過ECI值(>0.95)能將一等品區(qū)分于其他等級(jí)藥材。在三等品黃連中，有的批次其 ECI 值并不低 (>0.9) ；而另外有的樣品兩種 ECI 值差異較大, 說明 , 性狀等級(jí)不優(yōu)的藥材其活性并不一定差 , 同一等級(jí)的藥材活性會(huì)具有較大差別 , 同一藥材的不同藥效活性也會(huì)有所差別。將黃連 ECI 抗菌與 ECI 抗腫瘤應(yīng)用于不同來源藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)中 , 發(fā)現(xiàn)味連 ECI 抗菌值整體略高于云連,ECI 抗腫瘤值在兩種黃連間無顯

8、著差異, 說明大部分味連在抗菌活性方面可能略優(yōu)于云連。 而云連 ECI 抗腫瘤值整體高于 ECI 抗菌值 , 說明云連可能更適用于抗腫瘤活性的應(yīng)用中。將黃連 ECI 抗菌與 ECI 抗腫瘤應(yīng)用于不同產(chǎn)地藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)中 , 發(fā)現(xiàn)道地產(chǎn)區(qū)黃連ECI 值與非道地產(chǎn)區(qū)無顯著差異, 其中非道地產(chǎn)區(qū)也產(chǎn)出了 ECI 抗菌與 ECI 抗腫瘤值均顯示較高的樣品 , 說明光以產(chǎn)區(qū)道地性來評(píng)判黃連藥材品質(zhì)的方法還缺乏一定證據(jù)力 , 非道地產(chǎn)區(qū)也能產(chǎn)出藥效活性俱佳的藥材。根據(jù)研究結(jié)果，可初步認(rèn)為ECI>0.95的黃連藥材品質(zhì)最優(yōu)，ECI在0.850.95的藥材品質(zhì)良好 ,ECI<0.7 的藥材

9、品質(zhì)較差。綜上 , 相較于單一的中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)方法,ECI 具有精準(zhǔn)可量化、 集成可重現(xiàn)、綜合可操作、 有效可適用的特點(diǎn)。 討論 當(dāng)前中藥標(biāo)準(zhǔn)與臨床有效性關(guān)聯(lián)不夠緊密 , 五大要素 “品、質(zhì)、 性、 效、 用” 研究彼此獨(dú)立、 相互割裂 , 零散而不系統(tǒng),“千藥一標(biāo)”的現(xiàn)象在中醫(yī)藥領(lǐng)域普遍存在, 隨后“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)熱”迅速蔓延2015年初 , 美國啟動(dòng)“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)研究計(jì)劃”全球 , 其核心思想和目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)因病而異的、 更加精確的個(gè)體化醫(yī)療, 這與中醫(yī)藥辨證論治、 同病異治的臨床治療理念靈犀相通。 中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)精準(zhǔn)化、 個(gè)體化的實(shí)現(xiàn) , 不僅是中醫(yī)臨床辨證用藥、 辨質(zhì)用藥的需求, 也是中醫(yī)藥在國際生

10、命科學(xué)變革中尋找新發(fā)展的重要契機(jī)。而本論文所提出的中藥效應(yīng)成分指數(shù), 便是在精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)推動(dòng)下、以臨床效用為導(dǎo)向建立中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的初步探索。 目前 ECI 的建立只選擇了黃連的抗菌和抗腫瘤兩種效應(yīng) , 作為一個(gè)關(guān)聯(lián)臨床效用的評(píng)價(jià)指標(biāo), 還需在未來構(gòu)建過程中考察更多功效, 盡量使具有代表性的效應(yīng)指標(biāo)都能納入評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)中 , 并更進(jìn)一步以體內(nèi)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)、臨床藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。作為中藥品 -質(zhì)-性-效-用一體化評(píng)控模式中的核心內(nèi)容,ECI 是化學(xué)成分分析與生物活性綜合加權(quán)的指標(biāo), 其構(gòu)建不僅以集成量化的形式解決了靠多指標(biāo)評(píng)價(jià)中藥品質(zhì)時(shí)出現(xiàn)的指標(biāo)間相悖結(jié)果難以評(píng)價(jià)藥材品質(zhì)差異的問題 , 并且不增加施行

11、難度, 應(yīng)用中能僅通過測定成分含量而體現(xiàn)中藥“質(zhì)、效、用” 。因此 ,ECI的構(gòu)建對(duì)象也主要是藥效作用相對(duì)明確、活性成分較為明晰的中藥, 并非所有中藥都適用 , 在實(shí)際應(yīng)用中需先對(duì)中藥物質(zhì)內(nèi)涵和藥效活性進(jìn)行具體解析。論文采用 Delphi 法 , 證實(shí)了傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別方法通過性狀評(píng)價(jià)黃連等級(jí)具有一定重現(xiàn)性。 但是 , 依然有個(gè)別樣品等級(jí)的二次評(píng)價(jià)一致率不高的情況 , 這可能對(duì)藥材等級(jí)的最終評(píng)價(jià)結(jié)果造成一定誤差； 同時(shí) , 一等和二等的藥材批次不夠多 ,尤其是二等品黃連只有一批, 且藥效活性低于某些三等品 , 難以確定是個(gè)別藥材代表性不足亦或經(jīng)驗(yàn)鑒別有偏差導(dǎo)致, 因此在將來研究中 , 需要收集更大樣本量、更具代表性的藥材樣品予以確認(rèn)。 創(chuàng)新點(diǎn) 首次提出并構(gòu)建了基于化學(xué)成分分