清胃散中鹽酸巴馬汀等成分的含量測定

1、清胃散中鹽酸巴馬汀等成分的含量測定【摘要】 目的 比較在清胃散合煎液和分煎液中鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿及芍藥苷的含量。方法 采用HPLC測定在清胃散合煎液和分煎液中鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿及芍藥苷的含量和對常用菌種進行常規(guī)瓊脂擴散管碟法定性測定。結(jié)果與結(jié)論 分煎液中鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿含量均為合煎液中相應(yīng)成分含量的2.73倍，而分煎液芍藥苷含量為合煎液中相應(yīng)成分含量的1.17倍。 【關(guān)鍵詞】 清胃散；鹽酸巴馬??；鹽酸藥根堿；芍藥苷 Determination the content of palmatine hydrochloride, jatrorrhizine hydrochloride a

2、nd paeoniflorin in different decoctions of Qingwei San SHAO Jin-ming,CAO Pei-xue,LIANG Guang-yi，et al.The Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences,Guiyang 550002，China 【Abstract】 Objective To compare the content of palmatine hydrochloride,

3、jatrorrhizine hydrochloride and paeoniflorin inthe mixed decoction and the separateddecoction and the antibacterialexperimentsof Qingwei San.Methods The three components was determined by HPLC and the qualitative test by the general agar of diffused cup-plate method and the quantitative assay by the

4、 test-tube method in the antibacterialexperiments Results The average content of the palmatine hydrochlorideand the jatrorrhizine hydrochloridewhich was the more 2.73times inthe separateddecoctionthan in the mixed decoction, and the paeoniflorinwas only 1.17 times in the separateddecoctionthan in th

5、e mixed decoction.Conclusion The resuls of this experiment for Qingwei San which is provided reference to clinic use. 【Key words】 Qingwei San;palmatine hydrochloride；jatrorrhizine hydrochloride; paeoniflorin 清胃散出自脾胃論，由黃連、當(dāng)歸、生地、丹皮、升麻等5味中藥組成。主治胃火牙痛。用分煎法與合煎法制備的中藥復(fù)方湯劑，其有效成分含量、藥理作用有何變化，一直是中醫(yī)藥理論和臨床實踐中值得探討

6、的課題，本論文以中藥經(jīng)方清胃散中的有效成分鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿及芍藥苷作為考察指標，比較該方用合煎法與分煎法制得的湯劑中有效成分含量，探索中藥復(fù)方湯劑不同制法對其有效成分溶出量影響。 1 實驗處方、儀器和藥品與試劑 1.1 實驗處方1 黃連6g，當(dāng)歸6g，生地6g，丹皮9g，升麻9g。 1.2 儀器 美國惠普HP1100型高效液相色譜儀，HP1100/ WIND3D 化學(xué)工作站。 DAD 檢測器。 1.3 藥品與試劑 黃連為毛茛科黃連(Coptis chinensis Franch.)根莖，產(chǎn)地四川；當(dāng)歸為傘形科當(dāng)歸Angelica sinensis (Oliv.) Diels根，產(chǎn)地甘肅；

7、生地為玄參科生地(Rehmannia glutinosa Libosch.)塊根，產(chǎn)地河南；丹皮為毛茛科牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)根皮，產(chǎn)地安徽；升麻為毛茛科升麻(Cimicifuga foetidaL.)根莖，產(chǎn)地遼寧；經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院何順志教授鑒定且符合2005版中國藥典一部收載。鹽酸巴馬汀對照品（批號7329906）,鹽酸藥根堿（批號7339906）芍藥苷對照品(批號110736-200422)，購于中國藥品生物制品檢定所。乙腈(色譜純)，水(重蒸)，其余試劑均為分析純。 2 單味藥中鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿及芍藥苷的含量測定2 按照2005版藥典一部測定黃

8、連生藥中鹽酸小檗堿的含量的方法測得黃連生藥中鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿的含量分別為2.45，1.35%；同樣按照2005版藥典一部測定白芍中芍藥苷的含量的方法測定丹皮中芍藥苷的含量為0.868%。 3 樣品的制備 3.1 合煎液干膏的制備 按實驗處方稱取藥材飲片，加8.5倍水3，浸泡30min，頭煎保持微沸20min， 倒出煎液；藥渣再加4.5倍量的水煎煮15min，倒出煎液，藥渣以50ml水水洗3次，合并所有藥液，減壓濃縮回流至近干，真空減壓干燥得干膏，出膏率見表1。 3.2 分煎液干膏制備 分別稱取單味藥材，按合煎液制法，制備各單味藥材飲片配方顆粒，并計算干膏率（表1）。根據(jù)出膏率換算并稱取相

9、當(dāng)于飲片合煎液組成藥材用量的各單味藥材配方顆粒，混勻，得配方顆粒湯劑干膏(湯劑分煎液干膏)。表1 合煎液出膏率和分煎液中單味藥的出膏率百事通 4 方法 4.1 色譜條件 Hypersil C18色譜柱，流速為1.0ml/min，鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿的流動相為乙腈-0.08%磷酸二氫鉀水溶液（含0.08%三乙胺，7% 四氫呋喃，以磷酸調(diào)pH 至3）（3070），檢測波長346 nm，柱溫25 ；芍藥苷的流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液（1585），檢測波長230 nm，柱溫35 。 4.2 標準曲線制備 分別精密稱取適量鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿對照品，以鹽酸-甲醇(1:100) 溶解并配制成溶液

10、，另精密稱取適量芍藥苷對照品，以70%甲醇溶解并配制成溶液，3種對照品溶液再分別稀釋成6個不同濃度，不同濃度的同種對照品溶液進樣相同體積，按相應(yīng)色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值（A）對含量（C）作線性回歸得測定結(jié)果見表2。 表2 線性關(guān)系測定結(jié)果 4.3 精密度試驗 在各自色譜條件下對3種對照品溶液分別重復(fù)進樣6 次，進樣體積相同，三者峰面積RSD分別為0.60%，0.61%，0.50%。 4.4 穩(wěn)定性試驗 按各自合煎樣品含量測定方法制備樣品供試液，精密吸取同一樣品供試液，每隔一定時間進樣，按相應(yīng)色譜條件測定鹽酸鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿及芍藥苷含量，各測6次，RSD分別為1.0%，1. 0%

11、，0.50%；表明3個成分分別在18h，18h，24h內(nèi)穩(wěn)定。 4.5 重復(fù)性試驗 取同一批干膏，按合煎樣品含量測定方法制備樣品供試液，平行制備6份樣品液，同法測定，用外標法計算鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿及芍藥苷含量，在飲片合煎液中3個成分RSD分別為0.81%，1.7%，0.50%；在分煎液中3個成分RSD分別為1.8%，1.1%，1.1%。 4.6 回收率試驗 精密稱取已知含量的合煎液干膏，分別加入樣品中對應(yīng)成分總含量80、100、120的對照品各3份，按各自含量測定方法制備樣品供試液，同法測定。測得鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿及芍藥苷的平均回收率為98%，98%，99%；RSD分別為1.2%，1.

12、4%，1.1%。 5 合煎與分煎中的含量比較 5.1 用于鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿測定的樣品供試液制備 5.1.1 合煎液的制備 精密稱取合煎湯劑干膏粉0.15g，置25ml量瓶中，加鹽酸-甲醇(1:100)略低于25ml，超聲處理15min，取出，冷至室溫，以鹽酸-甲醇(1:100)定容至刻度，搖勻，再從中精密吸取5ml于10ml量瓶中，以相同溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45m濾膜，備用。 5.1.2 分煎液的制備 精密稱取相當(dāng)于5.1.1合煎液用量的分煎液干膏粉末置25ml量瓶中，同上法處理，即得。 5.2 測定芍藥苷的樣品溶液的制備 5.2.1 合煎液的制備 精密稱取合煎液干膏粉0.1g，置25ml量瓶中，精密加入70%甲醇，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45m濾膜，濾液備用。 5.2.2 分煎液的制備 精密稱取相當(dāng)于5.2.1用量分煎液干膏粉，置25ml量瓶中，同法操作。 5.3 含量測定結(jié)果 精密吸取適量的樣品供試液，分別按鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿和芍藥苷色譜條件平行測定6次，3成分在復(fù)方生藥中的平均百分含量見表3。表3 清胃散中鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿 6 討論 分煎中鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿的含量比合煎中的含量高2.73倍，說明有明顯