穴位埋線對慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜的影響

1、穴位埋線對慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜的影響         11-02-25 10:44:00     編輯：studa20                  作者：李素荷,黃德裕,唐純志,黃康柏,劉芳, 【摘要】  【目的】觀察穴位埋線療法對慢性萎縮性胃炎(CAG)模型大鼠胃黏膜的影響。【方法】將9

2、0只SD大鼠隨機分為空白對照組、模型組、埋線組、針刺組,后3組采用20 mmol/L去氧膽酸鈉、0510 g/L氨水、05 g/L吲哚美辛和體積分數(shù)40%酒精等綜合方法復制大鼠CAG模型。埋線組選取足三里、中脘、胃俞穴進行穴位埋線,每2周治療1次;針刺組取穴同埋線組,每天治療1次,2組共治療12周。治療結(jié)束后觀察穴位埋線對模型大鼠體質(zhì)量、胃液量、胃液游離酸、總酸度、總酸排量的影響,并在光學顯微鏡下觀察各組胃黏膜的病理形態(tài)?！窘Y(jié)果】治療結(jié)束后,空白對照組、針刺組、埋線組體質(zhì)量與模型組比較差異均有顯著性意義(P<005);空白對照組、針刺組和埋線組的胃液量、游離酸度、總酸度及總酸排量均高于模

3、型組(P<005);針刺組和埋線組胃黏膜病理形態(tài)均有明顯改善。 【結(jié)論】穴位埋線療法對CAG的治療作用可能與其能促進胃液分泌、改善胃黏膜病理形態(tài)變化有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  萎縮性胃炎,慢性/針灸療法;胃黏膜/病理學;疾病模型,動物;大鼠;穴,足三里;穴,中脘;穴,胃俞慢性萎縮性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)是指不同病因引起的慢性胃黏膜萎縮性病變1-3,是以胃黏膜變薄,上皮細胞變形,固有膜炎性反應和固有腺體萎縮為其病理特點。本病發(fā)病率高,病情復雜,尤其伴有不典型增生和腸上皮化生,是胃癌前狀態(tài)最常見的一類。目前認為CAG的發(fā)生與幽門螺桿菌(HP)

4、感染、膽汁返流、免疫、年齡、高鹽、過熱、低維生素飲食及遺傳因素等有關(guān),是多種因素綜合作用的結(jié)果4-5,所以在治療上有一定的困難。CAG是世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的首批43種針灸適應癥之一。本實驗觀察了穴位埋線對CAG大鼠胃黏膜的影響,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。1材料與方法11實驗動物90只SPF級8周齡SD大鼠(由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供,許可證號：SCXK(粵)20080020，粵監(jiān)證字2008A002,雌雄各半,體質(zhì)量180220 g,采用架式籠養(yǎng),恒溫(20±1),濕度50%60%,光照黑暗各12 h交替,自動通風815次/h條件下飼養(yǎng)。12主要試劑及儀器20 mmol/L去氧

5、膽酸鈉(國藥集團化學試劑有限公司,批號：F20090417),0510 g/L氨水(廣東光華化學廠有限公司,批號：20090410),05 g/L吲哚美辛(廣東華南藥業(yè)集團有限公司,批號：國藥準字H44020701),001 mol/L NaOH(廣州市新成精細化工有限公司,批號：080529)。穴位埋線器具選擇：(1)針具：6號一次性注射針頭(浙江京環(huán)醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn)),華佗牌30號15寸不銹鋼毫針(蘇州醫(yī)療用品廠)。(2)埋植用羊腸線：0000號鉻制羊腸線(上海浦東金環(huán)醫(yī)療用品有限公司)。采用BX50型熒光顯微鏡(日本Olympus生產(chǎn))。13模型復制所有實驗動物用標準飼料喂養(yǎng)1周后按

6、體質(zhì)量編號,采用隨機數(shù)字表法設立空白對照組20只(空白對照組正常飼養(yǎng),不予造模,每天給予等容積生理鹽水灌胃)。其他大鼠參考文獻方法6略加改進,復制大鼠慢性萎縮性胃炎動物模型：以體積分數(shù)40%酒精于每周一空腹灌胃1次,每次8 mL/kg;20 mmol/L去氧膽酸鈉灌胃,每天上午1次,每次8 mL/kg;0510 g/L氨水作為大鼠日常飲用水自由飲用,并記錄每天飲用量;05 g/L吲哚美辛灌胃,每天下午1次,每次8 mL/kg;并配以饑飽失常法,單日禁食,自由飲水,雙日足量喂食;每周測體質(zhì)量1次,從12周開始每隔4周經(jīng)隨機選取2只大鼠宰殺,取胃黏膜于光鏡下查看慢性萎縮性胃炎動物模型復制是否成功。

7、4動物分組與治療將造模成功動物60只(殺檢8只,造模過程中死亡2只)按照隨機數(shù)字表法分為模型組、針刺組、埋線組各20只。埋線組選取大鼠“足三里”、“中脘”、“胃俞”穴。將05 cm長的羊腸線從6號注射針頭的針尖處裝入針體(此時注射針頭內(nèi)作為針芯的30號15寸不銹鋼毫針稍退后),線頭與針尖內(nèi)緣齊平,背腰部穴位在局部下方向上平刺,下肢穴位直刺,刺至所需深度,邊推針芯,邊退針管,將羊腸線埋植于穴位皮下組織或肌層內(nèi),線頭不外露,消毒針孔,外敷無菌敷料,膠布固定24 h。每2周治療1次,共治療12周。針刺組取穴同埋線組,腹部穴位向上平刺,背腰部穴位在局部下方向上平刺,下肢穴位直刺,刺至所需深度,得氣后留

8、針20 min,每天治療1次,共治療12周。模型組造模后只抓取,不治療;空白對照組正常喂養(yǎng)。15一般狀態(tài)觀察對各組大鼠的體質(zhì)量、毛色、精神狀態(tài)及活動情況進行觀察、對照。16胃液采集方法治療結(jié)束后各組隨機抽取大鼠(空白對照組10只,其他3組各12只)進行胃液采集。方法：不禁水,禁食24 h,乙醚麻醉下,仰臥固定于手術(shù)板上,沿劍突下腹白線剪開約25 cm小口,將胃輕輕拉出,用縫線結(jié)扎幽門與十二指腸結(jié)合部,縫合腹壁切口。2 h后拆線打開腹腔,結(jié)扎賁門后取出全胃。用濾紙擦凈血跡,沿胃大彎剪開胃腔,傾出內(nèi)容物,收集于刻度離心管中,再以3000 r/min離心15 min,吸取上清液,計算胃液量后,留待胃

9、液分析用(術(shù)中埋線組大鼠死亡1只)。17胃酸度及總酸排出量測定取上清胃液l mL,加托佛氏及酚紅指示劑各2滴,用堿式滴定管慢慢用001 mol/L NaOH滴定,同時不斷搖動,恰至紅色消失,出現(xiàn)姜黃色為止,即為游離酸滴定終點,記錄用去的NaOH溶液量,繼續(xù)用NaOH滴定直至轉(zhuǎn)為紅色且2 s內(nèi)不消失為止,即為總酸度滴定終點,記錄用去2次滴定所消耗的NaOH溶液總量,計算胃液總酸度及1 h總酸排出量：游離酸度(mEq/L)=游離酸滴定終點所耗的NaOH溶液毫升數(shù)×10;總酸度(mEq/L)=2次滴定所耗的NaOH溶液總毫升數(shù)×10;總酸排出量(mol/h)=總酸度×每

10、小時胃液量)。18胃黏膜大體觀察和光學顯微鏡觀察對剪開的胃腔做大體觀察,包括黏膜的色澤、彈性、皺襞多少。然后在賁門、胃小彎、胃竇及幽門部,分別取胃全層1塊,約3mm×5mm,體積分數(shù)10%福爾馬林溶液固定,石蠟包埋,切片,蘇木素伊紅染色(HE染色),置光鏡下觀察,并進行顯微攝影。19統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)采用SPSS 130統(tǒng)計分析軟件進行處理。2結(jié)果21各組一般狀態(tài)觀察表1結(jié)果表明：造模完成后,CAG大鼠體質(zhì)量與空白對照組大鼠比較差異有顯著性意義(P<005);治療結(jié)束后,空白對照組、針刺組、埋線組體質(zhì)量與模型組比較差異均有顯著性意義(P<005)。雖然治療前后,針刺組大鼠平均

11、體質(zhì)量均較埋線組要輕,但2組比較差異無顯著性意義(P>005)。從毛色上看,模型組大鼠毛色灰暗,無光澤,活動緩慢,萎靡,攝食量減少,常有大便稀溏;經(jīng)治療12周后,針刺組和埋線組大鼠毛色均較模型組有光澤,攝食量增多,活潑好動,大便成形,其中針刺組雌鼠體質(zhì)量稍偏輕。表1穴位埋線對慢性萎縮性胃炎大鼠體質(zhì)量的影響22穴位埋線對慢性萎縮性胃炎大鼠胃液、胃酸分泌的影響表2結(jié)果表明：幽門結(jié)扎2 h后,空白對照組、針刺組和埋線組胃液量、游離酸度、總酸度及總酸排量均高于模型組(P<005);但針刺組、埋線組、空白對照組3組之間兩兩比較差異無顯著性意義(P>005)。表2穴位埋線對慢性萎縮性胃炎大鼠胃液的影響23各組大鼠胃黏膜大體及光鏡觀察結(jié)果肉眼所見：空白對照組胃黏膜表面光滑,無糜爛，黏膜皺襞規(guī)整;模型組胃黏膜表面光滑,皺襞低平、稀少,甚至消失,胃黏膜明顯變薄;針刺組和埋線組胃黏膜表面尚光滑,黏膜皺襞規(guī)整,與空白對照組無明顯差異。光鏡下觀察：空白對照組大鼠胃黏膜完整,未見胃黏膜上皮細胞形態(tài)異常,腺體排列密集規(guī)則,大小形態(tài)較一致,細胞呈單層柱狀,腺上皮和腺管分界清楚,未見腺體萎縮、變形和壞死等病理改變;固有膜、黏膜層、黏膜下層、肌層和漿膜層無水腫,無明顯炎細胞浸潤。模型組與空白對